強直性脊柱炎患者血清TNF-α和IL-6及淋巴亞群的臨床意義

何善智 王敏 丁菱 王明霞 鄒嬋娟 顏絲語

中山市人民醫院風濕免疫科 528403

AS 是一種以主要累及脊柱和外周關節為主要表現的慢性自身炎癥性疾病，炎癥可累及肌腱、肌腱端、滑膜等關節及其周圍的部位，其特征性改變為肌腱和韌帶附著點附近炎癥，至今其具體發病原因仍不十分清楚，多認為與基因、環境、感染及免疫因素有關。免疫因素認為，在其發病過程中，伴隨著眾多免疫細胞的活化和細胞因子、炎癥介質的產生。近年來，有觀點認為AS 與淋巴細胞免疫異常相關，淋巴細胞是構成免疫系統和執行免疫功能的主要細胞群體，根據淋巴細胞亞群的免疫效應功能分為T 淋巴細胞（CD3+）、B 淋 巴 細 胞（CD3+CDl9+）和NK 細 胞（CDl6+CD56+），其表型是否表達CD4 和CD8，進一步分為輔助性T淋巴細胞（CD3+CD4+）和抑制性T 淋巴細胞（CD3+CD8+）［1］。輔助性T 細胞（Th）分為Th1 和Th2，TNF-α 由Th1 分泌，IL-6、IL-10 由Th2 分泌，能夠刺激參與免疫系統調節的細胞增殖、分化等過程［2］，其過量表達會損傷機體功能［3-4］。本文通過檢測AS 患者、正常對照者血清TNF-α、IL-6、淋巴細胞亞群水平，并比較依那西普治療前后AS 患者表達水平差異，探索其在AS 疾病發病機制及病程中的作用，并為其生物治療提供實驗依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014 年3 月至2020 年7 月在中山市人民醫院風濕免疫科門診及住院確診的AS 患者，共56 例。其中男43 例，女13 例，年齡（35.14±11.04）歲（13～64 歲），病程（9.05±8.11）年（1 月～30 年）；發病年齡（26.08±8.53）歲（12.9～41.5 歲）。正常對照組50 例，其中男35 例，女15 例，年齡（28.18±8.22）歲（15～65 歲）。兩組性別、年齡比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）。56例AS患者中，20例為初治患者，未使用過激素、非甾體抗炎藥或免疫抑制劑，余36 例經治患者，未使用過生物制劑。此次中的56 例患者接受依那西普（益賽普）治療。所有研究對象簽署知情同意書，本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入及排除標準 所有AS 患者符合1984 年AS紐約修訂版分類標準或2009 年ASAS 推薦的AS 分類標準［5］。排除標準：排除嚴重心腦血管疾病、肝腎疾病和重疊其他風濕性疾病；對照組為50 例年齡、性別匹配的健康志愿者，采血前半年內無疾病記錄。

1.3 臨床資料收集 收集AS 患者臨床表現及輔助檢查結果，醫生及患者分別填寫目視模擬測試表（Visual Analogue Sscale，VAS），疼痛評分0～10 分，并根據BASDAI（Bath AS 疾病活動度指數）對AS 病情活動進行評分，BASDAI≥4 分［6］為 活 動 期 患 者，BASDAI＜4 分 為 穩 定 期患者。

1.4 方法 采用流式熒光法測定AS 組患者及正常對照組血清中TNF-α、IL-6 水平，血標本均為清晨8 點靜息狀態下靜脈血分離所得。采用散射比濁法檢測CRP，ESR 采用毛細管光度計成像法檢測。應用流式細胞術檢測淋巴細胞亞群細胞百分比（CD4+T、CD8+T、B、NK）。

1.5 統計學處理 數據采用SPSS19.0 軟件進行統計學處理，正態分布的計量資料采用（）表示，采用t檢驗，偏態分布的資料以中位數（四分位數間距）M（IQR）表示，兩組間比較采用Mann-Whitney 秩和檢驗，各項指標間的相關性分析采用Pearson 相關分析，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 AS 患者與正常對照組TNF-α、IL-6、淋巴細胞亞群等表達水平比較 AS 患者血清TNF-α、IL-6、CD4+T、B細胞比例顯著高于正常對照組，CD8+T及NK細胞比例顯著低于正常對照組，見表1。

