麒麟尾組培苗繁殖生產技術

傅海平 陳生龍 江 南 謝小堅 韋 晴

（1.東莞市農業(yè)科學研究中心，廣東 東莞 523000；2.東莞市訊禾園藝科技有限公司，廣東 東莞 523000）

麒麟尾（Epipremnumpinnatum）屬天南星科多年生常綠藤本觀葉植物，原產我國南部的廣東、廣西、海南等省（自治區(qū)）及東南亞等地。麒麟尾葉長卵心形，葉綠且富有光澤，成熟葉為羽裂狀，易攀爬，其因特殊的品種特性近年來被廣泛用于垂直綠化。

扦插繁殖是麒麟尾繁殖方法中的一種，但扦插繁殖量少，整齊度不好，不能滿足市場需求。組培法是短期內快速繁殖大批量種苗的方法，不受氣候季節(jié)等影響。關于麒麟尾組織培養(yǎng)的研究報道不多，有研究為了品種的進一步推廣繁殖，用TDZ誘導叢生芽［1］。本試驗用6-BA對麒麟尾進行愈傷組織及叢生芽誘導、小苗溫室馴化研究，以期為品種規(guī)模化生產尋找良好的方法。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

選取生長良好的麒麟尾盆栽，品種來源于廣東省東莞市訊禾園藝科技有限公司。先用農地樂1 000倍液灌根處理，滅除基質中的蟲卵；再干水處理；待三四天水分完全干后，選一年生無病蟲害的健壯頂芽作外植體，切5～6 cm的帶頂芽莖稈（見圖1）。

圖1 麒麟尾消毒后的頂芽

1.2 方法

1.2.1 外植體處理。對新剪切的麒麟尾取其頂芽，放到凈水中用毛筆輕刷干凈，放在流動的自來水中沖洗0.5h。用無菌水沖洗莖段3次后用75%乙醇消毒10 s，再用無菌水沖洗兩三次，用0.1%氧化汞消毒8 min，最后用無菌水沖洗5～7次（以上每次無菌水沖洗時分別手搖1 min），用無菌濾紙吸干表面的水分。在超凈工作臺上用手術刀片將消毒后的莖切成2～3 cm小段［2-3］。

1.2.2 愈傷組織誘導。以MS為基本培養(yǎng)基，共設計了4種培養(yǎng)基用于麒麟尾外植體愈傷組織的誘導，分別為C1，MS+6-BA2.0 mg/L+IBA0.2 mg/L；C2，MS+6-BA3.0 mg/L+IBA0.2 mg/L；C3：MS+6-BA4.0 mg/L+IBA0.2 mg/L；C4：MS+6-BA5.0 mg/L+IBA0.2 mg/L；所有培養(yǎng)基的pH值均為5.8～6.0，每個配方加蔗糖30 g/L、卡拉膠5 g/L。共接20瓶，每瓶接種1個莖段，試驗重復3次。接種后放入培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)，前7 d暗培養(yǎng)，7 d后光照培養(yǎng)，光照度為40～50μmoL/（m·s），光照時間為12h/d，培養(yǎng)溫度（25±2）℃［4-6］。調查愈傷組織誘導率。

1.2.3 不定芽誘導和繼代。挑選直徑在1 cm左右的帶芽小塊，轉入4種不同的分化培養(yǎng)基中。對芽直徑大于2.5 mm的粗芽按2～4芽/團進行切割，并采用對剖方式破壞其生長點，若新芽抽出長度大于20 mm，去頂；對芽直徑小于或等于2 mm的細小芽，以8～10 mm的團塊直徑進行切割，將切割好的芽團接種于不同培養(yǎng)基中進行擴繁培養(yǎng)。

不定芽增殖培養(yǎng)基為B1，MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L；B2，MS+6-BA1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L；B3，MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.mg/L；B4，MS+6-BA2.5 mg/L+NAA0.5 mg/L，生根培養(yǎng)基為MS+NAA0.5 mg/L+1%活性炭+蔗糖30g/L+卡拉膠5.4g/L。在光照條件下培養(yǎng)，光照度為40～50μmoL/（m·s），光照時間為12h/d，溫度（25±2）℃。

