膿毒癥合并急性腎損傷患者血清miR-205、miR-233相對表達水平與腎功能及預后的關系*

容維娜,張 霞,尹彥芬△,趙國棟,王勝磊,李曉峰,張慧祺,劉月宣

1.石家莊市第一醫(yī)院急診科，河北石家莊 050000；2.石家莊市人民醫(yī)院中心院區(qū)神經內科，河北石家莊 050000

膿毒癥極易導致腎功能受損，以急性腎損傷(AKI)最為常見，對患者生命構成威脅。目前，AKI已被證實為膿毒癥患者死亡的危險因素，即便在患者腎功能受損程度較輕的情況下，也可增加膿毒癥的死亡風險[1]。有研究表明，在膿毒癥進展過程中，患者機體處于炎癥狀態(tài)，且呈加重趨勢[2]。有學者發(fā)現(xiàn)，微小RNA(miR)-205、miR-233與機體炎癥程度存在關聯(lián)[3]。miR-205、miR-233是RNA分子中的重要組成部分，其在細胞增殖、分化過程中均發(fā)揮作用[4]，二者可用于評價惡性腫瘤進展情況，但關于其在膿毒癥合并AKI中的研究報道較少見。基于此，本研究通過分析膿毒癥合并AKI患者miR-205、miR-233表達水平與腎功能及預后的關系，旨在為臨床膿毒癥合并AKI患者的病情及預后評估提供一定參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取石家莊市第一醫(yī)院2015年7月至2017年7月收治的膿毒癥患者150例作為研究對象，根據其是否合并AKI分成AKI組(72例)和非AKI組(78例)。選取石家莊市第一醫(yī)院同期收治的70例健康體檢者作為對照組。AKI組中，男39例，女33例；平均年齡為(54.59±11.24)歲；平均體質量指數為(21.61±2.73)kg/m2；一般膿毒癥61例，膿毒癥休克11例；平均膿毒癥死亡風險評分[5](MEDS評分)為(9.19±3.26)分。非AKI組中，男41例，女37例；平均年齡為(52.65±8.27)歲；平均體質量指數為(22.04±1.16)kg/m2；一般膿毒癥65例，膿毒癥休克13例；平均MEDS評分為(9.51±2.95)分。對照組中男32例，女38例；平均年齡為(55.06±10.08)歲；平均體質量指數為(22.15±1.02)kg/m2。研究方案獲石家莊市第一醫(yī)院倫理委員會批準。3組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2診斷標準

1.2.1膿毒癥診斷[6](1)一般指標：包括意識改變、體溫改變、氣促、心率>90 次/分鐘、水腫、高糖血癥(無糖尿病史)；(2)血流動力學：平均動脈壓低于70 mm Hg，收縮壓低于90 mm Hg，心排血指數高于3.5 L·min-1·m-2；(3)炎性反應：白細胞計數低于4×109/L或高于12×109/L，或白細胞計數未見異常，不成熟白細胞超過0.10，前降鈣素、C反應蛋白表達水平急劇升高；(4)組織灌流指標：皮膚伴有花斑，或毛細血管再充盈時長明顯增加，高乳酸血癥；(5)器官功能障礙：急性少尿，凝血機制異常，腹脹，血小板計數低于100×109/L，總膽紅素>70 μmol/L，低氧血癥。

1.2.2AKI診斷[7](1)在48 h內，血肌酐(Scr)增高至>0.3 mg/dL；(2)在1周內，Scr較基線水平升高1.5倍；(3)尿量少于0.5 mL/(kg·h)，持續(xù)時間超過6 h；(4)將尿路梗阻等因素引起的尿量減少排除。

1.3納入和排除標準

1.3.1納入標準 (1)非AKI組：①經臨床檢查均證實為單純膿毒癥，診斷明確；②年齡≥18歲；③住院時間至少為3 d；④近3個月內無免疫調節(jié)劑、糖皮質激素治療史；⑤知情同意。(2)AKI組：①臨床診斷為膿毒癥合并AKI；②其余各項與非AKI組的納入標準相同。(3)對照組：①同期于石家莊市第一醫(yī)院行體檢，身體狀況良好；②性別、年齡等一般資料與AKI組、非AKI組匹配；③知情同意。