2.2 AS活動期與穩定期患者血清TNF-α、IL-6與臨床病情活動指標的關系 AS 活動期患者血清TNF-α 水平高于穩定期，兩組比較差異無統計學意義（P＞0.05），活動期AS 患者IL-6、CRP 及ESR 水平明顯高于穩定期AS 患者，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表2。

表1 AS組與正常對照組各指標表達水平（）

表1 AS組與正常對照組各指標表達水平（）

組別AS組正常對照組t值P值n 56 50 TNF-α（pg/ml）66.18±63.69 6.09±1.44 6.666＜0.001 IL-6（pg/ml）15.68±12.81 2.11±0.76 7.475＜0.001 CD4+T比例（%）43.50±4.60 30.40±1.80 18.880＜0.001 B細胞（%）12.40±3.60 8.80±3.50 5.207＜0.001 CD8+T細胞（%）17.50±5.70 23.70±6.10 5.408＜0.001 NK細胞（%）4.00±1.40 15.10±5.80 13.883＜0.001

表2 AS活動期與穩定期各指標表達水平（）

表2 AS活動期與穩定期各指標表達水平（）

時期活動期穩定期t值P值n 26 30 TNF-α（pg/ml）75.97±55.80 46.10±31.88 2.415 0.019 IL-6（pg/ml）31.40±28.50 4.40±3.73 5.145＜0.001 CRP（mg/L）56.55±54.60 5.70±4.08 5.092＜0.001 ESR（mm/h）82.68±33.22 25.67±23.01 7.545＜0.001

2.3 AS患者經過益賽普治療前后血清TNF-α、IL-6與臨床病情活動指標的關系 經過益賽普治療后患者TNF-α及IL-6 水平有相應下降，其中TNF-α 下降水平明顯，差異有統計學意義（P＜0.05）；臨床病情活動指標如CRP 及ESR也較前明顯下降（均P＜0.05）；BASDAI同時有下降，兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）；見表3。

2.4 AS 患者血清TNF-α、IL-6、CD4+T 百分比與CRP、ESR 等指標間的相關性 TNF-α、IL-6、CD4+T 比例與CRP、ESR、BASDAI、WBC、PLT 均有正相關（均P＜0.05），見表4。

表3 AS患者經過益賽普治療前后各指標表達水平（n = 56,）

表3 AS患者經過益賽普治療前后各指標表達水平（n = 56,）

時間治療前治療后t值P值TNF-α（pg/ml）101.69±56.44 58.84±54.17 4.099＜0.001 IL-6（pg/ml）21.10±9.64 6.56±2.89 10.811＜0.001 CRP（mg/L）32.22±9.49 7.80±3.78 17.890＜0.001 ESR（mm/h）60.88±44.96 31.52±28.82 4.114＜0.001 BASDAI（分）4.88±2.66 3.46±2.23 3.061 0.003

表4 AS患者TNF-α與臨床病情活動指標的相關性

3 討 論

早在二十世紀九十年代，TNF-α 及IL-6 已證實是由單核巨噬細胞分泌的一種促炎性細胞因子，參與強直性脊柱炎等風濕性疾病的發病過程，并與病情發展相關，其在炎癥反應及免疫調節中起重要作用。AS 均是以關節組織慢性炎癥性病變為主要表現的全身性疾病，其病因及發病機制至今尚未明確，大量文獻表明TNF-α 及IL-6 與AS 的發病有著密切聯系。本研究結果顯示，AS 患者血清TNF-α 及IL-6明顯高于正常對照組，且其水平表達在AS活動期患者明顯高于穩定期患者。這與Gratacós J 等［7］在1994 年研究的結果基本一致，Gratacós J 通過檢測AS 患者血清TNF-α、IL-6 的表達水平，探討其與疾病活動性的關系，結果表明AS 患者體內TNF-α 及IL-6 水平異常升高，高于正常對照組，同時IL-6 與病情活動指標如CRP、ESR、PLT 計數明顯相關。方玲等［8］研究結果亦表明TNF-α 及IL-6 水平在AS活動期表達高于穩定期，并大于正常對照者。本研究結果與上述文獻報道大致相同，提示AS患者可能存在TNF-α及IL-6表達水平異常。

