系統(tǒng)性紅斑狼瘡中腸道菌群與低氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)水平的相關(guān)性研究

蔡潔娜，莊銘城，張嘉樂，王小燕，陳洽彬，詹林城

（普寧市人民醫(yī)院，廣東 普寧 515300）

0 引言

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種累及多系統(tǒng)、多器官并有多種自身抗體出現(xiàn)的自身免疫性疾病[1]。目前，SLE 的發(fā)病機(jī)制尚不清晰，但既往有相關(guān)研究表明，其發(fā)病原因可能與家族遺傳、神經(jīng)功能異常、免疫功能異常以及生活環(huán)境等因素有關(guān)，這些因素相互作用造成機(jī)體細(xì)胞免疫功能受損，進(jìn)而增加了SLE 的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[2-3]。低氧誘導(dǎo)因子即HIF-1 是低氧誘導(dǎo)結(jié)合蛋白，是一種堿基-螺旋-環(huán)袢-螺旋PAS異二聚蛋白質(zhì)，有α、β 兩個(gè)亞基構(gòu)成。低氧誘導(dǎo)因子-1α 是一種能夠調(diào)節(jié)血管生成和免疫系統(tǒng)因子，以其為介質(zhì)參與的代謝轉(zhuǎn)變和纖維化也對(duì)自身機(jī)體存在的免疫系統(tǒng)疾病起十分重要的作用[4-5]。但由于機(jī)體長(zhǎng)時(shí)間存在炎癥和免疫反應(yīng)，HIF-1α 一直活躍，增加了體內(nèi)氧氣的消耗量，導(dǎo)致B 細(xì)胞發(fā)育出現(xiàn)異常，從而造成局部組織細(xì)胞缺氧死亡，造成機(jī)體出現(xiàn)免疫系統(tǒng)疾病[6]。本研究為探究系統(tǒng)性紅斑狼瘡中腸道菌群異常的原因，以及與低氧誘導(dǎo)因子-1α、T 淋巴細(xì)胞（CD3+）、B 淋巴細(xì)胞（CD3-/CD19+）表達(dá)水平的相關(guān)性，分析T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞以及HLE-1α 與腸道菌群的關(guān)系，進(jìn)一步分析系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病原因，為SLE 的臨床診治提供可靠的參考資料。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019 年8 月至2020 年10 月我院風(fēng)濕內(nèi)科就診的 SLE 患者90 例為 SLE 組，分為A、B、C、D 組，其中A 組為初診SLE 患者（從未用過(guò)藥）共計(jì)30 例，B 組為初診SLE 給藥治療后（初診病人使用雙歧桿菌+激素或免疫藥物一個(gè)月）的患者共計(jì)30例，C 組為SLE 復(fù)診患者（使用激素或免疫抑制劑治療）共計(jì)30 例，D 組為健康志愿者共計(jì)30 例；分別收集這四組的臨床資料、糞便、血液等標(biāo)本進(jìn)行研究。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 糞便標(biāo)本采集及檢測(cè)

收集并保存以上四組的糞便樣本。之后通過(guò)糞便基因組DNA 提取試劑盒對(duì)糞便中DNA 進(jìn)行提取，將剩余產(chǎn)物通過(guò)SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)對(duì)大腸埃希菌、雙歧桿菌及乳酸桿菌進(jìn)行定量分析。

1.2.2 低氧誘導(dǎo)因子-1α與T淋巴細(xì)胞（CD3+）、B 淋巴細(xì)胞（CD3-/CD19+）表達(dá)水平檢測(cè)

從每位研究對(duì)象處采集外周靜脈血3-5mL，利用ELISA 法對(duì)SLE 患者在治療前后的血清中HIF-1α 水平進(jìn)行測(cè)定，利用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)T 淋巴細(xì)胞（CD3+）、B 淋巴細(xì)胞（CD3-/CD19+）表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 臨床資料的采集及SLE 疾病活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)評(píng)分

對(duì)SLE 患者進(jìn)行數(shù)據(jù)采集進(jìn)而通過(guò)SLEDAI 評(píng)分對(duì)患者的病情活動(dòng)進(jìn)行評(píng)分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0 軟件分析。使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（)表示計(jì)量數(shù)據(jù)，使用t檢驗(yàn)，使用%作為計(jì)數(shù)資料的單位，組間數(shù)據(jù)的對(duì)比，使用χ2進(jìn)行檢驗(yàn)。P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腸道菌群定量結(jié)果

與D 組相比，其他三組的大腸埃希菌呈顯著降低趨勢(shì)（P＜0.05），C 組的雙歧桿菌、乳酸桿菌呈顯著降低趨勢(shì)（P＜0.05）；有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。通過(guò)相應(yīng)激素以及免疫抑制治療后，B 組的雙歧桿菌數(shù)量相對(duì)于A 組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性升高（P＜0.05），另兩種菌群相對(duì)于A 組尚未有顯著性改變（P＞0.05）；C 組腸道內(nèi)的雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)比A 組顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），雙歧桿菌與B 組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異且C 組明顯高于于B 組（P＜0.05），大腸埃希菌數(shù)也顯示出升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性變化，詳見表1。

