灰樹花化學成分及質量標準研究進展

◎ 鄭傳奇，王 勛，陳 華，王 秋，支永明，劉 波

（貴州黔西南喀斯特區域發展研究院，貴州 興義 562400）

灰樹花（Grifola frondosa (Fr.) S. F. Gray）是一種極具開發前景的高檔珍稀食、藥兩用菌[1]，屬擔子菌亞門，層菌綱，無隔擔子菌亞綱，非褶菌目，多孔菌科，灰樹花屬，性甘、味平，具有益氣健脾，補虛扶正的功效[2]?；覙浠▽儆谥袦匦汀⑾补?、好氧的木腐菌[3]。其子實體肉質脆嫩，由匙狀、扇狀或舌狀的菌蓋疊生而成[4]，因含有與鮮味有關的天門冬氨酸與谷氨酸含量較高，所以味如雞絲，有“食用菌王子”和“華北人參”的稱呼[5]?；覙浠ㄒ蛏L環境不同，別名多樣，如河北稱其栗蘑，浙江稱其云蕈，四川稱千佛菌，日本則叫舞茸。其主要分布于俄羅斯、日本與中國。因其較高的食用價值及顯著的藥理作用，近年來，作為保健食品及抗癌藥物，風行于日本和北美市場[6]。

灰樹花營養豐富，其子實體干品含脂肪1.7%，蛋白質31.5%，粗纖維10.7%，灰分6.41%，碳水化合物49.69%，蛋白含量比其他多種菌物要高，是香菇的2倍[7]。其化學成分種類較多，主要包括多糖、多酚、肽類等，且各成分均有顯著的藥理活性，特別是多糖，具有明顯的抗腫瘤、抗病毒、改善免疫系統等功能[8]。隨著灰樹花藥理活性及保健功能日益顯現，市場需求量逐漸增加，因此，國內多地均加大了對灰樹花的研究和種植，使得灰樹花產量有所提高，但是其質量差異也比較大，突出了灰樹花質量標準制定的重要性，筆者在查閱大量文獻的基礎上，對灰樹花的化學成分及質量標準研究進行綜述，為進一步深入研究灰樹花的化學成分、藥理作用、質量標準等方面提供研究資料和方向。