CD3+CD4+T細胞具有輔助巨噬細胞活化和B細胞產生抗體等功能，起誘導細胞及體液免疫的作用，而CD3+CD8+T 細胞則通過抑制T 細胞活化和B 細胞產生抗體，抑制細胞及體液反應。CD3+CD4+T 細胞和CD3+CD8+T 細胞之間的相互協調和制約能夠產生適應性免疫應答，其比例失衡是免疫性疾病介導組織損傷的一個重要因素。B 淋巴細胞主要介導機體中的體液免疫反應，其在抗原的刺激下可分化為漿細胞，通過分泌抗體抵御抗原的侵襲。NK 細胞是T 淋巴細胞、B 淋巴細胞之外的第3 類免疫細胞，是機體天然免疫系統的主要成員。NK 細胞通過釋放細胞因子對機體免疫功能加以調節，可抑制B 淋巴細胞的增殖和分化，調節機體體液免疫反應，同時對T 淋巴細胞介導的細胞免疫也起調節作用。本研究發現，與正常對照組比較，AS 組患者外周血CD8+細胞及B 細胞百分比明顯升高，而CD4+及NK 細胞百分比明顯下降，與國內報道基本一致［9-10］，表明AS患者機體內存在T淋巴細胞亞群失衡，導致T淋巴細胞免疫調節失衡，細胞免疫功能受到抑制，體液免疫功能相對亢進，提示AS患者存在T淋巴細胞亞群功能紊亂。本研究中，AS患者組外周血淋巴細胞中NK細胞的比率顯著低于對照組，而B細胞的比率顯著高于對照組。提示AS患者存在天然免疫異常，并且隨著NK 細胞的減少，對B 細胞增殖分化的抑制作用可能被削弱，從而使B 細胞過度增殖分化，產生過多的免疫球蛋白，導致體液免疫亢進，引起免疫病理反應與組織損傷。

在AS 患者中，處于最核心位置的因子是TNF-α 及IL-6。TNF-α及IL-6是AS關節炎癥中的重要介質，IL-6可以誘導其他細胞因子如IL-1、IL-2、TNF-α的產生從而發揮致病作用，所以抑制血清異常升高的炎性細胞因子是治療二者疾病的重要手段。本研究結果表明，AS 患者經過益賽普治療前后，其血清TNF-α 及IL-6 有明顯下降，同時CRP、ESR、BASDAI 均有下降趨勢，表明TNF-α 可能通過抑制TNF-α表達，降低AS的疾病活動性。國內張莉蕓等［11］通過比較腫瘤壞死因子英夫利昔單抗治療AS 患者前后血清細胞因子變化，發現IL-6 水平較前明顯下降，且與AS 的疾病活動性相關，其可通過部分抑制IL-6 發揮療效。本研究結果與上述文獻報道大致相同，提示IL-6、TNF-α等有顯著協同作用，共同相互調節，促進疾病發生發展。

另外，本研究發現，TNF-α 及IL-6 與臨床疾病活動性指標呈正相關性。這與國內葉俏等［12］研究結果相似，葉俏發現AS 患者活動期TNF-α、IL-6 與CRP 及ESR 水平升高，同時IL-6 與CRP、ESR、BASDAI 呈相關性。梁秋冬等［13］也發現活動期AS 患者，TNF-α 與ESR 呈正相關。提示TNF-α、IL-6可能參與AS疾病活動期發展。TNF-α 是處于IL-6上游的細胞因子，是一種促炎癥細胞因子，它位于促炎癥細胞因子相互連接形成的網絡頂點，而IL-6 能誘導B 細胞增值分化并分泌多種抗體，誘導急性期反應蛋白產生，與各種細胞因子相互協同，增加滑膜細胞等產生細胞因子，可以促進骨質破壞和骨吸收，從而參與AS 患者病情發生、發展過程［14-15］。

綜上所述，通過檢測AS 患者體內IL-6、TNF-α 等指標變化，可以為判斷病情變化、治療效果提供良好的指標。AS患者體內存在細胞免疫紊亂及體液免疫亢進，并伴有天然免疫異常，監測AS 患者體內淋巴細胞亞群有助于全面了解機體的免疫狀態。

利益沖突：作者已申明文章無相關利益沖突。