陰溝腸桿菌致滇金絲猴肺炎病例的分析

張飛燕 ， 馬玉華 ， 王 蕓 ， 金 潔 ， 張玉林 ， 劉 超 ， 呂龍寶,2

(1.中國科學院昆明動物研究所 ， 云南 昆明 650000 ； 2.中國科學院昆明靈長類研究中心 ， 云南 昆明 650223)

細菌性肺炎是人工飼養金絲猴最常見的急性傳染病之一，發病時間多在氣溫變化較大的季節，金絲猴機體受涼，又因營養或其他疾病導致自身抵抗力下降時，易感染發病。細菌性肺炎的病程較急，且金絲猴之間也會相互傳染，具有較高的死亡率。患病金絲猴常表現為發熱、咳嗽、呼吸急促等臨床癥狀。有時可見鼻腔內流出漿液性分泌物。剖檢肺炎癥病態明顯，支氣管充血并有黏液性滲出物。2020年2月，中國科學院昆明靈長類研究中心通過對1例滇金絲猴臨床癥狀、實驗室及病理剖檢等診斷，確診為由陰溝腸桿菌引起滇金絲猴細菌性肺炎病例。

1 發病及治療情況

2020年2月，由于昆明氣溫變化比較反常，通過日常飼養觀察發現1例幼年滇金絲猴表現出打噴嚏、流涕、精神沉郁、食欲下降等臨床癥狀，立即轉入獸醫房，單籠隔離飼養及治療，肌內注射頭孢曲松鈉0.1 g/(kg·bw)+地塞米松10 mg/(kg·bw)+利巴韋林10 mg/(kg·bw)+注射用水2 mL，治療4 d后病情好轉，停藥觀察，該猴比較安靜，投食后采食不積極，在停藥后的第2天死亡。

2 病理剖檢

尸檢外觀可見尸體消瘦，剖檢心臟、肝、脾、胰腺、腎、腎上腺、膀胱、胃、腸均未見異常,肺炎癥狀明顯，支氣管充血，雙肺下呈充血、出血,邊緣部分肉樣肺炎病變。

3 實驗室檢測

3.1 病原菌檢查 在動物解剖室解剖柜條件下剖檢死亡猴，用無菌手術剪切開肺組織，分別取1塊正常和肉眼病變明顯的肺組織用一次性培養皿運送至實驗室生物安全柜，在生物安全柜用滅菌接種環在2塊組織部位采樣，接種于哥倫比亞瓊脂培養基，倒置放于恒溫培養箱中，37 ℃培養18 h，觀察到培養基上的菌落生長情況為：濕潤、表面光滑、米白色、不透明的小菌落，革蘭染色鏡檢，為革蘭陰性小桿菌，挑取可疑菌落進一步劃線分離純培養，經梅里埃微生物生化鑒定，確定肺拭子樣本細菌為陰溝腸桿菌，ID:99.9%。

3.2 藥敏試驗 用紙片擴散法，選擇滇金絲猴常用的抗菌類藥物對分離的細菌進行藥物敏感性試驗。放置培養箱37 ℃ 培養 24 h 后取出，觀察并測量抑菌圈直徑大小(mm)。結果判定按美國臨床和實驗室標準協會(CLSI)的抗微生物藥物敏感性試驗操作方法和判斷標準進行[1]。所用 7 種藥敏試紙片為諾氟沙星(NOR)、氨芐西林(AM)、環丙沙星(CIP)、青霉素(PG)、慶大霉素(CN)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢曲松鈉(CRO)，結果顯示該菌對NOR、CIP、CRO、CAZ和CN敏感。見表1。

表1 陰溝腸桿菌對8種抗菌藥的藥敏試驗結果

3.3 病理檢測 取肉眼可見明顯病變部位,4%甲醛溶液固定后制作病理切片，H.E.染色鏡檢。可見肺表面有血塊附著(圖1A)，肺泡腔內見大量紅細胞(圖1B)，肺支氣管內見血性分泌物(圖1C)，肺支氣管內見淋巴細胞浸潤(圖1D)。

