養殖大菱鲆細菌性腹水病及其防治方法研究進展

黃華 張建柏 徐曉瑩 王鶴 王力勇 高雁 段鈺

(煙臺市海洋經濟研究院，山東煙臺 264000)

大菱鲆(Scophthalmusmaximus)隸屬于鰈形目(Pleuronectiformes)、鲆科(Bothidae)、菱鲆屬(Scophthalmus)，是原產于歐洲的冷水性底棲海水魚類[1]。大菱鲆于1992年被引入我國，因其營養豐富、經濟價值高，逐漸成為我國北方重要的養殖經濟魚類[2]。隨著養殖集約化、規模化的不斷發展，大菱鲆病害頻發，嚴重影響了該產業的可持續發展。其中，腹水病是在大菱鲆苗期和養成期都會暴發的1種疾病，該病發生頻率及死亡率較高[3]。據王嵐等[4]報道，大菱鲆腹水病的病原為細菌，未發現病毒和寄生蟲。誘發大菱鲆細菌性腹水病的病因很多，如水質變化、飼料質量、魚體自身免疫力、藥物使用不合理等[5]。本文綜述了養殖大菱鲆細菌性腹水病的臨床癥狀、流行特點、發病原因以及預防治療方法的研究進展，以期為大菱鲆細菌性腹水病的防治提供參考。

1 臨床癥狀

通過觀察臨床癥狀可以初步診斷大菱鲆是否患病。患腹水病的魚主要表現為不集群、行動遲緩、攝食能力減弱或不攝食等，最典型的癥狀是腹部隆起[4]。觀察患病初期的大菱鲆可發現，其腹部膨大，手感很硬，用力擠壓會有液體流出，嚴重時肛門紅腫外翻，鰭部出血，腹部凹陷，內臟團萎縮。患病的大菱鲆基本不攝食，死亡率高達80%以上[2,4,6]。解剖觀察發現，病魚腹腔內有微黃泛紅黏稠的液體，腸內有不同程度的積液，胃部出血，腸壁發炎，肝臟、腎臟腫大[2,4,6]。

圖1 患腹水病的養殖大菱鲆[7]

2 流行特點

細菌性腹水病流行區域很廣，我國沿海各省市的大菱鲆養殖區，如天津[2]，遼寧大連[8]，山東煙臺[4]、威海[4]、青島[9]，河北滄州[6]等地區均有報道。該病一年四季都會暴發，尤其在8、9月份高水溫期(18～20 ℃)病害更為嚴重，是大菱鲆工廠化養殖中危害最嚴重的病害之一，一旦發病，死亡率高達80%以上[8,10]。

3 發病原因

據報道，在育苗場的水體、投喂的活餌以及大菱鲆的腸道中都曾檢測出大菱鲆弧菌(Vibrioscophthalmi)。該弧菌是大菱鲆幼苗期腸道中占優勢數量的1種細菌，但在養殖池底沉積物中基本檢測不到。正常情況下大菱鲆弧菌沒有致病性[11-12]。并非所有存在于養殖環境和魚體中的大菱鲆腹水病病原菌都能致病，有的是條件致病菌，只有當魚體免疫力、水質環境、飼料等條件發生變化時才易引發疾病。

3.1 水質變化

多數細菌性疾病是通過水體傳播的，大菱鲆實現健康養殖的前提是保障良好的水質環境[13]。大菱鲆是底棲魚類，水質環境是影響其健康的重要因素之一。大菱鲆養殖過程中，水體中殘留的餌(飼)料、排泄物等有機碎屑日積月累沉積在水底，極易滋生病原菌。

3.2 飼料質量

養殖過程中若選用的飼料營養成分不全面、營養比例不均衡，會導致大菱鲆營養缺乏，免疫力下降，易受病原菌侵染，從而引發細菌性腹水病。有些含有野雜魚粉的飼料，由于原料無法保障新鮮度，可能攜帶病原菌(見表1)，投喂這種飼料也容易誘發細菌性腹水病[14-15]。另外，養殖戶自制的濕飼料如保存不當容易腐敗變質，且黏合性不易控制，投喂后易潰散，污染水體環境。

表1 野雜魚攜帶細菌情況調查結果[15]

3.3 魚體應激反應

大菱鲆受到較長時間、連續性刺激時，無法正常攝食，魚體的免疫力容易下降，此時若養殖環境發生變化，魚體極易感染病原菌。養殖過程中的分池倒池、不當清池、飼料轉換、養殖水體混濁、溶解氧過低等都易引發魚體的應激反應[6,16]。例如某地大菱鲆養殖場暴發腹水病，原因是道路施工及雨水污染造成了養殖水體渾濁，雖經及時治療，仍造成了20%的死亡率[16]。

