香水魚調料中多種有機磷農藥殘留的測定

韓梅，易勝國，楊嘵鳳，侯雪，羅曉梅

（四川省農業科學院分析測試中心，四川成都610066）

香水魚調料中多種有機磷農藥殘留的測定

韓梅，易勝國，楊嘵鳳，侯雪，羅曉梅

（四川省農業科學院分析測試中心，四川成都610066）

建立凝膠滲透色譜凈化-氣相色譜法測定香水魚調料中的14種有機磷農藥殘留的方法。樣品中的有機磷農藥用乙腈提取，凝膠滲透色譜凈化,經毛細管柱（DB-1701P，30 m×0.25 mm×0.25 μm）分離，氣相色譜-火焰光度檢測器（FPD）檢測。方法檢出限為0.0026 mg/kg～0.033 mg/kg;相對標準偏差（n=5）為1.0%～12.6%;14種有機磷農藥平均回收率在75.82%～123.50%，該方法能滿足香水魚調料中有機磷農殘測定的要求。

凝膠滲透色譜；氣相色譜；有機磷農藥殘留；香水魚調料

Abstract:A gas chromatographic method was established for determination of 14 organophosphous pesticide residues in spicy boiled fish seasoning with gel permeation chromatography (GPC)clean-up.The pesticide residues were extracted from samples with acetonitrile and purified with GPC column,then separated by a capillary column（DB-1701P,30 m×0.25 mm×0.25 μm）with flame photometric detector(FPD),the limits of detection of this method ranged from 0.0026 mg/kg-0.033 mg/kg.The recoveries of 14 organophosphous pesticides in spicy boiled fish seasoning ranged from 75.82%-123.50%and the RSDs(n=5)of recoveries were ranged in 1.0%-12.6%.Therefore,this method can satisfy the requirements for the analysis of organophosphous pesticide residues in the spicy boiled fish seasoning samples.

Key words：gel permeation chromatography;gas chromatography;multi-organophosphrous pesticides residues;spicy boiled fish seasoning

有機磷農藥作為一種殺蟲劑、殺螨劑，被廣泛地使用在農業生產中[1]，它們會殘留在組成香水魚調料的各種成分之中，如豆瓣、菜籽油、辣椒、香辛料等。同時某些生產者在運輸、加工、儲藏過程中為了防蚊蠅、防腐敗等原因，非法使用有機磷農藥，造成農藥殘留，危害人體健康，因此有必要對調料中的有機磷農殘進行監測。但關于調料中有機磷農藥殘留量檢測方法的研究卻少見文獻報道。目前食品中多種有機磷農藥的測定方法主要有氣相色譜法[2]、氣質法[3]，其中樣品前處理方法大多采用丙酮等極性溶劑作為提取溶劑，對于含油脂、色素、香料等復雜基質的香水魚調料的農殘測定會出現較大的干擾，且嚴重污染儀器。而采用凝膠滲透色譜技術（GPC）可除去油脂、色素等物質[3-9]，凈化樣品溶液。因此，本文采用了凝膠色譜柱凈化樣品溶液，建立了氣相色譜FPD檢測器測定香水魚調料中多種有機磷農藥殘留方法，樣品色譜圖中14種有機磷農藥能達到良好分離，大大降低背景雜質干擾，降低儀器污染程度，且方法簡單、準確、回收率好。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

美國AgiLent7890A氣相色譜儀：配有FPD檢測器、7683B自動進樣器；凝膠滲透色譜儀：美國J2 Scientific，配有內充Bio-BeadsS-X3玻璃柱（22g，20cm×2 cm）；旋轉蒸發儀：瑞士 Büchi；HY－5 回旋振蕩器：常州國華電器有限公司;香水魚調料樣品產自四川。

丙酮、乙腈、均為色譜純；乙酸乙酯、環己烷為分析純，去離子水；氯化鈉為分析純；甲胺磷等14種農藥標準購于北京中國標準技術開發公司標樣開發部,均為100 mg/L。

有機磷標準溶液的配制：準確吸取100 mg/L單一標液各1 mL，置于50 mL容量瓶中，用丙酮稀釋定容至刻度，此混合儲備液濃度為2.0 mg/L。根據實驗需要，用丙酮稀釋成不同濃度的混合標準使用液。

