284例珠蛋白生成障礙性貧血產前基因診斷結果分析

胡新年，歐陽慧，劉冬霞，許偉華，羅偉平，龍 輝，黃美瓊

清遠市婦幼保健院優生與遺傳實驗診斷中心，廣東清遠 511500

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)是一種珠蛋白基因突變引起機體內的珠蛋白鏈的合成不足或缺失而導致的一種慢性溶血性貧血[1]。目前實驗室主要檢測地貧為α地貧和β地貧，α地貧一般分為靜止型、標準型、中間型和重型4種類型，β地貧主要分為輕型、中間型和重型3種類型[2]。重型α地貧患兒地貧患兒由于染色體上4個α-基因缺失，體內合成的γ鏈沒有與α鏈結合形成γ四聚體，一般在妊娠后期會造成嬰兒宮內死亡流產或者出生后幾小時內死亡，同時也會增加孕婦患癲癇、妊娠高血壓綜合征、產后出血等并發癥的風險[3-4]。重型β地貧患兒一般在出生6個月以后才表現出貧血的臨床癥狀，需要依賴輸血來進行治療，一般存活至10歲[5-8]。已有研究證明清遠地區地貧基因的攜帶率約為20.9%，屬于地貧高發地帶，因此，在清遠地區開展地貧產前診斷具有重要意義[9-10]。本文對本院開展的284例地貧基因產前診斷結果進行回顧性分析。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2019年10月來清遠市婦幼保健院咨詢并進行地貧基因產前診斷的孕婦284例作為研究對象，孕婦孕周為16～24周，每位抽取約20 mL羊水分裝為3管進行檢測，本研究符合本院醫學倫理委員會相關標準，并獲得該倫理委員會批準，受檢者均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1基因提取 本實驗室采用北京天根生物科技有限公司生產的羊水提取試劑盒提取基因，每次實驗為雙人平行實驗，每次試驗前均用分光光度計對每次提取的DNA濃度和純度進行檢測，以保證實驗的準確性。

1.2.2基因檢測 缺失型α地貧的產前診斷采用跨越斷裂點PCR技術，非缺失型α地貧和β地貧的產前診斷采用反向斑點雜交技術進行檢測，所有的地貧基因檢測試劑盒均來自于深圳亞能生物科技有限公司，檢測的α-缺失型為--(SEA)/αα，-α(3.7)/αα，-α(4.2)/αα，α非缺失型常見的包括αCSα/αα，αQSα/αα，αWSα/αα。β地貧檢測17種分別為-28、-29、-30、-32、CD14-15、CD17、CD26(βE)、CD27-28、CD31、 CD41-42、CD43、CD71-72、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、IVS-Ⅱ-654、CAP+1、initiation condon。每次實驗均有陽性、陰性和空白對照，對于罕見的或者超出檢測范圍的送至廣東省婦幼保健院檢測。

1.3隨訪 產前基因診斷完成6～8 個月后，實驗室檢測的284例樣本均由產前診斷科醫生進行隨訪，對于重型地貧患兒的后續處理均有追蹤，對于非重型的患兒均有新生兒血紅蛋白電泳篩查和回訪，對于有地貧基因檢測的新生兒則進行基因統計，已驗證實驗診斷的準確性。

2 結 果

2.1284例地貧基因產前診斷結果分析 在檢測的284例樣本中，父母為同型α地貧共215例，其中檢出重型α地貧36例，中間型α地貧11例，輕型α地貧111例，正常基因型αα/αα 57例。父母為同型β地貧共52例，其中檢出中重型β地貧17例，輕型β地貧20例，正常基因型αα/αα 15例。父母一方為一種地貧基因攜帶者另一方為α復合β地貧基因或者雙方均為α復合β地貧基因的樣本17例，其中檢出重型α地貧1例，中重型β地貧1例，中間型α地貧復合輕型β地貧1例，輕型α地貧復合輕型β地貧14例。

2.2215例α地貧基因檢測結果分析 在215例羊水檢測中檢出重型α地貧36例，占16.74%，中間型α地貧11例，占5.12%，其中基因型--(SEA)/-α(3.7) 8例，--(SEA)/α(WS)α、--(SEA)/α(QS)α和--(SEA)/α(CS)α各有1例，輕型α地貧111例，占51.63%，基因型--(SEA)/αα 97例，α(WS)α/αα 3例，-α(4.2)/αα 2例，-α(3.7)/αα 8例，正常基因型aa/aa 57例，占26.51%。