圖1 滇金絲猴組織切片染色A：肺表面血塊附著(40×)； B：肺泡腔內充滿紅細胞(400×)；C：肺支氣管內見血性分泌物(100×)； D：肺支氣管內見淋巴細胞浸潤(400×)

4 討論

滇金絲猴(Rhinopithecusbieti)是我國特有的珍稀瀕危動物，也是世界自然保護聯盟(IUCN)紅色名錄中的瀕危(EN) 物種[2]。目前，滇金絲猴僅存于我國滇藏交界的高寒森林中，海拔高度都在4 000 m左右,是除人類外世界海拔分布最高的靈長類動物[3]。我國政府已采取了多種措施保護金絲猴，其中對滇金絲猴進行人工飼養繁殖易地保護成為拯救這一瀕危動物的重要手段之一。而在人工飼養繁殖過程中，細菌性肺炎是滇金絲猴常見的呼吸道疾病，猴群感染率較高，并且有較高的死亡率[4-5]。引起細菌性肺炎的病原菌種類較多，但主要是由肺炎雙球菌通過呼吸道感染致病。但本病例從死亡滇金絲猴的肺炎癥組織采樣進行病原菌分離鑒定為陰溝腸桿菌，陰溝腸桿菌為條件性致病菌，通常在人和動物的腸道內寄生。在特定條件下該菌能感染呼吸系統、泌尿系統等多個器官系統，同時也可感染創口，嚴重時引發敗血癥等。另外有研究報道，當動物發病時大量地濫用抗生素會破壞腸道穩態，使腸道菌群失衡，導致機體內的正常菌群大量減少，陰溝腸桿菌等條件致病菌增多并大量繁殖成為優勢菌種，并定位移植到腸外的其他器官系統[6]。本病例在滇金絲猴肺臟組織樣本檢測到陰溝腸桿菌，推測可能原因：氣溫驟變，機體受涼，未能及時調整飼料營養和控制室內溫度導致滇金絲猴受到應激而自身免疫力下降；由于滇金絲猴的珍貴，在臨床癥狀嚴重時會優先采用注射人血白蛋白進行治療，加之從病原菌的分離鑒定到藥敏試驗結果出來需要耗時2～3 d，在發病較急、臨床癥狀嚴重的情況下，獸醫師為了有效、及時治療，會優先使用廣譜抗生素，起初治療效果顯著，但一旦動物發病，在疫病原因不明確的情況下，盲目或不適當的使用抗生素，長期會導致滇金絲猴體內菌群失調，陰溝腸桿菌從消化道移位到呼吸系統。

本病例陰溝腸桿菌對5種所試抗菌藥物均敏感，未出現耐藥的情況，這可能與治療時間較短有關系。本病例通過肌內注射頭孢曲松鈉0.1 g/(kg·bw)+地塞米松10 mg/(kg·bw)+利巴韋林10 mg/(kg·bw)+注射用水2 mL，早晚各1次，4 d后病情好轉，停藥觀察,該猴精神及飲食情況并未完全恢復，在停藥后的第2天死亡，說明應遵循早發現、早隔離、早治療的原則，對于疑難雜癥，必要時請專家會診。臨床用藥時，由獸醫診斷并通過藥敏試驗選擇敏感的藥物來對癥治療，合理使用抗生素種類和劑量，減少耐藥性的產生。在治療的同時，加強獸醫護理和飼養管理，每年至少定期開展1次細菌、病毒、寄生蟲等重要病原生物監測，準確了解滇金絲猴的健康狀況，以做好防治措施。加強金絲猴飼料營養，適當飼喂營養豐富的水果，并做到對飼養設施、食盒、玩具等進行清潔消毒,避免陰溝腸桿菌的散播。治療中待病癥消失后，抗生素還應該繼續使用2～3 d，鞏固療效以防止產生耐藥菌株。