殺螟丹和Cr6+復合污染對赤子愛勝蚓的毒性研究

朱艷，高晨昕，孟雨婷，肖嫻，劉建國，趙遠

（常州大學環境與安全工程學院，江蘇 常州213164）

我國是農業大國，多數重金屬和農藥作用于土壤造成的環境污染日益加重，間接影響了農產品質量，最終危害到人體健康[1?2]。殺螟丹是使用最廣泛的天然殺蟲劑衍生物之一[3]，有研究表明，殺螟丹的使用會導致嚴重的人體器官衰竭[4?5]。有些人認為殺螟丹是安全無害的，因此對其生態毒性的研究較少，但殺螟丹屬于殺蠶素類農藥[6]，該毒素能與生物體內乙酰膽堿受體結合，阻斷神經質的傳遞，導致神經中樞紊亂，昆蟲接觸藥劑后會失去侵害作物的狀態，蟲體軟化、癱瘓，直至死亡[7]。Cr作為地下水和土壤中第二常見的金屬污染物，其會對土壤中酶活性及微生物活性產生影響，積累在植物中的Cr也會通過食物鏈進入人體或動物體造成嚴重傷害[8]。Cr6+是土壤污染因子中重點關注的重金屬污染物之一，是公認的能威脅人體健康的毒性較大的致癌離子，可引起皮炎、視力減退和皮膚潰爛等相關病癥[9]。目前關于單一污染物污染效應的研究較多，但在實際情況下大多是由多種復合污染物共同作用導致的環境污染。關于農田土壤中Cr6+與殺螟丹共存對生物的復合影響仍鮮有報道。

盡管復合污染已成為當前環境污染研究的熱點問題，但依然是基于土壤中單一污染物的生態效應，實際環境中存在的大部分是多種污染物共同作用的復合污染，而有關復合污染體系的生態風險評估方法依然缺乏。目前，國內外針對復合污染聯合作用的研究工作也取得了相應的進展。在研究恩諾沙星和銅復合污染后對蚯蚓的影響中發現，復合污染對蚯蚓消化酶的影響表現出抑制作用[10]。蔣曼等[11]研究表明毒死蜱和甲萘威分別對斑馬魚表現出高毒和低毒，二者協同作用于斑馬魚。在對甲酚和2，4?二叔丁基酚作用于斑馬魚的單一毒性研究中，二者分別表現為中毒和高毒，且在24、48、96 h時為協同作用[12]。復合污染物之間的聯合毒性效應對于生態環境存在很大的潛在威脅。目前，復合污染的聯合毒性研究成果主要集中于對生物體的急性致死層面，而在亞致死劑量下對于生物體機體損傷層面的研究甚少。

蚯蚓作為土壤系統中關鍵組成部分，其在土壤中長期生存，能夠起到增強土壤微生物活性、影響土壤有機物轉化和養分元素釋放的作用[13]，通常作為對土壤中物質進行毒性檢測的生物之一[14?15]。目前多數生態風險評估方法集中于受試生物的個體水平，低層次的生理生化水平的效應評估相對較少。針對重金屬和農藥對土壤生態環境的聯合毒性危害，本文選取無脊椎動物赤子愛勝蚓作為土壤生物的代表研究對象，以殺螟丹和Cr6+單一及二元復合下的混合物為樣本，通過測試蚯蚓死亡率和生理生化指標的變化來表征其毒性大小，以考察重金屬與農藥的聯合毒性效應，為深入研究重金屬與農藥復合污染的作用機理提供基礎性的研究方法和理論依據。