2.352例β地貧基因檢測產前診斷結果分析 52例β地貧基因檢測中檢出中重型β地貧17例，基因型分別為 βCD41-42/βCD17 2例、βCD41-42/βCD41-42 4例、βCD41-42/β IVS-II-654 5例、β-28/βCD17 1例、β-28/β IVS-II-654 2例、β IVS-II-654/βCD17 1例、β IVS-II-654/βCD26 1例、β IVS-II-654/β-29 1例，總占比32.08%。輕型β地貧20例，基因型分別為βCD17/βN 2例、β-28/βN 1例、β-29/βN 1例、β IVS-II-654/βN 1例、βCD26/βN 2例、β IVS-I-1位點突變1例、βCD41-42/βN 10例，總占比35.90%。正常基因型βN/βN 15例，占28.30%。

2.417例復合型地貧基因檢測結果分析 17例復合型地貧中，檢出重型α地貧[--(SEA)/--(SEA),βCD41-42/βN ]1例，占6.67%，重型β地貧[βCD41-42/β-28,-α(3.7)/αα]1例，占6.67%，中間型α地貧復合輕型β地貧[--(SEA)/α(3.7),βCD41-42/βN]1例，占6.67%，輕型α地貧復合輕型β地貧14例，基因型分別為βCD41-42//βN,--(SEA)/αα 4例、--(SEA)/αα,βIVS-II-654/βN 1例、--(SEA)/αα,βCD43/βN 2例、--(SEA)/αα,βCD71-72/βN 1例、α(WS)α/αα,β IVS-II-654/βN 1例、-α(3.7)/αα,βCD41-42/βN 1例、-α(3.7)/αα,βCD17/βN 1例、-α(3.7)/αα,β-28/βN 1例、-α(4.2)/αα,βCD41-42/βN 1例、-α(4.2)/αα,β IVS-II-654/βN 1例，總占比82.35%。

2.5隨訪結果 產前基因診斷完成6～8個月后，電話隨訪共67例嚴重類型地貧患兒(37例巴氏水腫胎、11例中間型α地貧、1例中間型α地貧復合輕型β地貧和18例嚴重類型β地貧患兒)和3例輕型α地貧伴18三體綜合征胎兒，其中37例巴氏水腫胎、9例中間型α地貧和18例嚴重類型β地貧患兒和3例輕型α地貧伴18三體綜合征胎兒均在知情同意和自愿選擇的原則下接受了終止妊娠的處理，有2例中間型α地貧和1例中間型α地貧復合輕型β地貧的孕婦未進行終止妊娠，140例其他基因型的地貧患兒出生后均進行新生兒血紅蛋白電泳篩查和地貧基因檢測，檢測結果與產前診斷結果完全吻合，有5個患兒失訪，無人接聽電話。

3 討 論

地貧是一種遺傳性的溶血性貧血，在中國南方地區廣泛分布[11-12]。清遠位于粵北地區，地域跨度廣，本地居民多，地貧基因攜帶率高，因此清遠地區地貧防控具有重要意義。

清遠地區α地貧攜帶率高，其中又以東南亞缺失型[基因型為--(SEA)/αα]居多，東南亞缺失型表示患者缺失兩條α蛋白基因鏈，當兩個同為東南亞缺失型基因攜帶者結合有25%的概率生育重型α地貧患兒，本研究檢測到36例重型α地貧患兒，經調查所有孕婦均終止妊娠。當父母一方為東南亞缺失型和另一方靜止型基因攜帶者時，25%的概率生育中間型α地貧患兒，本研究共檢測到11例中間型α地貧，患者的表型存在個體差異性，本實驗室在地貧基因檢測中多次檢測到成年的中間型α地貧患者，因此中間型α地貧患兒的去留取決于父母的要求。

β地貧是由于β珠蛋白鏈突變引起的，與α地貧基因分型不同，β地貧基因突變按照嚴重程度可以分為β+和β0兩種，當基因型為β+/β+時，為中間型β地貧，基因型為β+/β0時，則根據個人表型可以表現出不同表型，可能為中間型β地貧或者重型β地貧患兒，基因型為β0/β0時，則為重型β地貧患兒，因此產前診斷科醫生和實驗人員在分析β地貧基因診斷結果時需要特別謹慎。父母雙方均為β地貧基因攜帶者時，有25%的概率生育中重型β地貧患兒，本研究中52例β地貧基因檢測中檢出中重型β地貧17例，占32.08%。

α地貧復合β地貧的患者，臨床癥狀較單種輕，主要原因是為復合型地貧患者，其α和β-珠蛋白基因在體內同時存在缺陷，從而導致α珠蛋白鏈和β珠蛋白鏈合成同時減少，致使α鏈與β鏈的相對不平衡減輕[13-14]。本研究中檢測到17例復合型地貧基因，其中2例為重型地貧。

地貧目前沒有較好的治療方法，只能進行預防。當父母雙方均為同型地貧基因攜帶者時，可以通過產前咨詢和診斷，預防重型地貧患兒的出生。清遠地區地貧基因攜帶率高，地域廣闊，因此需要加大地貧的預防宣傳，提高民眾對該病的知曉率，對指導優生優育具有重要意義。