ApoE 基因多態性對瑞舒伐他汀療效的影響*

杜海燕，繆 陽，張 婷，卞海林，王興科

鹽城市第一人民醫院藥學部，鹽城 224000

心血管疾病是我國人群最主要的致死原因之一，其發病率和致死率正在逐年上升，血脂異常正是心血管病最重要的危險因素之一[1]。目前多項大規模臨床試驗結果一致顯示，HMG-CoA 還原酶抑制劑瑞舒伐他汀鈣在動脈粥樣硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）一級和二級預防中均能顯著降低心血管事件（包括心肌梗死、冠心病死亡和缺血性卒中等）危險[2]，其親和力是其他他汀類藥物的4 倍[3]。但也有不少報道[4]指出，瑞舒伐他汀無論是在降低血脂水平、減少臨床事件、還是出現不良反應方面,不同個體之間還是存在著不容忽視的差異。影響療效的因素有很多，目前認為參與藥物代謝的酶、轉運蛋白、受體和其他藥物靶蛋白的遺傳多態性，對藥物的療效和不良反應有著很重要的作用，載脂蛋白E（apolipo-protein E，ApoE）基因多態性是其中重要原因之一[5]。

ApoE 是一種由299 個氨基酸殘基組成的富含精氨酸的堿性蛋白，主要存在于極低密度脂蛋白（VLDL）、中間密度脂蛋白（IDL）、乳糜微粒（CM）及CM 殘粒中，其參與脂蛋白的構成、轉化、代謝，是脂類代謝和心血管疾病的決定因子[6]。ApoE 基因具有3 種復等位基因（E2、E3、E4）分別編碼產生6 種不同的表型：E2/2、E2/3、E3/3、E2/4、E3/4 和E4/4。本文通過研究血脂異常人群中ApoE 基因多態性的分布及其對瑞舒伐他汀調脂效果的影響，為實現該藥個體化用藥提供理論依據，為臨床合理用藥提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2017 年1 月～2019 年6 月住院的血脂異常的患者127 例，其中男性93 名，女性34 名，平均年齡（60.12±9.72）歲。血脂異常診斷標準：根據2016 年制定的《中國成人血脂異常防治指南》[7]，①血清膽固醇（TC）≥6.2 mmol·L-1；②血清甘油三酯（TG）≥2.3 mmol·L-1；③血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）≤1.0 mmol·L-1；④低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）≥4.1 mmol·L-1。符合以上四項之一者，則為血脂異常。近期（一個月內）未服用降血脂藥物。排除能引起血脂異常的疾病，如甲狀腺功能異常、系統性紅斑狼瘡、肝癌、膽道疾病、腎臟疾病等。

1.2 儀器和試劑

Fascan 48E 多通道熒光定量分析儀（西安天隆科技有限公司）；AU5800 全自動生化分析儀（貝克曼庫爾特公司，美國）。

ApoE 基因測序反應通用試劑盒（批號1906160V004，西安天隆科技有限公司）；總膽固醇測定試劑盒（批號AUZ5625）、甘油三酯測定試劑盒（批號AUZ5693）、低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒（批號AUZ5660）、高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒（批號AUZ5661）均為貝克曼庫爾特公司產品。

1.3 血脂水平測定

所有患者測定TC、TG、HDL-C、LDL-C 等常規血脂指標，每晚服用瑞舒伐他汀鈣片（10 mg/片）1片。服藥前及服藥12 周后，空腹12 h 后清晨抽取靜脈血，檢查常規血脂指標。患者用藥期間避免合用其他調脂藥物或經細胞色素P450 代謝的藥物。

1.4 ApoE 基因型的測定

所有患者采集2 mL 靜脈外周血，置于EDTA抗凝管中，采用PCR-熒光探針法對血樣進行檢測。將待測樣本加入適量血液基因組試劑，充分混合后離心提取樣本DNA。取2 μL 待測樣本的基因組DNA、弱陽性對照、空白對照，分別加入裝有3 種PCR 反應液的反應管中，將反應管轉移到核酸擴增區進行上機檢測。將準備好的PCR 反應管放置在儀器樣品槽相應位置上，設置儀器擴增相關參數后進行PCR 擴增。反應結束后，根據擴增曲線，劃定合適基線和熒光閾值，得到不同通道Ct 值并進行結果判定。