1 材料與方法

1.1 受試生物

赤子愛勝蚓（Eisenia foetida）購自江蘇某蚯蚓養殖場，經實驗室預先培養一段時間后，選擇體型相似、體質量為0.3 g左右、性成熟的成年蚯蚓進行試驗。

1.2 污染物添加方法

通過預試驗，依據全部致死最低濃度和全部存活的最高濃度，不斷縮小濃度設定區間，最后確定正式試驗濃度區間范圍[16]。

空白對照（CK）：準確吸取4 mL去離子水均勻淋灑于墊有雙圈定性濾紙的玻璃培養皿中，空白組不進行任何染毒處理。

殺螟丹添加方法：使用殺螟丹標準品（純度為97.8%，購于上海市農藥研究所）以去離子水配制成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg·L?15個濃度。將雙層雙圈定性濾紙平鋪在玻璃培養皿中，吸取4 mL試驗用濃度的溶液均勻淋灑于雙層雙圈濾紙上，以單位面積濾紙上的量代表試驗中蚯蚓吸收到的殺螟丹濃度，分別為0.031 5、0.063、0.094、0.126、0.157μg·cm?2。

Cr6+添加方法：使用烘干的重鉻酸鉀標準品（分析純，購于國藥集團有限公司）以去離子水配制成1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg·L?15個濃度。在玻璃培養皿中鋪雙圈定性濾紙，并吸取稀釋好的試驗用濃度的溶液4 mL均勻地淋灑在雙層雙圈濾紙上，以單位面積濾紙上的量代表試驗中蚯蚓吸收到的Cr6+濃度，分別為0.063、0.126、0.189、0.252、0.315μg·cm?2。

復合藥劑添加方法：殺螟丹和Cr6+的復合試驗中，先準確吸取2 mL試驗濃度（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg·L?1）的殺螟丹溶液均勻淋灑于玻璃培養皿的雙層雙圈濾紙上，再加入2 mL濃度為2 mg·L?1的重鉻酸鉀溶液。

1.3 蚯蚓急性毒性試驗

在預先培養的蚯蚓中挑取性成熟的成年蚯蚓，并將蚯蚓表面水分用紙擦干，放入底部鋪有濕潤濾紙的燒杯中，迅速用保鮮膜封口并扎出大小均勻的小孔。隨后置于濕度為80%的恒溫培養箱（20±1℃）中，于暗處清腸24 h，之后清洗干凈并擦去體表水分。

將雙圈定性濾紙鋪于玻璃培養皿中，精確移取4mL試驗濃度的溶液均勻淋灑于濾紙上，取處理好的蚯蚓在不同濃度處理中各放入一條，每濃度處理組設置10個重復，同時進行空白對照處理。玻璃培養皿用保鮮膜封口并用針扎出大小均勻的小孔，保存于培養箱中，調節溫度為（20±1）℃、濕度為80%左右，于暗處培養72 h，分別在24、48 h和72 h觀察記錄蚯蚓的中毒癥狀和死亡數。

聯合毒性試驗以殺螟丹、Cr6+對蚯蚓的48 h的LC50值作為一個毒性單位，以等對數間距按照等毒性比為1∶1的混合比例，設置試驗濃度完成聯合毒性試驗，方法同上。

1.4 蚯蚓生理生化指標試驗

分別采集不同時間經上述3種方式不同濃度處理后的蚯蚓樣本，加入蚯蚓9倍質量的生理鹽水（0.86%），在冰浴條件下進行5 min勻漿，隨后用冷凍離心機將勻漿好的蚯蚓組織液離心（2 500 r·min?1，10 min，20℃）。保留上清液，稀釋成所需質量分數的組織勻漿后，立即測定。

蚯蚓體內蛋白含量使用考馬斯亮藍蛋白測試盒進行測定（購于南京建成生物科技研究所），參照試劑盒說明方法進行操作。試驗分為空白管、標準管和測定管，空白管中加入雙蒸水，標準管中加入0.563 g·L?1的蛋白標準品，測定管中加入處理過的蚯蚓組織勻漿。測定時將樣品加入考馬斯亮藍顯色液，混勻后靜置10 min，用酶標儀（E7031，美國普洛麥格公司）在波長595 nm處測定各管的吸光度值。根據測得的吸光度，利用公式計算蚯蚓樣本2%濃度組織勻漿液的蛋白含量[17]，如公式（1）所示：