1.2.4 麒麟尾組培苗移栽。當生根培養(yǎng)的瓶苗長至2.5～3.0 cm時，用自來水洗凈根部的培養(yǎng)基后放于1 000倍多菌靈消毒液中浸泡30 s，移栽到裝有不同基質［如按照m（細泥炭或泥炭）∶m（珍珠巖）=6∶1混合的基質或使用、國產泥炭］的穴盤中，每種處理1 000株。種植過程中大小分級，不要損害根系，前期每天早晚各噴水1次，溫度控制在27～30℃。后期濕度可降低到60%左右，待新根長出后施肥1次。馴化7 d后逐漸撤去薄膜，30 d待新根長出后進行種苗正常管理并統(tǒng)計成活率。

2 結果與分析

2.1 外植體愈傷組織形成的過程

麒麟尾莖段質地堅硬，形成愈傷組織的時間相對較長。外植體接種30 d后開始觀察愈傷組織的形成過程，結果如圖2所示。接種30 d后，基部開始膨大，不同培養(yǎng)基均能誘導外植體產生愈傷組織，但只有部分莖段形成愈傷組織時，愈傷組織為白色，絮狀且松軟，圍繞基部生長。60 d后，有的莖段基部開始形成叢生芽，如圖3所示。部分莖段形成愈傷組織的同時也出現(xiàn)新芽，剔除愈傷組織后，部分莖段能肉眼看出新的細微芽點，為下一階段形成叢生芽做準備。所以，培養(yǎng)30 d后外植體在不同培養(yǎng)基環(huán)境下部分莖段能產生少量愈傷組織，但不同培養(yǎng)基有不同的誘導反應。C3培養(yǎng)基愈傷誘導率達到48.3%，多于其他處理。C3是適合麒麟尾愈傷組織的誘導培養(yǎng)基（見表1）。雖然本研究外植體在適宜的培養(yǎng)基中均能產生愈傷組織，但是數(shù)量相對較少，愈傷組織松軟、分散，不容易形成不定芽。為了獲得良好、足夠數(shù)量的芽，需將新芽點挑選出來進行分切，然后誘導叢生芽。另外，愈傷組織隨著時間加長逐步褐化失去活性。本試驗采用了幼嫩和老的莖段，經觀察發(fā)現(xiàn)，新芽和老芽對愈傷組織及不定芽形成沒有顯著影響。

圖2 外植體接種后30 d后的生長狀態(tài)

圖3 外植體接種后60 d后的生長狀態(tài)

表1 不同激素梯度配比對愈傷組織誘導的效果

2.2 不同激素組合對不定芽誘導率的影響

研究表明，將剔除愈傷組織的芽點放置于培養(yǎng)基中培養(yǎng)30 d后，誘導的總芽數(shù)及不定芽是不同的。植物生長調節(jié)劑的種類及質量其濃度組合是調控外植體產生不定芽的主導因素。外植體接種在誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)30 d后，基部開始膨大，60 d后形成不定芽，結果如表2所示。在不同種類和質量濃度植物生長調節(jié)劑的培養(yǎng)下，都能產生一定數(shù)量的不定芽，但對不同種類植物生長調節(jié)劑的反應不同。4種不同培養(yǎng)基培養(yǎng)后不定芽數(shù)量不一樣。這些在培養(yǎng)基上再生的不定芽繼續(xù)培養(yǎng)30 d后，再生了許多具有根和芽的小苗，B2培養(yǎng)基中不定芽誘導率高達275%，培養(yǎng)后的芽數(shù)最多（圖4），說明此培養(yǎng)基適合麒麟尾不定芽的誘導。

表2 不同植物生長調節(jié)劑梯度配比對外植體不定芽誘導的效果

圖4 麒麟尾叢生芽誘導

2.3 小苗的生根培養(yǎng)

