TSHR、HPV16 E6蛋白在老年宮頸癌組織中表達及與疾病發生發展的關系

張娟 李娜娜 陳蕊 李國浩 沈承承 王鴻雁

(濟南市婦幼保健院 1婦產科，山東 濟南 250000；2產科病房；3山東省衛生健康宣傳教育中心健康促進科；4山東省精神衛生中心兒童青少年二病區；5濟南市婦幼保健院婦科；6山東大學)

宮頸癌是女性最常見的生殖道惡性腫瘤之一，近年來年輕患者的發病率持續上升，嚴重影響女性的健康〔1〕。宮頸癌的發生及治療越來越受重視，其發病是多種因素綜合作用的結果，與早婚、早育、多產、病毒感染有關。隨著分子病毒學發展，有研究發現，人乳頭瘤病毒(HPV)是引起宮頸癌的重要致病因子〔2〕。其中HPV16 E6基因能編碼具有轉化活性的原癌蛋白質，可誘發強烈的T細胞效應，對宮頸癌病變至關重要〔3〕。按與癌癥發生的關系將HPV分為低危型、中危型和高危型，E6、E7作為HPV16主要的致癌基因，可使抑癌基因失活，激活原癌基因，破壞細胞周期，導致細胞增殖和凋亡失調，導致腫瘤形成〔3〕。促甲狀腺激素受體(TSHR)是調控甲狀腺細胞生長、分化的主要受體，在肺癌、結腸癌、前列腺癌等腫瘤組織中高表達〔4〕。已有研究表明，TSHR和HPV16可能在宮頸癌發生中起協同作用，共同參與疾病發生發展。目前關于其在宮頸癌組織中表達情況的相關研究還較少，本研究通過檢測宮頸癌腫瘤組織HPV16 E6蛋白及TSHR蛋白表達情況，旨在探討其與宮頸癌發生發展的關系。

1 資料與方法

1.1臨床資料 收集2013年12月至2015年6月濟南市婦幼保健院手術切除的宮頸癌組織標本102例為研究組，平均年齡(68.69±5.48)歲，病理標本均經病理科確診為鱗癌組織。納入標準：①診斷符合國際婦產科聯合會(FIGO)分類標準和世界衛生組織(WHO)分級標準〔5〕的鱗狀宮頸癌患者；②患者術前未接受放射治療、化療及生物免疫治療；③患者及家屬簽署知情同意書。排除嚴重肝、腎疾病、糖尿病患者。收集宮頸炎組織標本100例為對照組，平均年齡(67.52±4.68)歲。兩組年齡無統計學差異(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1樣本采集 所有宮頸組織于離體后30 min內取材，-80℃保存。

1.2.2HPV16 E6蛋白及TSHR蛋白表達情況檢測 利用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素過氧化物酶(SP)法檢測所有受試者宮頸組織TSHR和HPV16 E6蛋白表達情況，SP試劑盒及顯色劑均購自北京中山生物技術有限公司，操作步驟按試劑盒要求進行，HPV16 E6蛋白陽性對照為試劑盒中HPV16 E6蛋白陽性模板的宮頸鱗癌組織切片，陰性對照為正常宮頸組織；TSHR用磷酸鹽緩沖液代替一抗做空白對照。HPV16 E6蛋白陽性表達定義為細胞質內出現棕黃色顆粒，TSHR陽性表達定義為細胞膜或細胞質出現棕黃色顆粒；組織切片由2名經驗病理科醫師采用雙盲法閱片，染色學評分：高倍鏡下隨機選擇5個視野，每個視野計數200個細胞，其中陽性細胞率：>75%評分3分，26%～75%評分2分，5%～25%評分為1分，<5%評分0分。評分1分以上為陽性表達。

1.3統計學分析 采用SPSS20.0軟件進行χ2檢驗、Spearman相關分析、Kaplan-Meier法、Log-Rank檢驗、COX回歸分析。

2 結 果

2.1兩組HPV16 E6蛋白與TSHR蛋白表達情況比較 宮頸癌組織中HPV16 E6蛋白〔66.67%(68/102)〕與TSHR蛋白表達陽性率〔68.63%(70/102)〕均顯著高于對照組〔20.00%(20/100)和27.00%(27/100)，P<0.05〕。見圖1，表1。

圖1 宮頸癌組織中HPV16 E6蛋白與TSHR蛋白表達情況(SP法，×200)

表1 不同特征宮頸癌患者腫瘤組織HPV16 E6蛋白及TSHR蛋白陽性表達比較(n)

2.2宮頸癌患者腫瘤組織HPV16 E6蛋白及TSHR蛋白表達與臨床資料比較 HPV16 E6陽性表達與宮頸癌患者年齡、臨床分期、病理分級、腫瘤體積及淋巴結轉移無關(P>0.05)；TSHR陽性表達與宮頸癌患者年齡、臨床分期、腫瘤體積及淋巴結轉移無關(P>0.05)；腫瘤分化程度越高，TSHR蛋白表達陽性率越高(P<0.05)。見表1。