1 化學成分

1.1 多糖

多糖是灰樹花的主要化學成分及活性成分，可分為結構多糖和胞外多糖兩類，且不同地域或不同提取方法所得到的多糖存在差異，汪維云等[9]研究結果顯示，灰樹花胞外多糖分子量小于胞內多糖，相對分子質量大于45 000 的胞外多糖具有生物活性，小于 10 000 的則幾乎沒有活性?；覙浠ǘ嗵菫殡s多糖，其單糖有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖等，以D-葡萄糖為多見，結構多含β-1，6 及β-1，3 糖苷鍵的葡聚糖[10]。日本神戶藥科大學的Nanba 最早提出了多糖的D-組分和MD-組分，D-組分分子結構為β-1，3 支鏈的β-1，6- 葡聚糖與β-1，6 支鏈的β-1， 3-葡聚糖，MD-組分分子結構含β-1，3 和β-1，6 糖苷鍵的β-葡聚糖，繼MD-組分分離提取之后，Nanba 又分離出MZ-組分，分子結構為β-1，3 及β-1，6 支鏈的β-D-葡聚糖，隨后，Zhuang 等[11]又從灰樹花中分離到SX-組分，β-1，3 分支或α-1，4 分支的β-1，6-葡聚糖。Hiroaki 與Nanba 等對灰樹花中多糖或蛋白聚糖的D-組分、MD-組分、MZ-組分、X-組分進行了結構分析及相關藥理實驗[12-13]。MD-組分的分子結構與MZ-組分相似，在體內和體外均能活化巨噬細胞[14]， X-組分多糖分子結構為α-1，4 分支的β-1，6-葡聚糖。X-組分、SX-組分均具有較好的抗糖尿病作用，而 D-組分是具有很強生物活性的蛋白聚糖，為酸不溶性熱水提取物，可以激活NK 細胞，達到機體免疫的作用[15]，此外，Mizuno 等[16]從灰樹花子實體中分離出具有抗腫瘤作用的5 種多糖組分，Yang 等[17]從灰樹花菌絲體中分離出GFPS1b 組分，經過結構分析，表明該組分與先前D-組分的多糖結構有差異，GFPS1b組分主鏈含α-1，4 和α-1，3 的糖苷鍵，另外，從灰樹花菌絲體中分離出EX-GF-Fr.1、2、3 三種組分。Ohno 等[18]利用水提法從灰樹花中提取到多糖Grifolan（GRN），具有顯著抗腫瘤作用。Ying 等[19]從灰樹花子實體中得到具有明顯抑制內皮細胞增殖作用的多糖GFPW，其組成包括三部分，α-1，6-吡喃半乳糖殘基骨干、α 末端的甘露糖和α-O-2 的1，3-巖藻糖殘基。Mao 等[20]從灰樹花分離到1 種既有免疫調節作用又有抗腫瘤作用的多糖GP11，GP11 由D-葡萄糖、D-甘露糖、和D-半乳糖三種組成。Li 等[21]從富硒灰樹花中分離到1 種與GP11 具有相同藥理活性的富硒多糖，稱為Se-gp11，通過結構分析表明，Se-gp11 以隨機線圈結構的球形存在，由n（葡萄糖）：n（甘露 糖）：n（半乳糖）=1 ∶2.41 ∶4.91 組成?；覙浠ǘ嗵欠N類繁多，具有多種藥理活性，在抗腫瘤、抗糖尿病、抗病毒、抗高血脂及免疫調節等方面具有顯著的療效[22]，具有廣闊的開發利用前景。

1.2 多酚類

目前從灰樹花中分離出的酚類化合物較少，主要有阿魏酸、2-羥基丁二酸、二羥基苯乙酸、4-羥基苯甲酸、咖啡酸、香豆酸、3-羥基白藜蘆醇、白藜蘆醇[23]、表兒茶素沒食子酸酯、對香豆?？崴?、對香豆酰基酒石酸[24]等，酚類化合物主要具有抗氧化的藥理 作用。

1.3 甾類成分

目前，國內外研究者從灰樹花中分離出甾類化合物20 余種，主要是甾醇類及其衍生物，主要有5α，8β-過氧麥角甾-6，22-二烯-3β-醇、麥角甾醇、3β，5α，6β-三羥基麥角甾醇[25]、麥角甾醇過氧化物，此外還有麥角甾-4，6，8，22，-四烯-3-酮等。

1.4 其他類成分

除以上提及成分外，灰樹花還含蛋白質、微量元素以及香豆素[25]、生物堿、煙酸、肽類、琥珀酸、甘露醇、甘菊藍、2-甲酚及脂肪酸等成分。楊生兵等[26]對灰樹花發酵菌絲體與子實體進行分離鑒定，從發酵菌絲體中鑒定出揮發性成分94 種，多以酮類、醛類和酯類為主，而從子實體中鑒定出揮發性成分62 種，主要以醇類、酮類和醛類為主。

2 質量標準

目前，《中國藥典》未收載灰樹花藥材，其質量標準研究較少，因此，對目前已有灰樹花質量標準研究的相關文獻進行歸納總結，旨在為灰樹花藥材的開發利用、保證中藥材質量、推動中藥現代化研究提供方向。

2.1 性狀鑒別

2.1.1 灰樹花鮮品性狀鑒別

灰樹花子實體呈肉質，有柄或無柄，多分支，具匙形或扇形菌蓋，重疊成叢，寬達40～60 cm、厚2～7 mm， 菌蓋直徑2 ～7 cm，菌蓋有灰色、灰白色、淡褐色等[27-28]；嫩菌表面有細毛，老后光滑，具放射狀條紋，邊緣薄，有一圈不規則尖凸，菌肉白色，內卷；菌管延生，孔面白色至淡黃色，管口呈多角形；孢子無色，光滑，卵圓形至橢圓形；菌絲壁薄，無鎖狀聯合，具分枝與橫隔[29-30]。