待測樣本蛋白含量（g·L?1）=

超氧化物歧化酶（SOD）活力使用黃嘌呤氧化酶法進行測定，以試劑盒（購于南京建成生物科技研究所）說明方法進行操作。設置測定管和對照管，在測定管中加樣品，對照管中加同等體積的雙蒸水，室溫靜置10 min后，用酶標儀（E7031，美國普洛麥格公司）在波長550 nm處[18]，測定各管的吸光度值。代入公式（2）計算SOD活力：

總SOD活力（U·mg?1prot）=

過氧化氫酶（CAT）采用可見光法進行測定，試驗設置對照管和測定管，以試劑盒（購于南京建成生物科技研究所）說明方法進行操作。用酶標儀（E7031，美國普洛麥格公司）在波長405 nm處，測定各管的吸光度值[19]。計算方法見公式（3）：

CAT活力（U·mg?1prot）=

丙二醛（MDA）含量采用TBA法進行測定，試驗設置空白管、標準管、測定管和對照管，參照試劑盒（購于南京建成生物科技研究所）說明方法進行操作，用酶標儀（E7031，美國普洛麥格公司）在波長405 nm處測定各管的吸光度值[20]。計算方法見公式（4）：

MDA含量（nmol·mg?1prot）=

1.5 聯合毒性效應的評價

采用Marking相加指數法[21]評價殺螟丹和Cr6+對蚯蚓的聯合作用類型（表1）。

表1 聯合毒性評價方法Table 1 Joint toxicity evaluation method

1.6 數據處理

通過Origin 8.5對混合體系中各物質濃度與蚯蚓死亡率進行非線性擬合，并采用非線性回歸方程計算得出蚯蚓的24、48 h和72 h的LC50值。

2 結果與分析

2.1 殺螟丹和Cr6+對蚯蚓的急性毒性效應

2.1.1 殺螟丹和Cr6+對蚯蚓的單一毒性

蚯蚓經殺螟丹暴露后，中毒癥狀主要表現為軀體顏色加深并且軀體極度延展、失去彈性，部分蚯蚓爬行緩慢、反應遲緩、對刺激不敏感。暴露于Cr6+中的蚯蚓在接觸濾紙后出現持續的扭曲掙扎、軀體充血紅腫，蚯蚓體表滲出黃色液體，之后軀體蜷曲，失去爬行能力，隨著染毒時間延長，蚯蚓身體背部出現小泡，生殖環腫脹，甚至有糜爛現象。

殺螟丹和Cr6+對蚯蚓的單一毒性試驗結果如表2所示，結果表明兩種藥物對蚯蚓毒性大小有差異，但均隨暴露時間的延長而增強。染毒時間為24 h時，殺螟丹的單一毒性大于Cr6+，其中殺螟丹24 h?LC50值為14.30 mg·L?1，Cr6+24 h?LC50值為104.42 mg·L?1。染毒時間為48 h時，殺螟丹和Cr6+的48 h?LC50分別為12.36 mg·L?1和71.53 mg·L?1，毒性分別增強1.16倍和1.46倍，殺螟丹毒性仍較強，是Cr6+的5.79倍。染毒時間為72 h時，殺螟丹和Cr6+的毒性繼續增強，其中殺螟丹72 h?LC50值為10.43 mg·L?1，殺螟丹和Cr6+的毒性分別較染毒48 h時增強1.19倍和1.79倍。

表2 殺螟丹和Cr6+對蚯蚓的單一毒性（mg·L?1）Table 2 Single toxicity of cartap and Cr6+on earthworm（mg·L?1）

2.1.2 殺螟丹和Cr6+對蚯蚓的二元聯合毒性

殺螟丹和Cr6+對蚯蚓的二元聯合毒性試驗結果如表3所示，殺螟丹與Cr6+以等毒性比1∶1配比，暴露24 h時，兩者的LC50值分別是單一暴露時的1.03、1.29倍，相加指數為?0.75，兩者聯合顯示拮抗作用。暴露48、72 h時，相加指數分別為?0.76和?0.38，聯合作用均表現為拮抗作用，并且拮抗作用在整個暴露過程中呈現先加強后減弱的趨勢。

