注射用右雷佐生與不同輸液溶媒配伍的穩定性考察

張亞坤，劉 劍，貢 瑩，陳 瑋，張志清

(河北醫科大學第二醫院藥學部，河北 石家莊 050000)

蒽環類抗癌藥物屬于廣譜抗癌藥，嚴重且不可逆心臟毒性的不良反應使其臨床應用受到限制[1]。作為目前唯一獲批的此類抗癌藥物的心臟毒性保護劑，右雷佐生(dexrazoxane)被國內外多家指南推薦用于蒽環類藥物心臟毒性的防治[2]。2013版蒽環類化療藥物心臟毒性防治指南中明確表示，每次給予蒽環類藥物前均應在30 min內給予右雷佐生。右雷佐生是雷佐生的右旋體[3]。研究表明，右雷佐生對改善含蒽環類藥物治療的患者心臟功能具有積極作用[4-6]。相對單用蒽環類藥物，聯用右雷佐生更具有成本效果優勢[7]。臨床上，右雷佐生應與其自帶專用溶媒(0.167 mol/L乳酸鈉注射液)配合使用。專用溶媒的包裝容器為25 mL安瓿，瓶體大，瓶頭短小，在實際臨床工作中，存在不使用專用溶媒或用一支專用溶媒溶解兩支藥物的情況[8]。未使用專用溶媒溶解的右雷佐生穩定性如何未見相關報道。鑒于此，參考有關文獻[9-12]，本試驗從各組配伍液的外觀、pH值、不溶性微粒數、相對百分含量變化等方面考察使用不同溶媒溶解后對右雷佐生穩定性的影響，旨在為臨床合理用藥提供參考。

1 儀器與試劑

Waters Acquity UPLC系統(包括四元梯度泵、恒溫自動進樣器、柱溫箱、紫外檢測器等，美國Waters公司)；電子分析天平(CPA225D，德國Sartorius)；微粒分析儀(GWF-8JA，天津天河醫療儀器有限公司)；微處理pH計(DP24，HANNA儀器)。右雷佐生對照品(遼陽眾諾化學工業有限公司，含量99.48%，批號 20170401)；注射用右雷佐生(江蘇奧賽康藥業有限公司，規格250 mg/支，批號 E1711092)；0.9%氯化鈉注射液(石家莊市第四制藥有限公司，批號 1712263801)；5%葡萄糖注射液(石家莊市第四制藥有限公司，批號 1801123803)；磷酸二氫鉀(分析純，天津市永大化學試劑公司有限公司，批號 YD20170303)，甲醇(色譜純，美國Fisher，批號178338)，水為二次蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；流動相：0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液-甲醇(90∶10)；流速：0.4 mL/min；檢測波長：209 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：2 μL。

2.2含量測定

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取右雷佐生對照品21 mg于100 mL量瓶中，用水溶解并定容，得214.8 mg/L的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 室溫條件下，參照藥品說明書，模擬臨床常用給藥劑量，將注射用右雷佐生分別用專用溶媒(0.167 mol/L乳酸鈉溶液)或無菌水溶解后，再分別用5%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液稀釋，混勻，得質量濃度為1 g/L的供試品溶液。

2.2.3專屬性考察 取5%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、專用溶媒(0.167 mol/L乳酸鈉注射液)和右雷佐生對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果表明，右雷佐生保留時間為1.11 min，右雷佐生峰形良好，分離完全，理論踏板數在正常范圍內(圖1)。

圖1 UPLC色譜圖

2.2.4線性關系 精密吸取對照品溶液1，3，5，7，9，10 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，得系列濃度的右雷佐生溶液，按“2.1”項下的色譜條件進樣測定，記錄色譜峰面積。以右雷佐生濃度x為橫坐標，峰面積A為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程A=19 615x+5 137.8(r=0.999 9，n=6)。結果表明，右雷佐生質量濃度在4.30～42.96 mg/L范圍內線性關系良好。

2.2.5精密度試驗 精密吸取對照品溶液2，5，7 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，配制低、中、高3種濃度(8.59，21.48，30.07 mg/L)的右雷佐生溶液(n=3)，按“2.1”項下色譜條件重復測定5次，連續測定3 d，記錄峰面積，考察精密度。結果顯示，各濃度溶液的日內相對標準偏差(relative standard deviation,RSD)分別為0.91%、0.95%、0.94%，日間RSD分別為1.36%、1.04%、1.31%，表明精密度良好。

2.2.6重復性試驗 精密吸取對照品溶液2，5，7 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，配制低、中、高3種濃度(8.59、21.48、30.07 mg/L)的右雷佐生溶液(n=3)，按“2.1”項下色譜條件重復進樣3次，記錄峰面積。結果顯示，各濃度溶液的RSD分別為0.75%、0.65%、0.94%，表明重復性良好。

2.2.7回收率試驗 精密吸取對照品溶液2，5，7 mL分別于50 mL量瓶中，水稀釋定容，配制低、中、高3種濃度(8.59、21.48、30.07 mg/L)的右雷佐生溶液(n=3)，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。標準曲線法計算濃度，所得濃度與實際濃度之比為回收率。結果顯示各濃度溶液的回收率分別為101.4%，100%，99.5%，RSD分別為1.11%、0.65%、0.96%，表明回收率良好。

2.3右雷佐生與不同載體溶媒配伍穩定性試驗

2.3.1外觀變化 按“2.2.2”中供試品溶液的制備方法制備溶液(n=3)，依次標記為NZ，GZ，NF，GF(N：溶媒為0.9%氯化鈉注射液，G：溶媒為5%葡萄糖注射液，Z：專用溶媒溶解，F：非專用溶媒溶解)，在25 ℃下放置，并于0，2，4，6，8，12，24 h用目測法觀察配伍溶液的外觀變化，各組配伍溶液均為透明溶液，肉眼未觀察到絮狀物、渾濁或沉淀產生，24 h內顏色沒有改變。