2.1.2 灰樹花干品性狀鑒別

子實體干品呈珊瑚狀，質地脆而堅；菌蓋表面較鮮品深，為淺褐色或灰褐色，背面孔狀，折斷時粉塵散落；具濃郁的香氣，手觸碰后有特殊的香氣殘留在手指間；將干品浸在水中，灰樹花體積膨脹，水被染成淡黃色。將其進行火試，燃燒時有白色煙霧飄散，菌柄有木材燃燒的味道，燒完略有油狀物殘留[10]。

2.2 顯微鑒別

隆毅等[31]對不同生境的灰樹花子實體粉末性狀進行鑒別，結果為子實體粉末呈類白色或淺灰黃色，光滑，易在手上粘附，氣微、味淡。顯微鏡下可見眾多菌絲，多彎曲成團或平行呈束密集排列，少有分枝、壁較薄，無鎖狀聯合，具橫隔，直徑5.5 ～10 μm；擔孢子橢圓形至卵形，光滑、偶見棕色塊狀結晶及子實體層等。劉佳[10]對灰樹花進行顯微研究，結果為灰樹花菌絲無色壁薄，直徑2 ～4 μm，多數具分枝，無鎖狀聯合，有橫隔。孢子橢圓形，一端稍尖，光滑，無色，與隆毅的研究有少許差異。

2.3 薄層鑒別

2.3.1 薄層層析鑒別

灰樹花薄層鑒別方法基本屬于空白，隆毅[31]按照薄層色譜方法，以精氨酸為對照品溶液，吸取灰樹花供試品溶液點于硅膠G 薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（3 ∶2 ∶1）為展開劑，用茚三酮顯色，在日光下檢視，在同對照品相應的位置上，可見紫紅色斑點出現。

2.3.2 全息薄層色譜鑒別

隆毅[31]研究表明，以麥角甾醇為對照品溶液，將供試液點于硅膠GF254 薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲酸（8 ∶4 ∶0.5）為展開劑，在紫外燈254 nm、365 nm 下檢視，再噴以2%香草醛-硫酸乙醇溶液，日光下檢視，均可見與對照品相同的斑點。

2.4 主要成分含量測定

2.4.1 多糖的測定

灰樹花多糖是灰樹花的主要活性成分，也是目前研究的熱點，以灰樹花多糖為主要成分制成的劑型較多，如保利生膠囊、舞茸精滴劑、麥特消膠囊等，因此，灰樹花多糖能在一定程度上反映出其藥材質量，可作為質量控制的指標之一。隆毅等[32]采用蒽酮-硫酸法，結合正交試驗確定最佳提取工藝，測定不同產地灰樹花粗多糖與可溶性糖的含量，結果18 批不同產地灰樹花粗多糖含量為8.17%～34.82%，可溶性糖為27.46%～55.65%。樊懿娜等[33]采用熱水法提取灰樹花多糖，以葡萄糖為對照品，用苯酚-硫酸法，于490 nm波長處測定標準品和3 個供試品溶液的吸光度，結果3 個供試品葡萄糖含量分別為21.7%、21.3%和20.9%。孫耀[34]采用正交試驗確定灰樹花多糖水提醇沉最佳工藝條件，測定中性糖含量為43.68%，并對提取到的灰樹花粗多糖理化性質進行了研究。顧華杰等[35]采用蒽酮-硫酸法、費林滴定法、苯酚-硫酸法、3，5-二硝基水楊酸法4 種方法，測定發酵液中灰樹花菌絲體的胞外多糖和胞內多糖，結果顯示，3，5-二硝基水楊酸法測定胞外多糖較好，最佳吸收波長為490 nm，而苯酚-硫酸法測定胞內多糖較好，最佳波長為485 nm。