表3 殺螟丹和Cr6+二元混合體系對蚯蚓聯合毒性評價結果Table 3 Evaluation of joint toxicity of binary mixtures of cartap?Cr6+to earthworm

2.2 殺螟丹、Cr6+及二元聯合對蚯蚓體內蛋白含量的影響

殺螟丹、Cr6+單一染毒及二元聯合染毒對蚯蚓體內蛋白含量影響如圖1所示。蚯蚓體內蛋白含量在不同染毒時間（24、48、72 h）內隨殺螟丹濃度增加的變化趨勢均為先升高后降低，隨著染毒時間的延長，蛋白含量先升高后不變（圖1a），不同暴露時間內，各處理組均與CK處理存在顯著差異（P＜0.05）。可以得出低濃度、長時間染毒和高濃度、短時間染毒情況下蚯蚓體內蛋白含量受到的影響相似。蚯蚓經不同濃度Cr6+染毒后，CK組蚯蚓體內蛋白含量隨時間的延長緩慢下降，且大多低于Cr6+染毒的蚯蚓體內蛋白含量（圖1b）。暴露24 h時的蛋白含量低于48 h和72 h；暴露48 h時，蚯蚓體內蛋白含量隨Cr6+濃度增加呈先降低后上升再降低趨勢，在Cr6+濃度為4.0 mg·L?1時達到最大值1.52 g·L?1，是CK組蚯蚓蛋白含量的1.30倍；在暴露72 h時，蛋白含量變化趨勢為先降低后升高至平穩，并且在Cr6+濃度為3.0 mg·L?1時低于CK；不同暴露時間蛋白含量最大值處理組均與CK存在顯著差異（P＜0.05）。蚯蚓經殺螟丹和Cr6+二元聯合染毒后，CK組蚯蚓體內蛋白含量隨著時間的延長呈上升趨勢（圖1c）。染毒24 h時，蛋白含量隨染毒濃度增加呈現先升高后降低趨勢，在0.2 mg·L?1殺螟丹+2 mg·L?1Cr6+時蛋白含量出現最大值，48、72 h時蚯蚓體內的蛋白含量基本表現為先降低后升高，最小值分別出現在殺螟丹濃度為0.3 mg·L?1和0.2 mg·L?1時。

2.3 殺螟丹、Cr6+及二元聯合對蚯蚓體內SOD活力的影響

殺螟丹、Cr6+單一染毒及二元聯合染毒對蚯蚓體內SOD活力的影響變化如圖2所示。在染毒24 h時，SOD活力隨殺螟丹濃度增加表現為先降低后升高，48 h時則表現為先升高后降低，染毒72 h時SOD活力持續降低，且各處理均與CK存在顯著差異（圖2a）（P＜0.05）。可能是隨著染毒時間的延長，蚯蚓體內環境遭到破壞，損傷程度增強，導致在72 h時SOD活力不斷降低。蚯蚓經Cr6+染毒后SOD活力在24 h時最高（圖2b），1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg·L?1處理分別是CK組的145%、156%、174%、148%和133%，隨著Cr6+處理濃度的增加，蚯蚓體內SOD活力呈現先升高后降低的趨勢，最大值出現在Cr6+濃度為3.0 mg·L?1時，較CK增加了74.12%，可能由于高濃度污染使蚯蚓機體嚴重受損。不同暴露時間下，各處理均與CK存在顯著差異（P＜0.05），72 h時除CK外各處理并無顯著差異。蚯蚓經殺螟丹和Cr6+二元聯合染毒后，24 h時SOD活力隨處理濃度的增加持續升高，各處理組分別較CK升高了10.79%、15.10%、22.07%、28.07%和41.89%（圖2c），并在0.5 mg·L?1殺螟丹+2 mg·L?1Cr6+濃度時達到此試驗濃度范圍內的最大值。染毒48 h時，SOD活力隨著處理濃度的增加呈現先升高后降低的趨勢，在0.3 mg·L?1殺螟丹+2 mg·L?1Cr6+濃度時SOD活力達到最大值，是CK組的1.63倍。染毒72 h時，蚯蚓體內SOD總活力大幅度降低，并在濃度為0.2 mg·L?1殺螟丹+2 mg·L?1Cr6+時出現最大值。

