食蟹猴多種病原混合感染引起肺炎的診治

張飛燕 ， 馬玉華 ， 王 蕓 ， 金 潔 ， 張玉林 ， 劉 超 ， 呂龍寶

(中國科學院昆明動物研究所 ， 云南 昆明 650000)

自2020年1月25日以來，中國科學院昆明靈長類研究中心人工飼養的食蟹猴出現流鼻液、咳嗽、打噴嚏、呼吸困難等臨床癥狀。根據臨床發病情況及實驗室診斷確診為陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌混合感染引起的肺炎。

1 發病情況

該猴場食蟹猴健康狀況良好，所有實驗猴每半年接受1次肺結核(TB)、猴皰疹病毒I型、猴逆轉錄D型病毒、猴免疫缺陷病毒、猴T細胞趨向型病毒I型、猴水痘病毒檢測，都為陰性，由人工飼養,每日喂定量的配合飼料和青飼料,自由飲水。每日清洗猴籠,每周不少于2次常規消毒。自2020年1月25日以來，由于氣溫變化較大，通過日常飼養觀察發現，3～6歲青年食蟹猴表現出流鼻液、咳嗽、食欲減退等癥狀，嚴重者表現呼吸困難、精神沉郁等癥狀，飼養員對臨床癥狀嚴重的食蟹猴立即轉入獸醫房，隔離治療。

2 實驗室檢測

2.1 血液學檢查 在食蟹猴清醒狀態下，清晨空腹后肢靜脈采取3只食蟹猴乙二胺乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血1 mL，編號為MF1～MF3，采用全自動血液分析儀檢測白細胞數 (WBC)、淋巴細胞數 (Lymph)、單核細胞數(Mon)、粒細胞數 (Gran)、淋巴細胞百分比(Lymph%)、單核細胞百分比(Mon%)、粒細胞百分比 (Gran%)、紅細胞數 (RBC)、血紅蛋白 (HGB)、紅細胞壓積 (HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、平均血紅蛋白含量 (MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細胞分布寬度變異系數(RDW)、血小板數(PLT)、平均血小板體積 (MPV)、血小板分布寬度 (PDW)和血小板壓積(PCT)。

2.2 病毒檢測 采取食蟹猴2 mL全血進行血清分離，按照呼吸道合胞病毒IgM抗體檢測試劑盒說明書進行檢測。另外，按照甲型/乙型流感病毒抗原檢測試劑盒(膠體金法)的操作說明，將無菌拭子插入食蟹猴鼻腔中分泌物最多處，在鼻腔內貼鼻腔壁輕輕轉動拭子3次，采取鼻拭子；將拭子從食蟹猴口腔越過舌根，到達咽喉壁、上顎扁桃的發紅部位，反復多次擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，應避免觸及舌部，取出咽拭子，立即對樣本進行處理和檢測。

2.3 細菌檢測 對出現流鼻液、咳嗽等呼吸道癥狀的3只成年雄性食蟹猴無菌采取鼻拭子和咽拭子樣本進行病原菌分離，無菌接種在哥倫比亞瓊脂培養基進行培養,37 ℃恒溫培養18 h觀察細菌生長狀況，挑取可疑細菌進行革蘭染色鏡檢，通過平板劃線法進行細菌純化和進一步生化鑒定，細菌生化鑒定采用梅里埃VITEK 2 Compact 全自動細菌鑒定及藥敏分析系統GP革蘭陽性細菌鑒定卡和GN革蘭陰性細菌鑒定卡。按照說明書挑取單菌落至3 ml無菌鹽水(0.45%)中，制備菌懸液的濃度范圍為0.50McF左右，上機鑒定，采用動態法讀數，于3～10 h內完成鑒定。

2.4 藥物敏感性試驗 采用紙片擴散法，選用常用的7種抗菌類藥物對分離的細菌進行藥物敏感性試驗，放置培養箱37 ℃ 培養 24 h 后取出，觀察并測量抑菌圈直徑大小(mm)。結果判定按美國臨床和實驗室標準協會(CLSI) 的抗微生物藥物敏感性試驗操作方法和判斷標準進行[1]。所用 7 種藥敏試紙片分別為諾氟沙星(NOR)、氨芐西林(AM)、環丙沙星(CIP)、青霉素(PG)、慶大霉素(CN)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢曲松鈉(CRO)。

3 結果

3.1 血液學檢測 本試驗參考全國醫學靈長類研究中心實驗動物大數據庫猴生理學指標[2]，結果如表1所示，3只食蟹猴白細胞(WBC)和單核細胞數(Mon)都升高，表明存在急性炎癥反應。

表1 血液學檢查

3.2 病毒檢測 3只成年食蟹猴呼吸道合胞病毒抗體、甲型/乙型流感病毒抗原檢測都為陰性，判定該食蟹猴未感染呼吸道合胞病毒和甲型/乙型流感病毒。

3.3 病原菌檢測 3只成年食蟹猴鼻拭子樣本在哥倫比亞瓊脂培養基上培養18 h后都生長出優勢菌落，該菌落呈白色或乳白色、圓形、濕潤、不透明、中等大小，革蘭染色鏡檢可見革蘭陽性球菌、單個或多個存在。咽拭子樣本菌落呈乳白色小菌落，革蘭鏡檢可見陰性小桿菌。挑取可疑菌落進一步分離培養，經梅里埃微生物生化鑒定，確定鼻拭子樣本細菌為金黃色葡萄球菌(ID:99.9%)，咽拭子樣本細菌為陰溝腸桿菌(ID:99.9%)。結果表明該發病的食蟹猴為陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌引起的混合感染。

