清江河多鱗白甲魚胚胎發育觀察

李松 李宏 張明建 王仁泉 李鑫 秦開華

摘要：通過對多鱗白甲魚（Onychostoma macrolepis）胚胎發育特征研究，旨在為該魚的科學保護和合理開發提供技術支撐。結果顯示：多鱗白甲魚卵徑1.90±0.02mm，吸水后的卵徑可達2.60±0.03mm。在水溫19±1℃的條件下，經歷80h孵化出膜，總積溫1 551.98h·℃。根據胚胎的外部形態特征可將胚胎發育分為受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經胚、器官形成及出膜7個階段共26個時期。初孵仔魚全長6.00-7.00mm。

關鍵詞：多鱗白甲魚；胚胎發育

基金項目：多鱗白甲魚的人工繁殖技術研究（廣元市重點研發項目，項目編號：17ZDYF0116）。

多鱗白甲魚（Onychostoma macrolepis）隸屬于鯉形目、鯉科、鲃亞科、白甲魚屬（Onychostoma Günther）[1]。多鱗白甲魚具有豐富的地理遺傳資源，其原因是分布區域的不連續性，它主要分布于渭河水系，嘉陵江和漢水水系的中上游，淮河上游，山東泰山、伊河和洛河[2] 等不同地理區域的水系。資料顯示，分布我國最北的一種鲃亞科魚類是多鱗白甲魚，它對研究魚類生態適應性以及地理分布機制具有重要的作用 [3]。另外，調查資料表明多鱗白甲魚是秦巴山區[4]、長青自然保護區[5]和清江河特有魚類國家級水產種質資源保護區的魚類資源多樣性重要物種。

當前，多鱗白甲魚的生態習性與開發利用[6]、親魚仿生態培育[7]和人工繁殖[3，8]都取得成功，同時對其資源保護[9]、生物學特性[10]、形態組織學[11]、脂肪代謝[12]、營養需求[13]和餌料[14-15]等方面也進行了相關的研究和報道。雖然，2008年陳紅菊等對泰山地區的多鱗白甲魚胚胎發育進行了研究[16]，但關于不同生活水系的環境差異對該魚在早期生活史的發育是否存在影響，未見報道。基于此，本文以清江河多鱗白甲魚為實驗對象，對其胚胎發育進行觀察和描述，同時記錄發育過程中的水溫，旨在詳細了解該魚的胚胎發育規律，對保護魚類資源和探索該魚室內工廠化苗種培育具有重要的實踐意義，同時也為人工繁殖和養殖提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 受精卵的來源及孵化

2019年4-6月，在四川龍洋漁業有限公司繁殖場，挑選出馴養成熟的多鱗白甲魚親魚，經干法授精獲得受精卵。將受精卵放入孵化框（50cm×25cm×20cm）中進行流水孵化。孵化期間，水流量為0.4-0.7t/h，水溫為18.0-20.0℃，溶解氧為7.5-9.0mg/L，氨氮<0.05mg/L。

1.2 胚胎的觀察及數據測量

用SZM體視顯微鏡對胚胎進行觀察及拍照。在人工授精后的1min內及時取部分卵放置于玻璃皿中以觀察其發育，大致上按開始階段每30min觀察一次受精卵，每次隨機取30粒。隨后根據其發育情況，可隔1-2h觀察一次。實際上，平常要經常觀察，還要根據胚胎發育實際情況加密觀察。每次觀察、照相的同時，詳細記錄好其形態發育特征、時間、溫度。因達到各發育期的時間存在個體差異，各發育期的劃分參照文獻[17]的方法，按照50%以上個體達到該時期特征的時間來劃分[18]。

用電子游標卡尺（永康市飛爾工貿有限公司，精確度0.01mm，測量范圍0-150mm）測量卵徑。用Corel DRAW X4 SP2軟件處理胚胎照片。胚胎發育各時期的積溫為胚胎某發育階段的時間與水溫的乘積[19]。

2 結果

2.1 胚胎發育各階段經歷時間和積溫

在水溫（19±1）℃條件下，多鱗白甲魚整個胚胎發育過程可分為受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經胚、器官形成及出膜7個階段共26個時期（表1，圖1），胚胎從受精卵到孵化出膜歷時80h，積溫1 551.98h·℃，其中受精卵耗時1h 20min，積溫26.67h·℃，卵裂期耗時9h5min，積溫173.82h·℃，囊胚期耗時5h 30min，積溫100.25h·℃，原腸期耗時11h 51min，積溫228.75h·℃，神經胚期耗時2h 14min，積溫43.67h·℃，器官形成期耗時33h，積溫638.82h·℃，出膜期耗時17h，積溫340.00h·℃。

2.2 多鱗白甲魚胚胎發育分期及特征

2.2.1 胚盤隆起階段

受精卵圓球形，呈金黃色，卵膜堅韌，卵徑1.90±0.02mm。遇水產生較強黏性，20min后充分吸水，黏性減弱，卵周隙逐漸變大，吸水后卵徑2.60±0.03mm（圖1A）。受精后1h20min，原生質集中在卵子的動物極而形成隆起的胚盤（圖1B）。

