血清Spry2基因表達水平與非小細胞肺癌根治術后復發的關系

謝鵬

（平頂山市第一人民醫院呼吸內科，河南 平頂山 467000）

肺癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，非小細胞肺癌約占所有肺癌的80%，由于該疾病預后性差，病死率高[1-2]。目前，對于早期非小細胞肺癌，臨床上常采用非小細胞肺癌根治術進行治療，但術后復發率較高，30%左右的患者因術后癌癥復發而死亡[3-4]。因此，對非小細胞肺癌根治術的復發進行準確預測以及探究影響復發的相關因素是臨床的重要課題之一。Spry2（sprouty2）是由sprouty2基因編碼的一種Ras/絲裂原激活蛋白激酶信號通路特異性抑制蛋白。研究顯示，血清Sprouty蛋白包括4亞型,有負向調控作用，Spry2基因已被證明對卵巢癌、肝癌等多種癌細胞的增殖有關[5-6]，因此，Spry2基因的表達情況已成為腫瘤治療以及預后的研究熱點。但對于非小細胞肺癌細胞的影響以及術后復發情況研究較少。因此，本研究探討了血清Spry2基因表達水平與非小細胞肺癌根治術后復發的關系，以期為臨床非小細胞肺癌根治術后復發預測提供新方法，。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年2月至2019年2月在我院進行非小細胞肺癌根治術患者106例進行研究，男69例，女37例，年齡56～79歲，平均年齡（68.14±10.26）歲。納入標準：⑴符合《中國非小細胞肺癌放射治療臨床指南(2020版)》中的非小細胞肺癌診斷標準[7]；⑵經影像學及組織學活檢確診為非小細胞肺癌，在我院接受非小細胞肺癌根治術患者；⑶相關臨床資料完整且患者、家屬知情并同意；⑷經醫院倫理委員會通過。排除標準：⑴合并多種惡性腫瘤患者；⑵嚴重心臟病高血壓患者。術后隨訪2年，根據術后復發情況分為復發組和未復發組。根治切除術后發現病灶殘端、同側胸腔、余肺葉等局部腫瘤復發以及對側肺組織、縱膈、肺門淋巴結遠端等遠端復發為復發，未見腫瘤轉移為未復發。復發組42例，男25例，女17例，年齡56～79歲，平均年齡（67.32±11.06）歲，未復發組64例，男44例，女20例，年齡56～79歲，平均年齡（68.67±10.02）歲。

1.2 觀察指標

1.2.1 非小細胞肺癌根治術后復發臨床特征 通過隨訪調查以及門診調查，記錄患者的年齡、性別、吸煙史、病理類型、住院時間、手術時間、腫瘤分期、用力呼氣容積（forced expiratory volume in certain second，FEV）%、置管時間。

1.2.2 Western Blot檢測兩組患者血清S-CD105、MMP9、Spry2表達情況比較 術前，取患者空腹靜脈血3 ml，分離血清后，加入細胞裂解液裂解，采用提取細胞總蛋白，嚴格按照操作說明進行（西寶生物科技(上海)股份有限公司）。采用二喹啉甲酸試劑盒進行蛋白定量（上海康朗生物科技有限公司），提取10 g/孔蛋白進行聚丙烯酰胺凝膠電泳（JY-SPC型，北京君意東方電泳設備有限公司），轉膜至聚偏二氟乙烯膜，加入5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，采用洗膜緩沖液洗膜并加一抗（S-CD105、MMP9、Spry2蛋白，稀釋比例均為1:500），于4℃孵育過夜，洗膜加二抗，于室溫下孵育2 h。電化學發光顯影，用凝膠圖象處理系統（JY04S-4C，北京君意東方電泳設備有限公司）分析對比條帶強弱，選用β-actin作為內參。所有抗體均購自美國CST生物有限公司。

1.3 統計學處理 采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析，滿足正態分布且方差齊的計量資料采用（±s）表示，采用兩樣本獨立t檢驗比較組間差異，計數資料用率表示，采用χ2檢驗，采用Logistic回歸分析影響非小細胞肺癌根治術后復發的獨立危險性因素；非小細胞肺癌根治術后復發的預測采用受試者工作特征（Receiver operating characteristic，ROC）曲線分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 非小細胞肺癌根治術后復發臨床特征比較非小細胞肺癌根治術后復發與患者的年齡、性別、病理類型、住院時間、置管時間、術后化療、腫瘤大小、手術時間無關（P＞0.05），與患者的癌癥腫瘤分期、腫瘤大小、吸煙史、FEV%有關（P＜0.05），見表1。