表1 4 組的3 種腸道菌群數(shù)量比較()

表1 4 組的3 種腸道菌群數(shù)量比較()

注：*與D 組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異P＜0.05，▲與A 相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異P＜0.05，※與B 組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異P＜0.05

2.2 外周血 HIF-1α 水平、T 淋巴細(xì)胞（CD3+）、B 淋巴細(xì)胞（CD3-/CD19+）及 SLEDAI 評(píng)分結(jié)果

與D 組相比，其他三組的HIF-1α 水平在統(tǒng)計(jì)學(xué)上呈顯著性增高（P＜0.05），B 淋巴細(xì)胞表達(dá)水平在統(tǒng)計(jì)學(xué)上呈現(xiàn)顯著性升高趨勢(shì)（P＜0.05），且與SLEDAI 評(píng)分呈正相關(guān)；經(jīng)過(guò)有關(guān)臨床方式進(jìn)行治療后，發(fā)現(xiàn)B 組的HIF-1α 與B 淋巴細(xì)胞相對(duì)于A 組在統(tǒng)計(jì)學(xué)有呈顯著性差異，且B 組的HIF-1α 要明顯低于A 組，B 淋巴細(xì)胞明顯低于A 組（P＜0.05），C 組HIF-1α 與B 淋巴細(xì)胞相較于A 組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上呈顯著性下降（P＜0.05），但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上仍然顯著性高于D 組（P＜0.05），該組的HIF-1α 表達(dá)水平與B 淋巴細(xì)胞表達(dá)水平在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著高于B 組（P＜0.05）。治療前后患者的T 淋巴細(xì)胞表達(dá)水平發(fā)生了顯著性升高（P＜0.05）。在經(jīng)過(guò)治療后，患者的SLEDAI 評(píng)分統(tǒng)計(jì)學(xué)上呈顯著性降低（P＜0.05），詳見表2。

表2 4 組的低氧誘導(dǎo)因子-1α、T淋巴細(xì)胞（CD3+）、B淋巴細(xì)胞（CD3-/CD19+）表2 表達(dá)水平比較()

表2 4 組的低氧誘導(dǎo)因子-1α、T淋巴細(xì)胞（CD3+）、B淋巴細(xì)胞（CD3-/CD19+）表2 表達(dá)水平比較()

注：*與D 組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異P＜0.05，▲與A 組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異P＜0.05，※與B 組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異P＜0.05。

3 討論

腸道微生態(tài)與自身免疫性疾病有一定的相關(guān)性，SLE 患者的免疫功能異常導(dǎo)致腸道微生態(tài)平衡被破壞，但目前尚未有證據(jù)證明SLE 患者中的腸道菌群與HIF-1α、T/B 淋巴細(xì)胞有相關(guān)性[7-8]。

總的來(lái)說(shuō)，本次研究通過(guò)有關(guān)方法對(duì)SLE 患者腸道中的大腸埃希菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌、T/B 淋巴細(xì)胞以及低氧誘導(dǎo)因子-1α 表達(dá)水平進(jìn)行數(shù)據(jù)采集與分析，通過(guò)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)與其他三組相比較，A 組患者糞便中雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)以及大腸埃希菌數(shù)減少（P＜0.05），HIF-1a 顯著增高（P＜0.05），B 細(xì)胞顯著性增高（P＜0.05），T 細(xì)胞顯著性降低（P＜0.05）；與其他兩組SLE 患者對(duì)比，B 組患者糞便中的雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)以及大腸埃希菌數(shù)顯著性增高（P＜0.05），HIF-1a 顯著降低（P＜0.05），B 細(xì)胞顯著性降低（P＜0.05），T 細(xì)胞顯著性升高（P＜0.05），但腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)仍低于D 組（P＜0.05），且血液中HIF-1a 水平，B 細(xì)胞個(gè)數(shù)均高于D 組（P＜0.05），T 細(xì)胞個(gè)數(shù)均低于D 組（P＜0.05）。SLE 患者SLEDAI 評(píng)分降低，低氧誘導(dǎo)因子-1α 水平下降、但仍高于D 組。說(shuō)明T/B 淋巴細(xì)胞、低氧誘導(dǎo)因子-1α 表達(dá)水平以及腸道菌群的相應(yīng)菌株都極有可能在SLE 的發(fā)病機(jī)制中起到關(guān)鍵性的作用[9-10]，且B 組在補(bǔ)充雙歧桿菌后，本次研究中所檢測(cè)的各種指標(biāo)都出現(xiàn)了較為優(yōu)秀的改善情況，充分說(shuō)明了對(duì)腸道菌群的有效補(bǔ)充能夠?qū)LE的預(yù)后能夠其到較為積極的改善效果，故本次研究所收集的數(shù)據(jù)有望在SLE 的臨床治療相關(guān)數(shù)據(jù)方面進(jìn)行有效補(bǔ)充。