3.4 感染病原菌

3.4.1 病原菌種類

目前的研究發現，從患腹水病的大菱鲆中檢測出的細菌有哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)[4]、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)[5]、遲鈍愛德華氏菌(Edwardsiellatarda)[4,5,8,17]、大菱鲆弧菌(V.scophthalmi)[4,9]、溶藻弧菌(V.alginolytious)[14,18-20]、鰻弧菌(V.anguillarum)[5,21]、假交替單胞菌(Pseudoalteromonasespejiana)[4,14]、鯊魚弧菌(V.carchariae)[9]、殺魚愛德華氏菌(E.piscicida)[22]、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[20]等。

3.4.2 病原菌分離鑒定方法

通過臨床癥狀，選擇具有腹水病典型癥狀的患病大菱鲆進行細菌分離。在無菌條件下進行解剖，選取病魚的腹水、肝臟、腎臟等病灶部位，用勻漿器混合勻漿，用接種環蘸取接種于2216E瓊脂平板培養基及TCBS(胰蛋白胨大豆肉湯)瓊脂平板培養基上[2,4,17]，28 ℃下培養24 h后，挑取優勢單一菌落進行平板劃線，直至獲得純培養的菌落。再對分離的細菌進行生理生化特性檢驗、人工感染試驗及分子生物學鑒定。鑒定大菱鲆腹水病病原菌可采用16S rDNA基因序列分析[9,23]。

3.5 藥物使用不當

濫用抗生素會使各類致病菌產生耐藥性[4]，使用不合理藥物還會對魚體內臟組織造成不同程度的損傷[24]。自從相關部門頒布了漁用禁用藥及休藥期等規定后，對禁用藥的管制措施進一步加大，濫用抗生素的現象得以好轉，但耐藥菌仍普遍存在。

4 預防方法

4.1 選用健康苗種

選擇健康的苗種是養殖成功的首要條件。健康苗種的選擇標準是體色正常、規格一致、體表無傷、發育正常、游動有力、攝食活躍等。引進苗種時要嚴格實施檢驗檢疫，避免將帶病苗種投入養殖區[13]。

4.2 保持良好水質

水源水質要符合《漁業水質標準》(GB 11607—1989)的要求，養殖水質應符合《無公害食品 海水養殖用水水質》(NY 5052—2001)的要求。養殖用水要進行砂濾—消毒—調溫的預處理，即先采用砂濾去除水體中的大型寄生蟲和有機碎屑，然后全池潑灑漂白粉、二氧化氯、二氧異氰脲酸鈉等氯制劑進行消毒，有條件的可選擇用紫外線或臭氧裝置消毒，再將水溫調節到所需的溫度。養殖日常管理要監測水質、水溫，做好換水、清池和消毒工作。養殖水溫通常控制在17～19 ℃。夏季多雨季節，采用混合自然海水養殖或使用地下鹵水養殖的要注意鹽度變化[13]。

4.3 選擇優質飼料

選購飼料時要充分考慮飼料的營養成分搭配，選用相對有質量保障的品牌飼料。自制飼料時要確保加工過程清潔無污染，飼料營養要均衡。投喂野雜魚要保證新鮮干凈，最好去除內臟后再投喂。飼料要存放于干燥通風的環境中，有條件的放置在冷庫中保存[13]。

4.4 免疫預防

疫苗接種是防治魚類細菌性疾病安全、環保、有效的方法[25-26]。

張麗等[27]采用0.5%福爾馬林滅活的方法制備了大菱鲆遲緩愛德華氏菌(即遲鈍愛德華氏菌)福爾馬林滅活疫苗，注射接種疫苗的大菱鲆對腹水病的免疫保護率(RPS)為70%，浸泡接種疫苗的大菱鲆對腹水病的RPS為35%。華東理工大學科研團隊研究了遲鈍愛德華氏菌的基因組和致病機制，采用高效疫苗分子設計和評價的關鍵技術，研制出針對遲鈍愛德華氏菌的“大菱鲆遲鈍愛德華氏菌活疫苗”(EIBAV1株)，于2016年獲得獸藥產品批準文號并正式投產，目前已在遼寧、山東、河北等我國大菱鲆養殖主產區開展了規模化應用[28]。