表1 非小細胞肺癌根治術后復發臨床特征比較（n，%）

2.2 Logistic回歸分析影響非小細胞肺癌根治術后復發的獨立危險因素 篩選2.1中影響非小細胞肺癌根治術后復發的差異變量進行二分類Logistic回歸分析，檢驗水準α=0.05。腫瘤分期Ⅰ=0，腫瘤分期Ⅱ=1；FEV%≥70=0，FEV%<70=1；腫瘤<3 cm=0，腫瘤≥3 cm=1；腫瘤中低分化=0，腫瘤高分化=1；無吸煙史=0，有吸煙史=1。Logistic回歸分析顯示，腫瘤分期、FEV%是影響非小細胞肺癌根治術后復發的獨立危險因素（P＜0.05），見表2。

表2 非小細胞肺癌根治術后復發的Logistic回歸風險預測模型

2.3 兩組患者S-CD105、MMP9、Spry2表達情況比較 復發組S-CD105、MMP9表達水平明顯高于未復發組，Spry2表達水平明顯低于未復發組（P<0.05），見圖1、表3。

圖1 兩組患者S-CD105、MMP9、Spry2表達情況比較

2.4 血清S-CD105、MMP9、Spry2表達水平預測非小細胞肺癌根治術后復發的ROC特征S-CD105、MMP9、Spry2表達水平預測非小細胞肺癌根治術后復發的AUC為0.727、0.761、0.772Spry2表達水平預測效，見表3，ROC曲線分析見圖2。

圖2 血清、S-CD105、MMP9、Spry2水平預測非小細胞肺癌根治術后復發的ROC曲線分析

表3 兩組患者水平比較（±s）

表3 兩組患者水平比較（±s）

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3 討論

非小細胞肺癌早期癥狀不明顯，發病隱匿[8]，大部分患者確診時病情已進中晚期，即使接受手術治療，由于術后復發，遠期療效較差，患者5年生存率仍不超過50%，避免術后復發是提高患者生存率的主要方式之一[9-10]。非小細胞肺癌發病是多因素結果，與遺傳、環境因子、患者個人生活習慣密切相關[11-12]。本研究結果顯示，非小細胞肺癌根治術后復發與患者的年齡、性別、病理類型、住院時間、置管時間、術后化療、腫瘤大小、手術時間無關，與患者的癌癥腫瘤分期、腫瘤大小、吸煙史、FEV%有關。腫瘤分期、FEV%是非小細胞肺癌根治術術后復發的獨立危險因素。一般來說，小細胞肺癌根治術一般對于早期癌癥患者治療效果較好，腫瘤分期＞Ⅱ的患者，病情已惡化較嚴重，術后復發的可能性較大。FEV%代表患者的肺功能情況，FEV%低于70，置管時間較長，說明患者肺功能損傷較嚴重，術后病情恢復較困難，增加了疾病復發的可能性[13-14]。結合本研究說明，吸煙、癌癥發展程度、肺功能損傷情況與非小細胞肺癌根治術術后復發密切相關。

表4 血清S-CD105、MMP9、Spry2水平預測非小細胞肺癌根治術后復發的ROC特征

本研結果顯示，復發組S-CD105、MMP9表達水平明顯高于未復發組，Spry2表達水平明顯低于未復發組。既往研究顯示，內皮糖蛋白（endoglin，CD105）可用于標記微血管密度、拮抗轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）對血管內皮細胞發揮抑制作用，S-CD105是血管生成的必需蛋白之一，癌細胞的增殖和轉移需要大量SCD105以促進血管生成[15-16]，臨床已發現多種癌癥的發生與S-CD105高表達相關，因此，常使用SCD105作為腫瘤血管生成的指標，檢測癌癥發展情況[17-18]。腫瘤細胞發生轉移時，會促進蛋白酶分泌，導致細胞外基質降解，基底膜受損，由此完成癌細胞的轉移。MMP蛋白可以降解細胞外基質，進一步增強腫瘤細胞轉移和侵襲。MMP-9是MMP家族中最重要的蛋白酶之一，在多種惡性腫瘤中可檢測到MMP-9過表達[19-20]。Spry2是一種重要的抑癌基因，在多種癌癥中發現，Spry2表達下調可激活與調控癌細胞增殖、遷移的信號通路有關的激酶以及正向調節炎性因子誘導癌細胞形成，SPRY2表達下調可以導致癌癥發生以及癌癥術后復發，Spry2表達情況與腫瘤患者預后存在相關性[21-22]。結合本研究說明，非小細胞肺癌患者體內SCD105、MMP9表達水平升高，Spry2表達水降低，與其術后復發情況有關。在本研究中，S-CD105、MMP9、Spry2表達水平預測非小細胞肺癌根治術后復發的AUC為0.727、0.761、0.772，說明臨床可根據S-CD105、MMP9、Spry2水平變化預測非小細胞肺癌根治術后復發情況。