2.2.2 卵裂階段

受精后2h4min，胚盤表面出現明顯的分裂溝，胚盤進行第1次卵裂形成大小相等的2個卵裂球（圖1C）。3h11min胚盤第2次分裂為4個相同的細胞（圖1D）。3h50min進行第3次卵裂，兩條分裂溝平行分裂一次，形成兩列，每列四個，進入8細胞期（圖1E）。受精后4h47min和5h56min，胚胎發育分別進入32細胞期（圖1F）和64細胞期（圖1G）。此后，隨著細胞的不斷分裂，受精后10h25min，胚胎發育進入多細胞期（圖1H），細胞很小，排列極不規則。

2.2.3 囊胚期

受精后12h 50min，胚盤開始變高，表面趨近光滑，只有個別細胞及邊緣的分裂細胞能夠看清，整個胚層如小丘，胚體進入囊胚早期（圖1I）。隨著胚胎進一步發育，高聳的細胞團開始降低，受精后14h 40min，囊胚層變矮變平，胚胎進入囊胚中期（圖1J）。此后，囊胚層繼續降低，受精后15h 55min，整個胚層更為扁平，囊胚細胞向卵黃部分下包1/3，胚胎發育進入囊胚晚期（圖1K）。

2.2.4 原腸胚期

受精后22h 24min，胚層內卷，形成胚環，胚層下包卵黃囊近1/2進入，胚胎發育進入原腸早期（圖1L）。隨著胚胎細胞繼續下包并向內卷入，受精后24h 10min，囊胚層細胞下包卵黃囊約2/3，胚盾出現，胚胎發育進入原腸中期（圖1M）。受精后27h 46min，胚盤下包3/4，胚盾膨大，胚胎發育進入原腸晚期（圖1N）。

2.2.5 神經胚期

神經胚期（圖10）是出現在受精后的29h，此時胚層幾乎完全下包，僅剩卵黃栓，神經板初步形成，胚體明顯隆起及處于側臥狀態。受精后30h，隨著胚盤的繼續下包，胚體前端隆起，后端變寬變薄，卵黃栓逐漸變小，胚體延長，胚孔封閉，胚胎發育進入胚孔封閉期（圖1P）。

2.2.6 器官形成期

受精后33h 21min，在胚體中前部出現1-4對肌節，腦區膨大，整個胚體處于側臥狀態（圖1Q）。眼基（圖1R）和眼囊（圖1S）分別于受精后36h 36min和38h 49min出現，肌節13±2～17±2對。41h 48min尾端略突出，腦明顯分化，尾芽逐漸游離卵黃囊（圖1T）。受精后43h 51min，肌節增至20-22對，卵黃囊開始拉長，頭尾距離增加，腦區顯著隆起，此時胚胎發育進入聽囊期（圖1U）。受精后53h 13min，胚體微弱地抽搐（21次/min），腦區發達，明顯隆起，胚體和卵黃囊繼續拉長，此時胚胎發育進入肌肉效應期（圖1V）。57h 22min胚體和卵黃拉得更長，胚體擺動，頭部與卵黃連接處出現心臟原基（圖1W）。耳石出現在受精后的59h 37min，此時胚體伸直，頭部仍卷曲于卵黃囊前端，胚體擺動加強，卵黃囊呈棒槌形，前寬后窄（圖1X）。受精后63h，心臟開始跳動，胚體不斷翻滾（圖1Y）。

2.2.7 出膜期

受精后80h，胚體在卵膜內劇烈翻滾，尾部破膜而出，心跳85～90次/min（圖1Z）。初孵仔魚體透明，卵黃囊棒槌狀，常靜止水底。

3 討論

3.1 四川省青川縣清江河與泰山多鱗白甲魚胚胎發育的比較

陳紅菊等[16]（2008年）報道了泰山赤鱗魚（多鱗白甲魚）的胚胎發育特征，獲得了泰山赤鱗魚卵徑、孵化時間、胚胎發育時序等基礎數據。本研究的孵化水溫（19±1℃）與陳紅菊等[16]（2008年）基本保持一致。比較發現，清江河和泰山的多鱗白甲魚胚胎發育都經歷受精卵、卵裂、囊胚、原腸胚、神經胚、器官形成及出膜7個階段，但清江河多鱗白甲魚卵徑（1.90mm）稍大于泰山多鱗白甲魚（1.65～1.82mm）。同樣的，清江河多鱗白甲魚受精卵孵化歷時長于泰山多鱗白甲魚（80h>46h 50min）。功能器官的發育時序，清江河多鱗白甲魚也要長于泰山多鱗白甲魚。綜上所述，清江河和泰山多鱗白甲魚的胚胎發育存在差異，可能是由于生活的環境條件不同，如海拔高度（西部山區普遍高于東部山區）、水文條件、營養條件等，而自身做出的一種生活策略選擇。

3.2 多鱗白甲魚胚胎發育與鲃亞科其他魚類的比較

魚類胚胎發育具有種的特異性[9]，在不同的水溫條件下，胚胎發育歷時以及胚胎發育到某個時期的時間都是不相同的。多鱗白甲魚與鲃亞科其他魚類胚胎發育比較見表2。

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