1.3.2排除標準 (1)妊娠、哺乳期；(2)免疫系統(tǒng)疾病；(3)入院后生存時間不超過24 h；(4)近期有腎毒性藥物應用史；(5)既往有腎移植治療史。

1.4檢測方法 所有納入者于入院或體檢當日采集4 mL肘靜脈血，分裝于兩管，一管用于檢測血清miR-205、miR-233，另一管用于檢測腎功能指標。

1.4.1血清miR-205、miR-233檢測 行離心處理(3 000 r/min)，時間為10 min，離心半徑12 cm，分離血清保存待測。經miRNeasy Serum/Plasma kit對總RNA進行提取，待標本測定合格后，行反轉錄。利用RT-PCR對血清miR-205、miR-233相對表達水平進行測定，試劑盒均由美國賽默飛世爾科技公司提供。miR-205引物序列：正向引物為5′-ACACTCCAGCTGGGTCCTTCATTCCACCGGAG-3′；反向為5′-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3′。miR-233引物序列：正向引物為5′-GACATTATGGTTGCTTCG-3′；反向為5′-GAGATGCTGAGGTGAGAG-3′。內參引物U6-F引物序列：正向引物為5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′；反向為5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。RT-PCR反應條件：95 ℃ 30 s，接著進行40個循環(huán)，反應條件為95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s，根據2-ΔΔCt值法對miR-205、miR-233在血清內相對表達水平進行計算。

1.4.2腎功能檢測 針對血液標本行抗凝處理，離心10 min(2 500 r/min，離心半徑7 cm)，取血清存放于低溫冰箱待測。經全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，BS-220)測定Scr、胱抑素C(Cys-C)，經腎動態(tài)顯像分析腎小球濾過率估算值(eGFR)。

1.5觀察指標 比較AKI組、非AKI組、對照組的血清miR-205、miR-233相對表達水平及腎功能指標水平。電話隨訪2年，分析膿毒癥合并AKI患者的預后情況，并據此分成生存組、死亡組，比較兩組各指標水平。

2 結 果

2.13組血清miR-205、miR-233表達水平及腎功能指標表達水平比較 AKI組、非AKI組血清miR-233相對表達水平及Scr、Cys-C水平均明顯高于對照組，且AKI組明顯高于非AKI組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。AKI組、非AKI組血清miR-205相對表達水平、eGFR均明顯低于對照組，且AKI組明顯低于非AKI組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組血清miR-205、miR-233相對表達水平及腎功能指標水平

2.2膿毒癥合并AKI患者血清miR-205、miR-233與腎功能相關性分析 經相關性分析提示，血清miR-205與Scr、Cys-C呈負相關(r=-0.894、-0.625，P<0.05)，與eGFR呈正相關(r=0.828，P<0.05)，血清miR-233與Scr、Cys-C呈正相關(r=0.842、0.620，P<0.05)，與eGFR呈負相關(r=-0.799，P<0.05)，見表2。

2.3膿毒癥合并AKI患者生存、死亡者血清miR-205、miR-233相對表達水平比較 隨訪期間無失訪病例。在72例患者中，53例生存，19例死亡。生存組血清miR-233相對表達水平低于死亡組，血清miR-205相對表達水平高于死亡組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表2 膿毒癥合并AKI患者血清miR-205、miR-233與腎功能相關性分析

表3 生存組和死亡組血清miR-205、miR-233相對表達水平比較

2.4血清miR-205、miR-233表達與膿毒癥合并AKI患者預后的關系分析 以miR-205相對表達水平均值(0.05)為界，將膿毒癥合并AKI患者分成miR-205低表達組(26例)和高表達組(46例)。低表達組病死率為42.31%，明顯高于高表達組的17.39%，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.309，P=0.021)。以miR-233相對表達量均值(4.39)為界，將膿毒癥合并AKI患者分成miR-233高表達組(24例)和低表達組(48例)。高表達組病死率為41.67%，明顯高于低表達組的18.75%，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.326，P=0.038)。見圖1。

圖1 Kaplan-Meier生存曲線分析miR-205、miR-233表達與預后的關系

2.5Cox回歸模型分析膿毒癥合并AKI患者預后的影響因素 年齡≥60歲、合并慢性病及血清miR-233高表達是膿毒癥合并AKI患者不良預后的危險因素(P<0.05)，而miR-205高表達是良好預后的保護因素(P<0.05)，見表4。