3.4 藥物敏感性試驗 藥敏試驗結果表明，陰溝腸桿菌對氨芐西林、頭孢呋辛中等敏感；對諾氟沙星、阿米卡星、慶大霉素、頭孢曲松鈉、頭孢他啶敏感(表2)。金黃色葡萄球菌對諾氟沙星、慶大霉素、頭孢他啶敏感，對氨芐西林、青霉素耐藥(表3)。

表2 陰溝腸桿菌對7種抗菌藥的藥敏試驗結果

表3 金黃色葡萄球菌對7種抗菌藥的藥敏試驗結果

4 治療

根據實驗室檢測結果，在發病初期，全群給予克感敏(片劑)或小兒氨酚黃那敏口服，2次/d，混于青飼料(蘋果、紅薯、南瓜、蓮花白等)或蒸糕(常規飼料加水攪拌機攪拌均勻后蒸箱蒸熟)中飼喂。劑量：成體猴按克感敏1片/次，小兒氨酚黃那敏口服1袋/次；亞成體猴克感敏1/2片/次，小兒氨酚黃那敏口服1/2袋/次，并于飲水中添加維生素C，劑量按成體猴0.5 g/次，亞成體猴0.25 g/次，自由飲用，療程一般為7～10 d。對于臨床癥狀較為嚴重病例則采取聯合頭孢曲松鈉/頭孢他啶、地塞米松、利巴韋林、維生素C及注射用水用藥，具體用藥劑量：成體猴：頭孢曲松鈉1 g+注射用水2 mL+地塞米松2 mg+利巴韋林100 mg，維生素C 0.5 g/次；亞成體猴：頭孢曲松鈉0.5 g+注射用水2 mL+地塞米松1 mg+利巴韋林50 mg，維生素C 0.5 g/次，2次/d，肌內注射，療程為10～12 d。對于呼吸困難的成體猴，肌內注射氨茶堿2～5 g/(kg·bw)，1次/d。通過上述療程的治療，3只食蟹猴病情好轉，停藥后觀察，3只食蟹猴精神及飲食情況都完全恢復。

5 討論

本試驗結合食蟹猴病例，病毒檢測了在冬春季節易引起非人靈長類病毒性肺炎的呼吸道合胞病毒、甲型/乙型流感病毒，結果顯示呼吸道合胞病毒抗體、甲型/乙型流感病毒均為陰性。同時也開展了食蟹猴血常規指標的檢測，通過觀察一些指標的變化來提示食蟹猴存在的潛在病變，如WBC升高提示急性感染性炎癥，過高提示急性化膿性細菌感染，其中MF1食蟹猴WBC顯著升高，提示急性感染，Mon過高提示發炎、腫瘤、細菌感染初期、應激等[3]。最后，根據臨床發病情況和實驗室檢測，確診3只食蟹猴為陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌混合感染引起的肺炎。陰溝腸桿菌為條件性致病菌，通常在人和動物的腸道內寄生，在特定條件下其能感染呼吸系統、泌尿系統等多個器官系統,同時也可感染創口，嚴重時引發敗血癥等[4]。金黃色葡萄球菌也是一種條件致病菌。對健康宿主不致病，可具有生理作用。但當動物由于外傷、應激和環境造成免疫低下或者生理功能異常時，可使動物機體致病，影響動物種群繁育和動物試驗結果[5]。

本病例食蟹猴的發病較急，起初懷疑是由肺炎雙球菌引起的食蟹猴細菌性肺炎,因為肺炎雙球菌是引起細菌性肺炎的最主要病原菌，但經過病原菌的分離鑒定、梅里埃微生物生化鑒定，確定鼻拭子樣本細菌為金黃色葡萄球菌(ID:99.9%)，咽拭子樣本細菌為陰溝腸桿菌(ID:99.9%)，結果表明該發病的食蟹猴為陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌引起的混合感染。推測其原因可能：(一)氣溫驟變，沒有及時對食蟹猴采取保暖措施和調整飼料營養，導致食蟹猴自身免疫力下降；(二)從病原菌分離培養到藥敏試驗結果出來需要耗費2～3 d，在發病較急、臨床癥狀嚴重的情況下，獸醫為了有效、及時治療，就會憑經驗首先使用廣譜抗生素進行治療，起初治療效果顯著，但在疫病原因不明確的情況下盲目或不適當的使用抗生素，長期可致使食蟹猴體內菌群失調，導致陰溝腸桿菌從消化道移位到呼吸系統。本病例同時對2種病原菌進行了藥敏試驗，發現2種病原菌對諾氟沙星、慶大霉素、頭孢曲松鈉均敏感，對青霉素產生了耐藥，原因可能是食蟹猴治療的頭幾天連續使用青霉素產生耐藥。目前，濫用抗菌藥物的現象極為普遍，在實驗猴驗飼養管理中主要表現為在動物感染原因尚未明確前、動物發病就立即憑借經驗使用廣譜抗生素，長期會引起動物體內菌群失調,導致陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌感染及耐藥性的產生。因此在實際工作中，一方面應密切關注天氣，隨著季節更替及天氣變化調整飼料營養，增強動物抵抗力，控制室內環境及易感病原微生物等，做到科學預防，如冬春季重點預防呼吸系統疾病；另一方面為了有效控制病原菌的感染，首先建立嚴格的衛生防疫管理制度，嚴格規范人員、車輛、飼料、用具、物品出入飼養區的管理，降低陰溝腸桿菌和金黃色葡萄球菌等侵入性感染的概率；其次遵循早發現、早隔離、早治療的原則，對于發病個體，根據實驗室診斷結果使用抗菌藥，并加強護理。