2.4.2 蛋白質的測定

灰樹花所含蛋白質較高，且不同海拔生長的灰樹花所含蛋白含量存在差異[36]，李怡彬等[37]用不同廢棄培養料栽培白灰樹花和灰樹花，并對其子實體中蛋白質進行測定，灰樹花和白灰樹花子實體含蛋白質量較高，平均含量22.95%，氨基酸總量均值為17.51%，二者的蛋白含量均高于香菇子實體。隆毅[31]對不同產地18 批灰樹花中蛋白質含量進行了測定，采用考馬斯亮藍染色法測定蛋白含量，結果為全國18 批不同規格與產地的灰樹花蛋白質含量無明顯差異，建議擬定灰樹花蛋白含量限度不得低15%。馮猛等[38]在液體培養條件下，測定了8 個灰樹花菌株發酵液中蛋白質含量，結果顯示，在接種后第7 d 發酵液中產生的蛋白質含量達高峰，最高含量為0.485 0 mg·mL-1，最低為0.308 9 mg·mL-1。

2.5 指紋特征圖譜

指紋圖譜技術是中藥鑒別的重要手段，中藥色譜指紋圖譜是指不同產地中藥及其制劑所共有的、具有特異性組分群，經色譜測定得到的特征圖象或圖譜。有關灰樹花指紋圖譜研究的文獻報道較少，李小定[39]等采用糖腈乙酸酯氣相色譜法，利用OV-1701 毛細管色譜柱對灰樹花中7 種單糖的糖腈乙酸酯及內標肌醇六乙酰酯進行分離，并測定其多糖粗品及4 種等級的單糖組成。蘭蓉等[40]采用超聲波法提取灰樹花中揮發油成分，利用氣相色譜-質譜（GC-MS）聯用技術分析鑒定，經NIST 譜庫檢索，鑒定出17 種化合物，主要為含酯類的揮發油成分，包括油酸酯和亞油酸乙酯等。賈瑞博等[41]構建了灰樹花多酚高效液相色譜的分析測定法，采用液相色譜-質譜聯用技術對多酚組分進行分離鑒定。

隆毅[31]對不同產地的18 批灰樹花進行了系統的HPLC 指紋圖譜研究，歸納其共有特征，并首次建立了不同規格灰樹花水與甲醇提取液的HPLC 指紋圖譜，對18 批灰樹花指紋圖譜數據進行相似度分析評價，結果相似度均大于0.9。楊海[15]建立了反映活性成分灰樹花β-葡聚糖的藥材指紋圖譜，采用示差折光檢測器（RID）進行檢測時，可檢出較為明顯的指紋圖譜峰7 個，且10 批藥材的相似度均在0.95 以上；采用二極管陣列檢測器（DAD）檢測時，可檢出共有峰 16 個，10 批藥材的相似度在0.90 以上。

3 結語

灰樹花是近年來開發的珍稀食藥用真菌之一，除了具有豐富的營養物質可以作為菜肴食用外，其還含有多種活性成分，具有顯著的藥理活性。目前，對灰樹花藥理活性成分的研究主要集中在多糖，而對其他活性成分，如多酚、甾體、肽類等相對較少，希望后續研究者可以從這方面再進行深入研究。此外，隨著灰樹花藥理作用及保健功能的日益顯現，市場需求量逐漸增加，使得灰樹花栽培日益增多，很多研究者對灰樹花栽培技術進行了較為詳細的研究，但是不同生境下生長的灰樹花，其性狀、營養成分、化學活性成分等存在差異，缺乏分級研究。對灰樹花質量標準研究的文獻報道較少，且存在少許差異，因此，可以擴大樣品，選取灰樹花鮮品與干品同時進行研究，質量標準的制定有利于保證中藥材質量、推動中藥產業化發展。因此，中藥材質量標準的制定對推動中藥產業現代化具有重大的意義。