小芽點在增殖培養(yǎng)后，產生了大量的不定芽，將芽分切成單株，在附加有1 mg/L 6-BA和1 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)1個月30 d后，再生了帶有根和芽的小苗。當團塊上的芽長度在15～20 mm，具有2片完整葉且葉片平展時，按單芽切割，將切下來的單芽接種到附帶活性炭的培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)15 d后開始長根，42 d后長根率達到98%，具有3片葉且長勢健壯，小苗葉片呈綠色。

2.4 組培苗溫室馴化

麒麟尾組培生根苗轉移到溫室中經過自然光練苗5 d后，根系較多，莖稈直徑大且呈直立狀（圖5）。麒麟尾組培生長速度慢，前期生長勢相對較弱，生根后練苗很關鍵，能彌補前期不足。復壯后開袋種植，能顯著提高成活率，節(jié)省后期育苗時間。溫室管理著重水分調節(jié)，間干間濕能強化根系生長，待其長到一定程度后適當加強光照，使穴苗生長健壯、光亮，整個過程中注意通風保濕，全程做好細節(jié)管理，病蟲害以防為主。經3種基質種植后，純泥炭基質種出來的品質比較好，見表3。

圖5 溫室馴化苗

表3 不同基質組培苗移栽成活率

3 討論

3.1 愈傷組織不易形成不定芽

麒麟尾選擇外植體誘導時，取材部位對誘導影響較大，是后期組培成功的關鍵因素。因此，本試驗選擇一年生生長勢旺、無病害植株頂芽做外植體。通過本誘導試驗，發(fā)現(xiàn)添加不同質量濃度的6-BA對愈傷誘導有明顯的差異，6-BA（4.0 mg/L）有利于愈傷組織的形成。高質量濃度植物生長能產生大量愈傷組織，但是植物生長調節(jié)劑偏高不利于后期培養(yǎng)，高植物生長調節(jié)劑易產生玻璃化，后期容易退化、形成石頭苗等。本試驗的愈傷組織在后期容易褐化，不能形成不定芽，和許渝花等研究的愈傷組織直接生成不定芽結論不一致［4-6］，可能是在不同植物生長調節(jié)劑下有不同的效果。

3.2 1.5 mg/L6-BA有利于不定芽增殖

由于早期植物生長調節(jié)劑高質量濃度偏高，為了減少植物生長調節(jié)劑累積影響，在訊禾公司規(guī)模化生產中應用1.5 mg/L6-BA的誘導繁殖系數(shù)為1.40～2.75，是比較理想的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基高質量濃度適度即可保證一定的增殖率，又不至于使植株過早老化，是穩(wěn)定生產的基礎。不同植物生長調節(jié)劑及不同濃度對誘導有不同的效果［7-9］，可以試驗使用其余植物生長調節(jié)劑誘導。

3.3 麒麟尾品種性狀比較特殊，苗期生長慢，組培成本相對較高

早期母本的選擇和組培過程中及時轉切可降低生產成本，切割過程中剔除老化、質量不好的芽和組織；轉切時適當去頂有利于提高增殖系數(shù)，并及時挑出污染苗。當根系數(shù)量為兩三條時轉移到煉苗溫室，經過自然光照射15 d后苗挺立，稈子粗壯，根系發(fā)達，保證后期溫室馴化苗的品質。

4 結論

本試驗以麒麟尾一年生盆栽頂芽為材料，篩選其誘導、增殖的最佳培養(yǎng)基，優(yōu)化溫室馴化方法，以規(guī)模化生產種苗為研究對象。麒麟尾的愈傷組織誘導率最高的培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0 mg/L+IBA0.2 mg/L，MS+6-BA1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L為不定芽增殖最佳培養(yǎng)基，增殖率275%，加之適度的光溫條件，可生產出優(yōu)質的組培苗，經自然光照煉苗后的組培苗移栽成活率達到98%。溫室馴化以進口品氏泥炭（0~10#）為最佳種植基質，后期間干間濕、適度提高光照的生產養(yǎng)護管理能保證品質。通過麒麟尾組織培養(yǎng)和溫室生產技術的研究，建立麒麟尾組培快繁體系，為麒麟尾工廠化生產提供可靠的技術支撐。