1.5 統計學方法

實驗數據采用SPSS 22.0 軟件進行統計分析，計量資料用均數±標準差（）表示，基因型分布是否符合遺傳Hardy-Weinberg 平衡及多個樣本率之間的比較采用χ2檢驗，兩個樣本均數間的比較用t檢驗，多個樣本均數間的比較用單因素方差分析。P＜0.05 為有統計學意義。

2 結果

2.1 ApoE 基因型與等位基因頻率分布

127 例血脂異常患者共檢出ApoE 2/2 基因型1例（0.79%），E2/3 基因型16 例（12.60%），E3/3 基因型79 例（62.20%），E3/4 基因型29 例（22.83%），E4/4 基因型2 例（1.58%）；E2、E3、E4 3 種等位基因頻率分別占比為7.09%、79.92%、12.99%。

χ2檢驗結果顯示，ApoE 各基因型頻率實際值與理論值之間差異無統計學意義（χ2=3.051，P=0.692），分布符合Hardy-Weinberg 平衡，說明樣本具有群體代表性。

2.2 各基因型患者一般資料的比較

根據ApoE 不同基因型發生血脂異常的風險及服用他汀類藥物的療效將其分為3 組[8，9]，分別為E2組：E2/2+E2/3；E3 組：E3/3；E4 組：E4/4+E3/4。E4 組心血管并發癥（高血壓、糖尿病、冠心病）患病率最高；但3 組不同的基因型在年齡、體重指數（BMI）及患高血壓、糖尿病、冠心病方面無統計學差異（P＞0.05）。見表1。

2.3 各基因型血脂水平的比較

比較3 組不同基因型患者的血脂水平，見表2。E4 組TC、TG 水平顯著高于E3 組（P＜0.05）；各組間LDL-C、HDL-C 水平無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 各基因型血脂異常患者一般資料的比較

表2 各基因型血脂異常患者血脂水平的比較

2.4 瑞舒伐他汀治療前后各基因型血脂水平的比較

服用瑞舒伐他汀12 周后血脂水平變化可見表3。各基因型TC、TG 及LDL-C 水平均有下降，HDLC 水平均有所提高。瑞舒伐他汀對E3 組的TG 水平降低作用最強（P＜0.05），但TC、LDL-C 及HDL-C水平各組間變化率相比無顯著性差異（P＞0.05）。

表3 瑞舒伐他汀治療前后各基因型血脂異常患者血脂水平的比較

3 討論

有研究表明，我國人群中E3 等位基因為野生型，分布頻率＞80%；E2 和E4 為突變型，分布相對較少，均＜10%[10]。本研究發現，在血脂異常患者中E3 等位基因分布頻率達79.92%，與文獻報道基本一致。

國內外大量研究表明[11]，ApoE 基因多態性決定了各型ApoE 結構和功能上的差異，其與相應受體的結合能力以及對血脂代謝的影響也存在差異。Shatwan IM 等[8]研究了ApoE 基因型與血脂水平的關系，發現TC、LDL-C 水平高低依次為E4＞E3＞E2。傅倩晰等[12]也認為，E4 等位基因攜帶者血脂水平顯著高于E3 和E2。本研究比較了血脂異常患者各基因型血脂水平，表明E4/4+E3/4 基因型的TC 和TG水平顯著高于E3/3（P＜0.05）；此外，血脂異常患者E4 等位基因分布頻率（12.99%）略高于文獻報道的正常人群（＜10%）[10]，提示這種頻率分布的差異可能對血脂異常有一定的影響。

近年來，國內外關于阿托伐他汀鈣、氟伐他汀、辛伐他汀等的降脂療效與ApoE 基因多態性的相關性報道較多，多數研究證實中國人群ApoE 基因多態性與他汀類藥物療效相關，E4 等位基因攜帶者相對E2 和E3 降脂效果較差[3，13]。本研究表明，瑞舒伐他汀對E3/3 基因型的TG 降低作用最強（P＜0.05），提示瑞舒伐他汀的治療效果與ApoE 基因多態性存在一定的相關性；但經統計分析發現，各基因型之間的TC、LDL-C 及HDL-C 等指標的變化差異無統計學意義。可能由于基因多態性對血脂水平的影響機制較為復雜，未來還需要大規模的研究加以驗證。