2.3.2pH值變化 取“2.3.1”項下各配伍溶液，于0，2，4，6，8，12，24 h用pH計測定其pH值。結果顯示RSD值依次為0.76%、0.78%、0.54%、1.14%，結果變化趨勢見圖2。

圖2 注射用右雷佐生配伍后溶液pH值變化(n=3)

2.3.3相對百分含量變化 在“2.3.1”操作基礎上，各組供試品溶液于0，2，4，6，8，12，24 h采用“2.1”項下色譜條件進樣分析測定。將0時的右雷佐生質量濃度計為100%，計算出其余各時間點的藥物相對百分含量。結果顯示，前6 h內專用溶媒組右雷佐生的相對百分含量為100.00%～96.33%，RSD<2%，非專用溶媒組右雷佐生的相對百分含量為100.00%～87.80%，RSD<2%。6 h以后各配伍液的相對百分含量為100.00%～74.28%，RSD>6%，表明在前6 h內，使用專用溶媒溶解的配伍液含量無明顯變化(≥95%初始濃度)，而非專用溶媒組含量發生明顯變化(<95%初始濃度)；6 h以后，各配伍液的含量顯著下降。結果變化趨勢見圖3。

圖3 注射用右雷佐生配伍后含量變化(n=3)

2.3.4不溶性微粒數變化 在“2.3.1”操作基礎上，于0，2，4，6，8，12，24 h以微粒分析儀測定供試品溶液中粒徑≥10 μm以及≥25 μm的微粒數。結果顯示，使用專用溶媒溶解的配伍液，其不溶性微粒數均在規定范圍內。非專用溶媒組，右雷佐生擴容至5%葡萄糖注射液中，粒徑≥10 μm的不溶性微粒數超出了規定值。專用溶媒組和非專用溶媒組配伍液粒徑≥25 μm的不溶性微粒數均在規定值范圍內。結果變化見圖4，5。

圖4 注射用右雷佐生配伍后≥10 μm微粒數變化(n=3)

圖5 注射用右雷佐生配伍后≥25 μm微粒數變化(n=3)

3 討 論

3.1含量測定方法的建立 右雷佐生屬于雙氧代二嗪類化合物，本試驗采用ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱，該色譜柱可耐受高比例水，適合分析水溶性物質。參考右雷佐生含量HPLC方法[13-14]，本實驗使用超高效液相色譜儀，調整流動相為0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液-甲醇(90:10，V/V)；流速0.4 mL/min，進樣量2 μL。在上述色譜條件下，右雷佐生保留時間為1.11 min，樣品分析時長為3 min，基線平穩，不受其他物質干擾，分離度良好，理論踏板數在正常范圍內。故該方法可用于右雷佐生含量的快速測定。

3.2專用/非專用溶媒溶解后不同配伍液的穩定性 靜脈輸液的pH值應接近體液的酸堿度，一般控制在4～9范圍內。pH值在此范圍外的溶液，會造成血管內皮細胞的損傷導致疼痛，并誘發血栓性靜脈炎和血小板聚集，且靜脈炎的嚴重程度與輸液的pH直接相關，pH值越低，靜脈炎會越嚴重[15]。本研究結果顯示，使用非專用溶媒組溶解的右雷佐生配伍液pH值為3.1左右；使用專用溶媒溶解的右雷佐生配伍液的pH值保持在4.7左右，可以在一定程度上減輕輸液時對患者的刺激性和潛在危害。專用溶媒為0.167 mol/L乳酸鈉注射液,可起到調節配伍液pH值的作用。

藥物含量降低會導致藥物療效降低，影響藥物治療的有效性。根據實驗結果，使用專用溶媒溶解的右雷佐生溶液的藥物含量下降緩慢，且在配制6 h內無明顯變化，而非專用溶媒組含量下降較快；各組配伍液藥物含量在配制6 h后均發生明顯下降(以含量是否≥95%初始濃度為判定依據[16])。

靜脈輸液不溶性微粒是指不溶于輸液且肉眼不可見的非代謝性顆粒雜質(粒徑<50 μm)，進入人體將對微循環有不同程度的影響。研究發現，不溶性微粒能夠引起熱源反應、炎癥反應、肉芽腫及血管栓塞，嚴重的甚至能引起癌癥[17]。據2015版《中國藥典》，除另有規定外，裝量>100 mL的靜脈注射液，粒徑≥10 μm的不溶性微粒數不得超過25粒/mL，≥25 μm的不溶性微粒數不得超過3粒/mL。上述試驗結果顯示，使用專用溶媒溶解后稀釋的配伍液，以及使用非專用溶媒+氯化鈉注射液稀釋的配伍液不溶性微粒數均符合規定，而使用非專用溶媒+葡萄糖注射液的配伍液粒徑≥10 μm的微粒數超出規定值。初步認為這與右雷佐生在5%葡萄糖注射液中溶解性較差，加專用溶媒可改善其溶解性能有關。

綜上所述，使用專用溶媒溶解的注射用右雷佐生溶液在6 h內的含量、不溶性微粒數和pH值均在正常范圍內，穩定性優于非專用溶媒組。建議，為保證藥物治療的安全性和有效性，臨床在使用注射用右雷佐生時，應仔細閱讀說明書，嚴格按照說明書要求配制使用該藥并在溶解后6 h內輸注完畢。