2.4 殺螟丹、Cr6+及二元聯合對蚯蚓體內CAT活力的影響

殺螟丹、Cr6+單一染毒及二元聯合染毒對蚯蚓體內CAT活力的影響變化如圖3所示。蚯蚓經殺螟丹單一染毒后，不同濃度處理導致其體內CAT活力變化趨勢不同，CK體內CAT活力較穩定，隨時間延長無明顯波動（圖3a）。染毒24 h時，CAT活力被誘導而迅速上升，此時蚯蚓體內氧自由基增加，減少了細胞膜的氧化損傷，屬于機體對脅迫環境的適應反應。48 h時CAT活力被抑制，降至與CK相近，72 h時CAT活力相對48 h略升高。各時間峰值濃度均與CK存在顯著差異（P＜0.05）。蚯蚓經Cr6+染毒后在Cr6+濃度為2 mg·L?1時達到最大值，在暴露時間（24、48、72 h）內隨Cr6+濃度增加CAT活力整體呈現倒“U”形變化。不同暴露時間內，各處理均與CK存在顯著差異（P＜0.05）。蚯蚓經殺螟丹和Cr6+二元聯合染毒后，隨著暴露時間的延長，CK蚯蚓體內CAT活力較穩定（圖3c）；各處理組CAT活力變化有明顯差異。蚯蚓體內CAT活力在染毒24 h時表現為先降低后升高再降低，在0.1 mg·L?1殺螟丹+2 mg·L?1Cr6+濃度時達到最大值；染毒48 h時，各處理的CAT活力均高于CK，隨濃度增加呈先升高后降低的趨勢，在0.2 mg·L?1殺螟丹+2 mg·L?1Cr6+濃度時達到最大值，并較24 h升高了45.89%；染毒72 h時，蚯蚓體內CAT活力變化趨勢與48 h相似，最大值在0.3 mg·L?1殺螟丹+2 mg·L?1Cr6+濃度時出現。

2.5 殺螟丹、Cr6+及二元聯合對蚯蚓體內MDA含量的影響

殺螟丹、Cr6+單一染毒及二元聯合染毒對蚯蚓體內MDA含量的影響變化如圖4所示。蚯蚓經不同濃度殺螟丹單一染毒后，在染毒時間24、48、72 h時，其體內MDA含量整體降低（圖4a）。染毒24 h和48 h時，隨染毒濃度增加MDA含量表現為先升高后降低，染毒72 h時，MDA含量與CK差異不顯著。除72 h外，其余暴露時間的峰值濃度均與CK存在顯著差異（P＜0.05）。蚯蚓經不同濃度Cr6+染毒后，染毒24 h時其體內MDA含量隨Cr6+濃度增加呈先升高后降低的趨勢（圖4b）；染毒48 h時MDA含量有所升高；染毒72 h時，MDA含量在Cr6+濃度為2.0 mg·L?1時達到最大值，高于CK組77.12%。蚯蚓經殺螟丹和Cr6+二元聯合染毒后，在長時間暴露情況下，CK蚯蚓體內MDA含量整體趨勢平穩（圖4c）。在暴露時間內（24、48、72 h）MDA含量變化差異明顯，染毒24 h時，處理組MDA含量均顯著高于CK（P＜0.05），在0.1 mg·L?1殺螟丹+2 mg·L?1Cr6+濃度時達到最大值，后逐漸降低。染毒48 h時，各處理MDA含量呈現先升高后降低的趨勢，在0.3 mg·L?1殺螟丹+2 mg·L?1Cr6+濃度時達到最大值。