1.2 色譜條件

色譜柱：DB-1701P石英毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm），載氣為氮氣（純度>99.999%），流量2.0mL/min。空氣流量120 mL/min，氫氣流量75 mL/min。柱溫：初溫100℃不保持，以25℃/min升至200℃，再以10℃/min升至240℃保持10 min。進樣口溫度230℃；檢測器溫度250℃；尾吹為氮氣60 mL/min。進樣方式為不分流進樣；進樣量1.0 μL。

1.3 方法

1.3.1 試樣提取及濃縮

稱取經均質化處理的15.00 g試樣，置于250 mL具塞錐形瓶中，加入15 mL水，再加入乙腈30 mL，在振蕩器上振搖30 min，過濾，濾液收集于盛有5 g～7 g氯化鈉的50 mL具塞比色管中，振搖1 min，靜置分層2 h。準確吸取10 mL乙腈溶液（上層）置100 mL旋蒸瓶中，40℃水浴減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯+環己烷（1+1）10.0 mL的混合溶液溶解殘渣，過0.45 μm濾膜，供凝膠凈化。

1.3.2 GPC凈化

流動相為環己烷+乙酸乙酯（1+1），流速為4.7mL/min，進樣量為5.0 mL。收集10 min～16 min流出的組分于旋蒸瓶中，40℃蒸發至近干，用丙酮準確定容到2.5 mL，供氣相色譜測定。

1.3.3 標準系列制備方法

分別吸取 0.25、0.5、1.0、3.0、5.0 mL 混合標準儲備液（2.0 mg/mL）于10 mL容量瓶中，用丙酮稀釋定容至刻度，配成 0.05、0.1、0.2、0.6、1.0 μg/mL 的標準使用液。按照1.2色譜分析條件進行測定，進樣量1.0 μL。

2 結果與討論

2.1 氣相色譜條件的選擇

根據有機磷農藥的理化性質，試驗了具有中等極性的毛細管柱 DB-1701（30 m×0.32 mm×0.25 μm)、DB-50+（30 m×0.25 mm×0.25 μm）、DB-XLB（30 m×0.25 mm×0.25 μm）、DB-1701P（30 m×0.32 mm×0.25 μm）對有機磷的分離效果，結果表明DB-1701P柱分離效果好，峰形較好，能滿足定量分析的要求。另外本文對進樣口、檢測器、程序升溫速率等色譜條件進行優化，得到了1.2的色譜條件，在此條件下得到的標準譜圖見圖1。

2.2 樣品預處理條件的選擇

食品中的有機磷農藥通常采用單一極性有機溶劑如丙酮[2]、乙酸乙酯[4，6]、乙腈[7-8]，也有采用混合溶劑如乙腈+水[3]方式提取。由于香水魚調料的基質復雜，用丙酮、乙酸乙酯提取時，會提取出大量的油脂、辣椒色素等雜質，給下一步的提純帶來困難；用乙腈作為提取溶劑既能保證充分提取農藥，又能減少對油脂等雜質的共提取[3,7-8]。其次，因樣品含水量很少，提取時需加入一定量的水。經試驗選用V（樣品）∶V（水）∶V（乙腈）=1∶1∶2作為該樣品中農藥組分的提取劑,既能得到高的提取效率,又能在很大程度上降低油脂肪和香辛類物質對分析的干擾。由于不同的提取、過濾方式對結果沒有顯著性的影響，本文采用傳統的振蕩提取和濾紙過濾方式，操作簡單、實用。