有學者進行了鰻弧菌疫苗接種大菱鲆的免疫效果研究[29-34]，優化了大菱鲆鰻弧菌滅活疫苗的生產工藝條件[35-36]，制備的滅活疫苗具有良好的安全性及效力，可用于大菱鲆鰻弧菌病的預防。肖鵬等[29]進行了鰻弧菌油乳化二價乳化疫苗對養殖大菱鲆免疫應答及免疫效果的研究，結果表明，口服乳化疫苗的大菱鲆對鰻弧菌M3、SMP1(為不同血清亞型菌株)的RPS分別為100%、50%，而口服未乳化疫苗大菱鲆的RPS分別為57.9%、0%。李杰等[30]以鰻弧菌O1血清型VAM003株和O2血清型VAM007株為抗原制備了福爾馬林滅活二價疫苗，該疫苗對大菱鲆的RPS為27%～60%。丁山等[31]制備了鰻弧菌O1、O2和O3血清型菌株的三價滅活疫苗，RPS最高可達100%，抗體持續期大于150 d，有效免疫保護期(RPS>70%)大于120 d。

曹宏梅等[32]制備的鰻弧菌和溶藻弧菌二聯疫苗對大菱鲆鰻弧菌和溶藻弧菌的RPS分別為83.52%和83.24%。鄧楠楠[33]制備了大菱鲆細菌性疾病五聯佐劑疫苗，對鰻弧菌、大菱鲆弧菌、遲鈍愛德華氏菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌的RPS分別為70.0%、87.5%、85.7%、75.0%、77.8%。劉瑞等[34]采用基因工程的方法，制備了副溶血弧菌tdh2基因和鰻弧菌ompU基因二聯DNA疫苗，經DNA疫苗免疫的大菱鲆對副溶血弧菌感染的RPS為100%，對鰻弧菌感染的RPS為35%。

5 治療方法

當大菱鲆確診患細菌性腹水病后，要及時清理死亡個體并進行銷毀，對病魚采取隔離措施，嚴格消毒，防止二次傳染。同時可通過降溫的方式控制病原菌的增殖速度，將水溫控制在14～15 ℃，但需注意水溫的日變幅不能過大，避免刺激魚體產生應激。日常管理時應減少投飼量和日投喂次數，使大菱鲆處在六七分飽的狀態。

現代水生動物病害防控技術發展日新月異，但藥物仍是治療患病動物的主要手段[37]。藥物選擇上，可選擇殺菌藥物進行藥浴，每立方米水體加鹽酸土霉素20 g和福爾馬林200 mL，每天1次，每次浸泡2 h，連續3～5 d[13]。口服法治療可選用氨芐青霉素或土霉素，將藥拌和在飼料中，用蛋清包裹風干后投喂，用藥量為每天每千克魚100～150 mg[13]。中草藥可以有效減少養殖魚類病害的發生[38]。實踐證明，中草藥對大菱鲆腹水病具有較好的預防作用[6]。李華等[39]通過將牛膝、板藍根、甘草、陳皮、肉桂、麥芽、神曲等7味中草藥制成的復方中草藥制劑添加于基礎飼料中，連續投喂大菱鲆，證實復方中草藥對大菱鲆具有一定的免疫調節及增強作用，可顯著提高大菱鲆的非特異性免疫力，對魚抵抗病原菌感染具有一定的增強作用。但是，中草藥對大菱鲆腹水病的治療效果不是很明顯，為達到更好的效果，還應使用國家允許的有質量保證的抗菌類藥物進行治療[16]。

6 結語

在大菱鲆養殖產業發展中，有養殖業者為實現利益最大化，過度增加養殖密度，忽視了水產疾病防控，結果導致大菱鲆發生腹水病，而治療過程中的藥物濫用和殘留等又會導致水產品安全問題，海域生態環境也會因此遭到破壞[40]。

魚類生活在水中，一旦生病，在治療及隔離上均比較困難，因而死亡率高，造成的損失較大[41]。因此，加強對大菱鲆腹水病的研究，從源頭上進行防控顯得尤為重要。在養殖過程中，只要提高防病意識，做好防病工作，可以大大減少病害的發生，降低治療成本。腹水病是養成期大菱鲆的常見疾病，細菌是導致腹水病的病原[9]。大菱鲆細菌性腹水病發病初期是內臟器官產生病變，中后期則全身感染。病魚腹部膨大癥狀明顯，極易觀察和診斷[42]。一旦發現大菱鲆患細菌性腹水病，可選擇中西醫結合的方法進行對癥治療，同時在治療過程中要注意用藥量及休藥期等問題。