3 討論

殺螟丹單一染毒時，蚯蚓體內蛋白變化具有規律性，殺螟丹濃度的增加使蛋白含量在染毒時間（24、48、72 h）內先升高后降低，長時間染毒后蛋白含量總體升高后趨于平穩。染毒的蚯蚓體內蛋白含量均比CK蛋白含量高，可能是由于污染物的刺激，導致蚯蚓內環境紊亂、功能受損，機體產生應激蛋白，如C?反應蛋白（CRF）、纖維連接蛋白（Fn）等會引起蚯蚓體內蛋白總量的升高[22?23]。蚯蚓體內SOD活力在低濃度短時間內被誘導，但在72 h時持續下降，原因可能是在遭受脅迫后機體激發了體內SOD酶以維持自身氧化平衡，但隨著時間的延長和污染物濃度的增高，機體損傷嚴重，SOD活力逐漸降低[24]。本研究中蚯蚓體內CAT活力在殺螟丹染毒初期顯著高于CK組，隨著殺螟丹濃度的升高和時間的延長，CAT活力受到抑制，甚至失活[25]。蚯蚓體內MDA含量的變化具有規律性，隨著殺螟丹濃度的增加MDA含量先升高后降低，隨著染毒時間的延長MDA含量降低，原因可能是在殺螟丹染毒初期，蚯蚓體內足夠的氧自由基導致膜的過氧化，致使MDA含量上升，但隨著時間的延長，過剩的活性氧在抗氧化酶活性最高時得到清除，使蚯蚓體內活性氧的生成和去除達到平衡，MDA含量逐漸降低趨于平穩[26]。

Cr6+單一染毒時，蚯蚓體內蛋白含量隨著Cr6+濃度的增加先降低后升高，總體大于CK組中蛋白含量，且隨著染毒時間延長到48 h時蛋白含量呈降低的趨勢，推測可能因為蚯蚓長時間暴露于Cr6+中，重金屬染毒損害了機體功能，從而阻礙蛋白的生成來源及合成[27]。在暴露72 h時，蛋白含量變化趨勢為先降低后升高至平穩，并且在Cr6+濃度為3.0 mg·L?1時低于CK，可能是機體阻礙蛋白質的產生來源，從而造成蛋白含量的降低[28]。經Cr6+單一染毒后蚯蚓體內SOD活力隨Cr6+濃度增加先升高后降低，并且隨著染毒時間的延長而降低，說明前期Cr6+的脅迫或代謝過程產生的超氧陰離子，提高了SOD活力[29]。但是長時間的重金屬毒害作用，使蚯蚓體內細胞遭受損傷，影響了細胞正常生理代謝，導致SOD活力在后期逐漸降低[30]，這與鄭麗萍等[31]在研究重金屬污染對蚯蚓造成的毒性效果中得出的結論一致。蚯蚓體內CAT活力隨著Cr6+濃度和染毒時間的延長呈現先升高后降低的趨勢。表明蚯蚓在受到低濃度重金屬污染時，CAT活力會逐漸上升，足以去除機體受到污染脅迫產生的自由基，此時機體的抗氧化防御系統打開，對環境變化產生適應[32?33]。在遭受長時間染毒情況下，CAT活力得到強烈誘導，Liang等[34]在研究十澳聯苯酷和納米零價鐵復合脅迫對蚯蚓體內CAT活性的誘導時也得出相似結果。蚯蚓體內MDA含量總體隨著染毒時間的延長而增加，反映了機體受到污染脅迫后的損傷程度[35]。