2.3 GPC凈化條件的選擇

在凝膠滲透色譜（GPC）中[9]，大分子的蛋白質、油脂、色素（葉綠素、葉黃素）、生物堿、聚合物等先被淋洗出來，農藥等相對分子質量較小如甲胺磷后被淋洗出來。這種分離特點正好為含有復雜基質的香水魚調料中農藥殘留檢測提供了一種很好的凈化途徑。為了確定有機磷農藥在GPC柱（Bio-Beads SX3）上的流出規律，取1.0 mL的1.0 mg/mL 14種有機磷農藥混和標樣，包括分子量較小的甲胺磷，分子量較大的亞胺硫磷，用乙酸乙酯+環己烷（1+1）定容10.0 mL，按1.3.2的條件上GPC。先初篩，棄去前面7 min,從8 min開始收集8 min～10 min﹑11 min～13 min﹑14 min～16 min﹑17 min～19 min 4個片段。試驗結果顯示前3個片段有農藥流出，再細篩，從8 min開始到16 min，每1分鐘收集一個片段，結果顯示從9 min～15 min檢出有機磷農藥，而空白基質試驗中，油脂、色素等雜質在9 min之前基本流出，考慮凝膠色譜柱有拖尾情況發生，最后將GPC收集時間確定為9 min～16 min，共7 min，收集流出液32.9 mL。

2.4 方法的線性關系與檢出限

14種有機磷在上述色譜條件下，按1.3.3進行色譜分析，得到峰面積與濃度作的校正曲線，獲得線性回歸方程及相關系數，以3倍信噪比計算14種農藥的檢出限，結果見表1。

表1 14種有機磷農藥的線性回歸方程、相關系數、檢出限Table 1 Regression equation,Correlation coefficients and Limits of detection of 14 organophosphorus pesticidesq

從表1可看出在測定范圍內，有機磷峰面積（A）與濃度（C）成良好的線性關系，相關系數除亞胺硫磷外均在0.999以上，能滿足定量分析要求。

2.5 方法的準確度和精密度

在一香水魚調料中加入14種有機磷農藥的混和標準溶液（添加水平為 0.05、0.1、0.2 mg/kg）,按本法測定，每個水平重復5次，進行加標回收實驗，得到14種有機磷農藥的回收率及相對標準偏差，結果見表2。

表2 14種有機磷在香水魚調料中的添加回收率及相對標準偏差Table 2 Recoveries and precision of 14 organophosphorus pesticides in spicy boiled fish seaning samples

續表2 14種有機磷在香水魚調料中的添加回收率及相對標準偏差Continue table 2 Recoveries and precision of 14 organophosphorus pesticides in spicy boiled fish seaning samples

空白樣品及香水魚調料加標回收色譜圖見圖2、圖3。從表2可以得出：添加水平為0.05 mg/kg的有機磷農藥的平均回收率為75.82%～122.64%，相對標準偏差RSD（n=5）為1.0%～12.6%;添加水平為0.1 mg/kg有機磷農藥的平均回收率為77.83%～112.25%，RSD（n=5）為1.9～9.3；添加水平為0.2 mg/kg有機磷農藥的平均回收率為 81.40%～123.55%，RSD（n=5）為 1.9%～9.4%；方法具有較好的準確度及精密度，同時從空白樣品色譜圖和添加回收色譜圖（圖2、圖3）可看出14種農藥與基質干擾物能夠較好地分離，且峰形對稱。

3 結論

本文采用GPC凈化除去了香水魚調料基質中一些大分子量的基質共提物，獲得了較滿意的凈化效果，采用GC-FPD檢測，方法簡便、靈敏，可操作性強，可以滿足各種香水魚調料中多種農藥殘留分析的要求。此外，在實驗中發現毒死蜱添加回收偏低，其原因可能是基質效應，因為基質效應顯著存在于有機磷農藥的測定過程中[10]，既使樣品經過GPC凈化，也可能存在基質效應。關于有機磷農藥在調料基質中的基質效應有待進一步研究。

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Determination of Muti-Organophosphrous Pesticide Residues in Spicy Boiled Fish Seasoning

HAN Mei,YI Sheng-guo,YANG Xiao-feng,HOU Xue,LUO Xiao-mei
（Testing Center of Sichuan Academy of Agricultural Sciences,Chengdu 610066,Sichuan,China）

2011-11-22

韓梅（1969—），女（漢），副研究員，碩士研究生，主要從事食品檢驗工作。