墊狀卷柏化學(xué)成分的研究

呂華偉，李宇霞，羅 蒙，江恒沛，張宏建，顏繼忠?

（1.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，浙江杭州 310014；2.綠谷生物藥業(yè)有限公司，浙江麗水 323000；3.浙江省中醫(yī)藥研究院，浙江省中藥新藥研發(fā)重點實驗室，浙江杭州 310007）

墊狀卷柏Selaginella pulvinata（Hook.＆ Grev.）Maxim.為卷柏科卷柏屬植物，與卷柏Selaginella tamariscina（Beauv.）Spring 一起收錄于2020 年版《中國藥典》［1］，別名石蓮花、還魂草、長生不死草，主要分布于四川、云南、西藏、廣西、廣東、江西、湖北、河南和河北等［2］，具有活血通經(jīng)、消炎散熱等功效，用于治療經(jīng)閉痛經(jīng)、癥瘕痞塊、跌撲損傷等［3］。近年來研究表明，墊狀卷柏含有黃酮類、炔酚類、木脂素類等成分，具有抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖、抗菌等作用，我國民間常用其治療高血糖、癌癥等疾病［4-8］。為了進(jìn)一步更好更合理地開發(fā)利用該植物資源，充分發(fā)揮其藥用價值，本實驗對其化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，從中分離得到8 個化合物，其中2、6～8 均為首次從卷柏屬中分離得到。

1 材料

AvanceⅢ600 MHz 超導(dǎo)核磁共振譜儀（瑞士Bruker 公司）；綠棉制備型高效液相色譜儀（綠棉科技有限公司）；中低壓制備液相（瑞士Buchi 公司）；薄層硅膠G 和柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；Shim-pack GIST C18制備型色譜柱（20 mm×250 mm，5 μm）；Inertsustain C18分析型色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。所有試劑均為分析純。

墊狀卷柏于2017 年6 月購自廣東，經(jīng)浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院楚楚副教授鑒定為墊狀卷柏Selaginella pulvinata（Hook.＆ Grev.）Maxim.的干燥全草，憑證標(biāo)本（201706ST）存放在浙江工業(yè)大學(xué)中草藥標(biāo)本室。

2 提取與分離

將15 kg 干燥的墊狀卷柏全草粉碎，用25 L 95%乙醇室溫下冷浸提取3 次，每次48 h，提取液經(jīng)合并濃縮后得粗浸膏1.7 kg。粗浸膏用水混懸，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，濃縮后得到二氯甲烷部位540 g、乙酸乙酯部位122 g、正丁醇部位212 g。其中，二氯甲烷部分經(jīng)MCI 柱色譜，甲醇-水（30∶70～100∶0）梯度洗脫，得到6 個餾分A～F。餾分A 經(jīng)硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇（40∶1～10∶1）梯度洗脫，得到25 個亞餾分Aa～Ay，Aa 經(jīng)中壓柱色譜分離，甲醇-水（20∶80～100∶0）梯度洗脫，得到4 個亞餾分Aa-1～Aa-4，Aa-1 經(jīng)硅膠柱色譜純化，再通過制備型HPLC 制備（乙腈-水，25∶75）得到化合物3（3.7 mg）；Aa-2 經(jīng)硅膠柱色譜純化，再通過制備HPLC（乙腈-水，20∶80）得到化合物2（20 mg）、7（5 mg）；餾分C 經(jīng)硅膠柱色譜純化，再通過制備HPLC（乙腈-水，30∶70）得到化合物8（7 mg）；餾分D 經(jīng)硅膠柱色譜分離，再經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠柱色譜（甲醇）純化得到化合物1（27.2 mg）；餾分E 經(jīng)硅膠柱色譜純化，再通過制備HPLC（乙腈-水，35∶65）得到化合物4（7 mg）、5（9.2 mg）、6（7.9 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末；C30H18O10，ESI-MSm／z：537.1 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：6.20（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.40（1H，s，H-6″），6.47（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.71（1H，s，H-3），6.73（1H，s，H-3″），6.80（1H，s，H-3?），6.84（1H，s，H-5?），7.15（1H，d，J＝9.0 Hz，H-5′），7.57（1H，s，H-2?），7.59（1H，s，H-6?），8.01（2H，m，H-6′，H-2′），10～11（4H，br OH-7，OH-4′，OH-7″，OH-4?），12.99（1H，s，OH-5″），13.11（1H，s，OH-5）；13C-NMR（150 MHz，DMSO）δ：94.5（C-6″），99.1（C-6），99.3（C-8），103.0（C-3″），103.4（C-4a），104.0（C-3），104.1（C-8″），104.5（C-4a″），116.2（C-1?，3?），116.7（C-5′），120.5（C-1″），121.3（C-1′），121.9（C-3′），128.2（C-6′），128.7（C-2?，6?），131.9（C-2′），154.9（C-8a″），157.8（C-8a），160.1（C-5″），162.5（C-4′），164.1（C-2），164.3（C-2″），164.6（C-7），182.2（C-4″），182.6（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為穗花杉雙黃酮。

化合物2：白色無定形粉末；C11H16O3，ESIMSm／z：197.1 ［M-H］+。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：1.20，1.40，1.72（each 3H，H1-2CH3，H5-CH3），1.46（1H，dd，J＝3.5，14.5 Hz，H-2），1.93（1H，tt，J＝2.5，14.5 Hz，H-4），2.41（1H，tt，J＝2.5，14.0 Hz，H-3），4.26（1H，m，H3-OH），5.62（1H，s，H-7）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：26.6，27.1（C1-2CH3），30.8（C5-CH3），36.1（C-1），45.2（C-2），47.3（C-4），66.8（C-3），87.1（C-5），112.9（C-7），172.3（C-6），183.0（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為黑麥草內(nèi)酯。