殺螟丹和Cr6+二元聯合以等毒性比1∶1配比時，拮抗作用隨染毒時間的延長先加強后減弱，這可能是因為污染物對細胞膜的損傷作用，抑制了蚯蚓對殺螟丹和Cr6+的吸收，導致毒性降低[36]。有相似研究表明：草甘膦能夠降低Cu對蚯蚓的急性毒性，將兩者復合污染后毒性表現為拮抗作用[37]。但在對蚯蚓受到常用殺蟲劑毒死蜱?噻蟲胺?乙草胺3種混合物污染的研究中，毒性表現出明顯的協同作用[38]。Tilton等[39]探究毒死蜱和Ni復合污染對土壤中跳蟲的影響時發現，聯合作用類型表現為拮抗作用，其機理為毒死蜱通過競爭重金屬Ni與氨基酸的結合點位從而降低Ni的結合位點，導致Ni對土壤跳蟲的毒性作用下降。由此推測，殺螟丹和Cr6+二元聯合污染時二者會產生競爭作用，造成其中一種污染物的毒性受到抑制，從而產生拮抗作用。此外，在殺螟丹和Cr6+二元聯合染毒時，蚯蚓體內蛋白含量變化規律不明顯，可總結為染毒初期，蛋白含量隨試驗濃度的增加先升高后降低，染毒后期先降低后升高，蛋白含量總體呈降低趨勢。以上結果說明，殺螟丹和Cr6+的聯合染毒效果與染毒時間及暴露濃度之間存在極大相關性，時間和濃度的差異，決定了蚯蚓遭受外來污染物脅迫的機體損傷程度，從而導致蚯蚓體內蛋白含量有所不同。蚯蚓體內SOD活力在染毒24 h時隨著污染濃度的增加而升高，48 h時SOD活力先升高后降低，總體來看SOD活力降低。研究表明細胞的抗逆性以及衰老對SOD的活力存在顯著影響，通常情況下，細胞內存在固定的自由基代謝平衡，在染毒初期，機體自身能夠生成大量的氧自由基來調節內環境穩定，然而在細胞受到嚴重污染損害或者在細胞自身衰老時，這種固有的自由基代謝平衡就會被打破，引發細胞內的過氧化反應，對細胞膜系統的結構和功能產生損害[40]。所以隨著時間的推移，復合污染使蚯蚓受到的脅迫增強，過多自由基無法得到消除，導致后期SOD活力顯著降低[41]。整個復合染毒過程中，不同濃度殺螟丹與Cr6+復合后CAT活力與單一殺螟丹、單一Cr6+染毒相比呈現顯著變化。在染毒初期，蚯蚓體內抗氧化酶含量升高，以積極防御免受外來氧化的損傷，表明此時蚯蚓具有抵抗氧化應激的能力。高濃度染毒對CAT活力的誘導作用更強，隨著染毒時間的延長，CAT活力提高，其抗氧化能力上升[42]。在研究四溴雙酚A和Cd復合污染對蚯蚓和斑馬魚的影響研究中也得出相似的結論[43]，聯合染毒條件下，相同Cd濃度時對應的CAT活力隨四溴雙酚A濃度的升高呈現先升高后下降的趨勢。MDA含量在染毒24 h時隨著試驗濃度的升高而降低，在長時間暴露后，MDA含量降低且趨于平緩，說明機體受氧化損傷逐漸減弱，活性氧的產生和清除達到平衡，或是MDA隨機體代謝排出體外。在研究Cu和不同濃度La復合污染對蚯蚓MDA含量的影響中也發現了相似情況[44]，MDA含量在初期呈先上升后下降的趨勢，后期緩慢降低。

4 結論

（1）殺螟丹和Cr6+單一毒性結果顯示，其毒性都隨著暴露時間的延長而增強，單一毒性為殺螟丹大于Cr6+。當殺螟丹和Cr6+以等毒性比1∶1配比時，聯合毒性最終表現為拮抗作用。

（2）殺螟丹單一污染時，赤子愛勝蚓體內蛋白含量隨染毒時間的延長總體先升高后降低；SOD活力呈總體下降的趨勢；CAT活力和MDA含量在染毒初期被促進，隨時間延長均發生大幅度降低。

（3）Cr6+單一污染時，赤子愛勝蚓體內蛋白含量和SOD活力隨染毒時間的延長總體呈現下降趨勢；CAT活力和MAD含量隨Cr6+濃度升高先升高后降低，隨時間的延長總體呈上升趨勢。

（4）殺螟丹和Cr6+二元聯合作用時，赤子愛勝蚓體內蛋白含量變化趨勢不明顯；SOD活力在前期、中期得到促進，后期受到抑制；CAT活力隨染毒濃度的升高而升高；MDA含量隨染毒時間的延長持續降低。