2.3宮頸癌患者腫瘤組織HPV16 E6蛋白、TSHR表達相關性 HPV16 E6蛋白陽性表達的68例宮頸癌患者中，TSHR表達陽性為59例，而HPV陰性表達的34例中，TSHR表達陰性為22例，HPV16 E6蛋白表達與TSHR表達情況明顯正相關(rs=0.533，P=0.002)。

2.4宮頸癌腫瘤組織HPV16 E6蛋白、TSHR蛋白表達對患者3年存活情況的影響 整理隨訪資料發現，術后3年，共有61例(40.20%)患者幸存。Kaplan-Meier生存分析表明，HPV16 E6蛋白陽性表達患者3年總生存率為55.88%，與HPV16 E6蛋白陰性表達者(67.65%)無顯著差異(χ2=1.791，P>0.05)；TSHR蛋白陽性表達患者3年總生存率為 51.429%，顯著低于TSHR陰性表達者(78.125%；χ2=6.315，P<0.05)。見圖2。

圖2 宮頸癌腫瘤組織HPV16 E6蛋白、TSHR蛋白表達對患者3年存活情況的影響

2.5影響宮頸癌患者預后危險因素分析 單因素分析顯示，腫瘤體積、淋巴結轉移、TSHR表達情況均是影響宮頸癌預后的危險因素。多因素分析表明，腫瘤體積、淋巴結轉移、TSHR蛋白陽性表達是影響患者預后的獨立危險因素(均P<0.05)。見表2。

表2 影響宮頸癌患者預后危險因素分析

3 討 論

宮頸癌在發展中國家發病率居高不下，在婦科惡性腫瘤中死亡率高居第2位，嚴重威脅女性健康〔6〕。宮頸癌的發生、發展是正常宮頸上皮細胞由增生到癌變的極其復雜過程，由多種因素參與調控。大量研究表明，HPV感染與宮頸癌發生、發展關系密切，高危型HPV能在體內激活使端粒延長的端粒酶，誘導細胞永生化〔7〕。目前發現約有13種高危型HPV型，以HPV16最為常見，70%的宮頸癌與感染HPV16或HPV18相關〔8〕。TSHR調控甲狀腺細胞生長、分化，其水平異常可能與腫瘤發生有關。

HPV基因組為環狀雙鏈DNA，包括早期區、晚期區和長控制區，其中早期區維持基因復制、細胞內病毒高拷貝數、編碼病毒蛋白，含有E1、E2、E4、E6、E7共6個基因〔9〕。HPV 的致癌作用與HPV DNA整合有關，感染病毒后，宿主細胞與病毒核酸整合，整合后的DNA通過致癌基因E6、E7與細胞周期調控蛋白相互作用，干擾細胞周期調控，使細胞無限增殖，發展為癌細胞〔10〕。有研究表明，感染高危型HPV的宮頸癌患者宮頸組織E6、E7 編碼的蛋白可上調端粒酶活性，導致未分化的上皮細胞永生化〔11〕。本研究結果表明感染HPV16 E6蛋白與宮頸癌發病密切相關，與上述研究結果一致。另有研究表明，HPV16編碼的E6原癌蛋白可通過E6結合蛋白與抑癌基因蛋白p53結合，促進p53降解，有利于腫瘤生成、發展〔12,13〕。HPV16致癌作用是一個復雜的過程，目前尚未完全清楚，有待進一步研究。本研究還提示HPV16感染可能只是宮頸癌的致癌啟動因子，與病情進展及預后無顯著相關性。

TSHR通過與促甲狀腺激素(TSH)結合后調控甲狀腺功能、促進甲狀腺濾泡細胞的生長分化，是糖蛋白激素家族成員之一，在甲狀腺細胞的增殖、代謝調控中起主導作用〔14〕。TSH可通過細胞膜表面的TSHR刺激甲狀腺激素合成和分泌，而甲狀腺激素在維持女性正常生殖內分泌功能及性腺發育中起關鍵作用〔15〕。TSHR蛋白在多種惡性腫瘤組織中高表達，提示其過表達可能與腫瘤增殖分化有關〔16〕。有研究發現，TSHR蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中高表達〔17,18〕。本研究結果提示TSHR蛋白過表達與宮頸癌發生有關。TSHR蛋白陽性表達可反映患者預后不良，對TSHR陽性表達患者加強術后監測，改變治療方案，可能避免不良預后。單因素分析結果表明TSHR蛋白陽性表達與宮頸癌的發生密切相關。Spearman相關分析顯示，HPV16 E6蛋白與TSHR蛋白表達情況明顯正相關，HPV16 E6蛋白作為HPV16病毒轉錄翻譯的主要蛋白之一，一定程度可反映HPV16病毒感染情況，提示HPV16感染與TSHR蛋白表達協同作用，共同參與癌癥發生和發展，影響患者預后，但其具體機制不清楚，尚有待研究。