化合物3：白色粉末；C9H10O5，ESI-MSm／z：197.0 ［M-H］-。1H-NMR（500 MHz，CD3COCD3）δ：3.88（6H，s，H4，6-OCH3），7.33（2H，s，H-3，H-7）；13C-NMR（150 MHz，CD3COCD3）δ：56.5（C4，6-OCH3），107.9（C-3，C-7），121.4（C-2），141.4（C-5），149.2（C-4，C-6），167.5（C-1）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為丁香酸。

化合物4：暗紅色粉末；C34H24O5，ESI-MSm／z：511.2 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：4.79（2H，s，H-30），6.58（4H，d，J＝6.0 Hz，H-19，21，25，27），6.70（2H，d，J＝7.2 Hz，H-19，21，25，27），6.77（1H，d，J＝8.4 Hz，H-6），6.87（2H，d，J＝6.6 Hz，H-12，16），7.10（4H，d，J＝6.6 Hz，H-18，22，24，28），7.49（1H，d，J＝7.8 Hz，H-3），7.60（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5），7.68（1H，d，J＝5.4 Hz，H-4）；13CNMR（150 MHz，CD3OD）δ：63.7（C-30），66.2（C-9），85.5（C-10），102.5（C-11），113.4（C-8），115.2（C-19，21，25，27），115.5（C-17），115.7（C-6），116.4（C-13，15），119.5（C-4），120.7（C-1），121.6（C-5），127.6（C-3），131.4（C-18，22，24，28），132.2（C-4b），133.7（C-12，16），135.3（C-23，29），141.6（C-4a），141.8（C-2），153.7（C-9a），156.9（C-20，26），157.6（C-8a），159.1（C-7），159.1（C-14）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為selaginpulvilin A。

化合物5：暗紅色粉末；C34H24O5，ESI-MSm／z：511.2 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：4.95（2H，s，H-26），6.54（6H，d，J＝8.4 Hz，H-2，6，9，11，21，23），6.63（2H，d，J＝9.0 Hz，H-30，32），6.78（2H，d，J＝8.4 Hz，H-20，24），6.99（2H，d，J＝2.4 Hz，H-29，33），7.15（4H，brs，H-3，5，8，12），7.35（1H，d，J＝8.4 Hz，H-17），7.72（1H，d，J＝8.4 Hz，H-16）；13CNMR（150 MHz，CD3OD）δ：63.5（C-26），84.6（C-27），100.5（C-28），114.5（C-34），115.7（C-21，23），116.4（C-30，32），123.7（C-14），128.8（C-16），130.9（C-17），131.0（C-20，24），131.8（C-4，13），133.0（C-25），134.1（C-29，33），142.3（C-19），142.9（C-15），143.5（C-18），157.9（C-22），159.5（C-31），165.4（C-1，7，10）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為selaginellin。

化合物6：淡黃色粉末；C10H12O4，ESI-MSm／z：195.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CDCL3）δ：2.10（3H，s，H-9），2.46（2H，s，H-10），3.92（3H，s，H-8），5.30（1H，s，H2-OH），6.20（1H，s，H-5），12.01（1H，s，H6-OH）；13C-NMR（150 MHz，CDCL3）δ：7.8（C-9），24.2（C-10），51.9（C-8），105.4（C-3），108.7（C-1），110.7（C-5），140.3（C-4），158.2（C-2），163.3（C-6），172.7（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為2，6-dihydroxy-3，4-dimethylbenzoic acid methyl ester。

化合物7：白色固體；C22H22O11，ESI-MSm／z：497.1 ［M+Cl］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：3.48～3.78（6H，m，sugar-H），3.96（3H，s，H4′-OCH3），5.11（1H，d，J＝4.2 Hz，H-1″），6.58（1H，s，H-6），6.77（1H，s，H-8），6.92（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5′），7.05（1H，d，J＝7.8 Hz，H-6′），7.24（1H，s，H-2′），8.23（1H，s，H-2）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：56.5（4′-OCH3），62.4（C-6″），71.2（C-4″），74.7（C-2″），77.9（C-3″），78.4（C-5″），95.6（C-8），101.1（C-6），101.7（C-1″），108.0（C-10），114.0（C-5′），116.0（C-2′），122.9（C-6′），123.6（C-1′），125.1（C-3），148.1（C-3′），7.8（C-9），148.8（C-4），155.5（C-2），159.2（C-9），163.6（C-7），164.8（C-5），182.5（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為 pratensein-7-O-β-D-glucopyranoside。

化合物8：白色晶體；C9H10O3，ESI-MSm／z：165.1 ［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：1.36（3H，t，J＝7.2 Hz，H-2′），4.30（2H，q，J＝7.2 Hz，H-1′），6.82（2H，dd，J＝2.4，7.2 Hz，H-2，6），7.87（2H，dd，J＝1.8，6.6 Hz，H-3，5）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：14.7（C-2′），61.7（C-1′），116.1（C-3，5），122.5（C-1），132.7（C-2.6），163.4（C-4），168.2（-C ＝O）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致，故鑒定為4-ethoxy benzoic acid。

4 討論

本實驗通過MCI、硅膠柱色譜等方法對墊狀卷柏全草化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到8 個化合物，其中化合物2、6～8 均為首次從卷柏屬中分離得到。藥理研究表明化合物1 具有降糖活性［17-18］；化合物5 對PTP1B 具有一定的抑制作用，而PTP1B 是胰島素信號通路的一個重要靶點，PTP1B抑制劑對治療糖尿病具有較大潛力［13］。因此，對墊狀卷柏中降糖活性成分的研究具有一定的應(yīng)用價值。