卵巢透明細胞癌中HNF-1β與OPN的相關性及臨床意義

屈玉玲，王 晶，朱嘉暉，劉曉莉，翟學峰

卵巢透明細胞癌(ovarian clear cell carcinoma, OCCC)和卵巢子宮內膜樣癌(ovarian endometrioid carcinoma, OEC)與子宮內膜異位囊腫密切相關，被稱為子宮內膜異位癥相關性卵巢癌(endometriosis-associated ovarian endometrioid carcinoma, EAOC)[1]。OCCC與常見的卵巢漿液性癌相比，其具有鉑類化療耐藥機制，常導致患者治療失敗，5年生存率明顯降低[2]。HNF-1β高表達于OCCC，且可能是聯系分泌中晚期內膜、內膜異位癥和OCCC的遺傳學紐帶[3-4]。同時，HNF-1β參與形成了OCCC的某些主要生物學特性，如癌細胞內部的糖原累積、低細胞增殖及產生較強的抗凋亡和對化療藥物的耐藥性等[4]。骨橋蛋白(osteopontin, OPN)屬于分泌型糖激化磷酸蛋白，其介導的信號通路參與多種腫瘤的發生、發展。OPN啟動子區域具有HNF-1β功能性結合位點[5]，HNF-1β可能與OPN結合后參與內膜異位癥癌變為透明細胞癌的過程，并維持腫瘤細胞的生物學行為及化療耐藥。本實驗初步探討HNF-1β與OPN在子宮內膜異位癥及OCCC發生、發展中的作用及可能機制，為子宮內膜異位癥的發生及癌變為OCCC尋找新的藥物靶點提供必要的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料收集2011～2019年寧夏醫科大學總醫院病理科存檔的24例OCCC，卵巢內膜異位癥26例，增生期子宮內膜24例，OEC 16例，分泌期子宮內膜22例。112例患者均為女性，年齡19～72歲，平均49歲。患者均未行放、化療，子宮內膜標本來源于子宮肌瘤切除術標本。

1.2 免疫組化標本均經10%中性福爾馬林固定，常規脫水，石蠟包埋，5 μm厚切片，HE染色，顯微鏡下觀察。免疫組化染色采用EnVision兩步法，一抗HNF-1β、OPN均購自上海圣克魯斯公司。

1.3 判斷標準HNF-1β陽性定位于細胞核，OPN陽性定位于細胞質，免疫組化染色以黃色或棕黃色顆粒為陽性，根據陽性染色細胞百分率和細胞著色強度進行判斷[6-7]。根據細胞著色強度計分：無著色為0分；淡黃色為1分；淺褐色為2分；深褐色為3分。根據陽性細胞百分比計分：無陽性細胞為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。最后將兩項評分結果相乘：0分為陰性(-)，1～5分為弱陽性(+)，6～9分為中等陽性()，10～12分為強陽性()。

1.4 統計學分析采用SPSS 21.0軟件進行統計學分析，計數資料以例數表示；不符合正態分布計量資料用中位數(四分位數)描述，組間比較用非參數秩和檢驗和χ2檢驗分析。兩個指標間的相關性用Spearman相關性分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HNF-1β在不同組織中的表達免疫組化結果顯示HNF-1β在OCCC組中的表達及中～高陽性率高于卵巢內膜異位癥組，差異有統計學意義(P<0.05)；HNF-1β在卵巢內膜異位癥組中的表達及中～高陽性率高于增生期子宮內膜組(P<0.05)；其在OEC組中的表達低于OCCC組(P<0.05，表1，圖1)。

2.2 OPN在不同組織中的表達OPN在OCCC組中的表達及中～高陽性率高于卵巢內膜異位癥組(P<0.05)；OPN在卵巢內膜異位癥組中的表達及中～高陽性率高于增生期子宮內膜組(P<0.05)；其在OEC與OCCC組中的表達差異無顯著性(P>0.05，表1，圖2)。

2.3 OPN與HNF-1β的相關性本組經Spearman相關性分析，在增生期子宮內膜、分泌期子宮內膜、卵巢內膜異位癥及OCCC中OPN與HNF-1β表達呈正相關(P<0.05)；而在OEC中HNF-1β與OPN表達無顯著相關性(P>0.05，表2)。

3 討論

目前，HNF-1β已廣泛用于OCCC的鑒別診斷，敏感性約85.2%，特異性約76.5%[8]；本實驗結果顯示，其在OCCC中陽性率約100%。在OCCC發生前，卵巢內膜異位癥的上皮細胞就已發生HNF-1β異常表達。本實驗中卵巢內膜異位癥組的上皮細胞均有HNF-1β表達(排除個別無上皮細胞或上皮細胞過度萎縮的病例)，但大部分陽性染色定位于細胞質，40%～70%的上皮細胞出現細胞核染色。部分文獻對不典型的卵巢內膜異位癥單獨進行分析，由于尚無明確的臨床病理診斷標準，且不能排除內膜異位癥中長期炎癥及出血的刺激因素所致，本組并未區分此類型。另外，HNF-1β只有轉運進入細胞核并與細胞核定位信號(nuclear localization signal)結合后才能發揮其功能[9]，這也是本組只計數HNF-1β細胞核染色為陽性的原因。Shen等[10]發現，卵巢內膜異位癥上皮細胞過表達HNF-1β后，其形態增大、扁平并向OCCC的形態學方向發展。本組有部分病例的內膜異位癥上皮細胞高表達HNF-1β，并出現OCCC腫瘤細胞的形態特點，本組認為維持HNF-1β高表達可能在內膜異位癥癌變為OCCC的發生、發展中起重要作用。多項研究發現[11]，HNF-1β與糖酵解活性相關(又稱為Warburg Effect),并參與化療耐藥機制中，下調OCCC中HNF-1β表達可顯著增加順鉑和紫杉醇的細胞毒性，提示其作為OCCC分子靶向治療的良好前景。

本實驗結果顯示，OPN在增生期子宮內膜內弱表達或不表達，而在內膜異位癥中表達顯著升高。卵巢內膜異位癥的囊液因反復出血，高度富含鐵離子，在低氧含量及高氧化壓力的環境下，內膜異位癥的上皮細胞通過高表達OPN激活細胞的自身保護系統[12-13]，從而能在這種惡劣的環境中存活下來，同時也為癌變的發生奠定基礎。OCCC中OPN高表達與患者順鉑耐藥的機制密切相關。Lu等[14]對肝癌順鉑耐藥機制進行詳細的研究發現，OPN通過控制有氧糖酵解，抑制凋亡、促進腫瘤轉移以及增加對順鉑的耐藥性。OPN的生物學功能提示其科學研究價值，以及其與HNF-1β聯合參與OCCC耐藥機制的可能性。

由于OPN啟動子區域內含HNF-1β功能性結合位點，HNF-1β被認為是最有可能直接作用的靶基因[15]。本實驗結果發現，HNF-1β與OPN在子宮內膜、卵巢內膜異位癥及OCCC中呈高度正相關，兩者可能協同參與OCCC的癌變過程及其化療的耐藥。另外，在OEC中HNF-1β表達與OPN并無相關性，提示雖同為卵巢異位癥相關性卵巢癌，但兩者的癌變機制并不相同，與Kato等[15]的報道一致。

綜上所述，HNF-1β、OPN可能參與OCCC的發生、發展及其化療耐藥，且兩者關系密切。阻斷HNF-1β表達或與OPN的相互作用，可以為新型抗腫瘤藥物的研發提供新思路，有望成為OCCC新的治療靶點。