表4 Cox回歸模型分析膿毒癥合并AKI患者預后的影響因素

3 討 論

膿毒癥病死率較高，其發(fā)病機制涉及的內容較多，包括免疫、感染、組織損傷、機體炎癥等，且可導致多器官、多系統(tǒng)病變[8]。腎損傷在膿毒癥后較常見，大部分患者表現(xiàn)為AKI。有研究指出，膿毒癥后AKI的發(fā)生主要因細胞損傷、凋亡及炎癥刺激所致[9]。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA可能參與了膿毒癥進展過程，為該病治療提供了新思路[10]。有學者針對膿毒癥患者進行分析，發(fā)現(xiàn)輕度、重度患者的部分miRNA相對表達水平存在明顯差異[11]。這提示miRNA可能對膿毒癥病情評估有重要意義。

本研究結果顯示，與健康者比較，膿毒癥合并AKI患者與單純膿毒癥患者的血清miR-233相對表達水平明顯上調，血清miR-205相對表達水平明顯下調，其中膿毒癥合并AKI患者的各項指標改變最明顯。既往研究表明，miR-205在惡性腫瘤侵襲、轉移評估中應用較多，被證實與卵巢癌、頭頸鱗狀細胞癌進展密切相關[12-13]。有研究發(fā)現(xiàn)，將膿毒癥患者的膽堿能抗炎通路激活后，其miR-205水平在血清內明顯上調，且對高遷移率族蛋白B1(HMGB1)表達有抑制作用[14]。膽堿能抗炎通路激活被認為可促使患者炎癥損傷減輕，緩解膿毒癥合并AKI病情，且對腦組織有保護作用，這一作用可能是通過患者血清miR-205相對表達水平上調后下調HMGB1表達而實現(xiàn)[15]。因此，miR-205高表達可能對緩解膿毒癥合并AKI患者病情有重要意義。miR-233則參與了折疊蛋白應答活化過程，其可調節(jié)機體炎癥、免疫狀態(tài)。有學者發(fā)現(xiàn)，在健康機體中，血清miR-233相對表達水平非常低，然而，在發(fā)生炎性反應時，其在血清內相對表達水平上調[16]。本研究結果也提示，膿毒癥合并AKI患者因機體處于炎癥狀態(tài)，導致血清miR-233相對表達水平明顯上調。

通過分析3組受檢者的腎功能狀態(tài)，提示與健康體檢者相比，膿毒癥合并AKI患者與單純膿毒癥患者均存在不同程度的腎功能異常，其中膿毒癥合并AKI患者的腎損傷程度最嚴重，且血清miR-205、miR-233相對表達水平與各腎功能指標有相關性。本研究結果顯示，血清miR-205相對表達水平越高、miR-233相對表達水平越低，則血清Scr、Cys-C相對表達水平越低，而eGFR越高。這間接提示，血清miR-205、miR-233對膿毒癥患者腎損傷程度存在一定評估價值，臨床需引起重視。有研究認為，在不同組織中，miR-205、miR-233的相對表達水平存在一定差異，且既往報道大多選擇以腫瘤患者為對象進行分析，其變化幅度并不一致[17]。因此，筆者未來還需對此結論做進一步論證。

本研究結果提示，膿毒癥合并AKI生存者血清miR-205以高表達為主，血清miR-233主要為低表達，且最終認為miR-233高表達可增加死亡風險，而miR-205高表達可能對預后有改善作用。其機制可能在于高表達的miR-205可促使HMGB1表達下調，對患者病情有緩解作用，然而，高表達miR-233可能加重病情，進一步加重腎損傷程度，增加病死率[18]。本研究結果提示，患者預后會受年齡、合并慢性疾病的影響，原因在于，年齡越大、合并慢性疾病的患者機體狀況較差，免疫力下降，對預后造成的不利影響更大。

綜上所述，與單純膿毒癥患者相比，膿毒癥合并AKI患者的血清miR-205相對表達水平明顯下調，而miR-233相對表達水平上調，二者與患者腎功能、預后情況密切相關，與此同時，臨床還需考慮到年齡、合并慢性病對預后的影響。血清miR-205、miR-233可作為評估膿毒癥合并AKI患者腎功能及預后的重要指標，便于進一步預測病情變化，為臨床治療提供依據。其中miR-205、miR-233相對表達水平分別以0.05、4.39為界，對預后評估有重要意義。