強(qiáng)直性脊柱炎患者血清TNF-α和IL-6及淋巴亞群的臨床意義

何善智 王敏 丁菱 王明霞 鄒嬋娟 顏絲語(yǔ)

中山市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科 528403

AS 是一種以主要累及脊柱和外周關(guān)節(jié)為主要表現(xiàn)的慢性自身炎癥性疾病，炎癥可累及肌腱、肌腱端、滑膜等關(guān)節(jié)及其周圍的部位，其特征性改變?yōu)榧‰旌晚g帶附著點(diǎn)附近炎癥，至今其具體發(fā)病原因仍不十分清楚，多認(rèn)為與基因、環(huán)境、感染及免疫因素有關(guān)。免疫因素認(rèn)為，在其發(fā)病過(guò)程中，伴隨著眾多免疫細(xì)胞的活化和細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生。近年來(lái)，有觀點(diǎn)認(rèn)為AS 與淋巴細(xì)胞免疫異常相關(guān)，淋巴細(xì)胞是構(gòu)成免疫系統(tǒng)和執(zhí)行免疫功能的主要細(xì)胞群體，根據(jù)淋巴細(xì)胞亞群的免疫效應(yīng)功能分為T 淋巴細(xì)胞（CD3+）、B 淋 巴 細(xì) 胞（CD3+CDl9+）和NK 細(xì) 胞（CDl6+CD56+），其表型是否表達(dá)CD4 和CD8，進(jìn)一步分為輔助性T淋巴細(xì)胞（CD3+CD4+）和抑制性T 淋巴細(xì)胞（CD3+CD8+）［1］。輔助性T 細(xì)胞（Th）分為Th1 和Th2，TNF-α 由Th1 分泌，IL-6、IL-10 由Th2 分泌，能夠刺激參與免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)的細(xì)胞增殖、分化等過(guò)程［2］，其過(guò)量表達(dá)會(huì)損傷機(jī)體功能［3-4］。本文通過(guò)檢測(cè)AS 患者、正常對(duì)照者血清TNF-α、IL-6、淋巴細(xì)胞亞群水平，并比較依那西普治療前后AS 患者表達(dá)水平差異，探索其在AS 疾病發(fā)病機(jī)制及病程中的作用，并為其生物治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014 年3 月至2020 年7 月在中山市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診及住院確診的AS 患者，共56 例。其中男43 例，女13 例，年齡（35.14±11.04）歲（13～64 歲），病程（9.05±8.11）年（1 月～30 年）；發(fā)病年齡（26.08±8.53）歲（12.9～41.5 歲）。正常對(duì)照組50 例，其中男35 例，女15 例，年齡（28.18±8.22）歲（15～65 歲）。兩組性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。56例AS患者中，20例為初治患者，未使用過(guò)激素、非甾體抗炎藥或免疫抑制劑，余36 例經(jīng)治患者，未使用過(guò)生物制劑。此次中的56 例患者接受依那西普（益賽普）治療。所有研究對(duì)象簽署知情同意書，本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 所有AS 患者符合1984 年AS紐約修訂版分類標(biāo)準(zhǔn)或2009 年ASAS 推薦的AS 分類標(biāo)準(zhǔn)［5］。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除嚴(yán)重心腦血管疾病、肝腎疾病和重疊其他風(fēng)濕性疾?。粚?duì)照組為50 例年齡、性別匹配的健康志愿者，采血前半年內(nèi)無(wú)疾病記錄。

1.3 臨床資料收集 收集AS 患者臨床表現(xiàn)及輔助檢查結(jié)果，醫(yī)生及患者分別填寫目視模擬測(cè)試表（Visual Analogue Sscale，VAS），疼痛評(píng)分0～10 分，并根據(jù)BASDAI（Bath AS 疾病活動(dòng)度指數(shù)）對(duì)AS 病情活動(dòng)進(jìn)行評(píng)分，BASDAI≥4 分［6］為 活 動(dòng) 期 患 者，BASDAI＜4 分 為 穩(wěn) 定 期患者。

1.4 方法 采用流式熒光法測(cè)定AS 組患者及正常對(duì)照組血清中TNF-α、IL-6 水平，血標(biāo)本均為清晨8 點(diǎn)靜息狀態(tài)下靜脈血分離所得。采用散射比濁法檢測(cè)CRP，ESR 采用毛細(xì)管光度計(jì)成像法檢測(cè)。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群細(xì)胞百分比（CD4+T、CD8+T、B、NK）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，正態(tài)分布的計(jì)量資料采用（）表示，采用t檢驗(yàn)，偏態(tài)分布的資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）M（IQR）表示，兩組間比較采用Mann-Whitney 秩和檢驗(yàn)，各項(xiàng)指標(biāo)間的相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 AS 患者與正常對(duì)照組TNF-α、IL-6、淋巴細(xì)胞亞群等表達(dá)水平比較 AS 患者血清TNF-α、IL-6、CD4+T、B細(xì)胞比例顯著高于正常對(duì)照組，CD8+T及NK細(xì)胞比例顯著低于正常對(duì)照組，見表1。

2.2 AS活動(dòng)期與穩(wěn)定期患者血清TNF-α、IL-6與臨床病情活動(dòng)指標(biāo)的關(guān)系 AS 活動(dòng)期患者血清TNF-α 水平高于穩(wěn)定期，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），活動(dòng)期AS 患者IL-6、CRP 及ESR 水平明顯高于穩(wěn)定期AS 患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表1 AS組與正常對(duì)照組各指標(biāo)表達(dá)水平（）

表1 AS組與正常對(duì)照組各指標(biāo)表達(dá)水平（）

組別AS組正常對(duì)照組t值P值n 56 50 TNF-α（pg/ml）66.18±63.69 6.09±1.44 6.666＜0.001 IL-6（pg/ml）15.68±12.81 2.11±0.76 7.475＜0.001 CD4+T比例（%）43.50±4.60 30.40±1.80 18.880＜0.001 B細(xì)胞（%）12.40±3.60 8.80±3.50 5.207＜0.001 CD8+T細(xì)胞（%）17.50±5.70 23.70±6.10 5.408＜0.001 NK細(xì)胞（%）4.00±1.40 15.10±5.80 13.883＜0.001

表2 AS活動(dòng)期與穩(wěn)定期各指標(biāo)表達(dá)水平（）

表2 AS活動(dòng)期與穩(wěn)定期各指標(biāo)表達(dá)水平（）

時(shí)期活動(dòng)期穩(wěn)定期t值P值n 26 30 TNF-α（pg/ml）75.97±55.80 46.10±31.88 2.415 0.019 IL-6（pg/ml）31.40±28.50 4.40±3.73 5.145＜0.001 CRP（mg/L）56.55±54.60 5.70±4.08 5.092＜0.001 ESR（mm/h）82.68±33.22 25.67±23.01 7.545＜0.001

2.3 AS患者經(jīng)過(guò)益賽普治療前后血清TNF-α、IL-6與臨床病情活動(dòng)指標(biāo)的關(guān)系 經(jīng)過(guò)益賽普治療后患者TNF-α及IL-6 水平有相應(yīng)下降，其中TNF-α 下降水平明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；臨床病情活動(dòng)指標(biāo)如CRP 及ESR也較前明顯下降（均P＜0.05）；BASDAI同時(shí)有下降，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；見表3。

2.4 AS 患者血清TNF-α、IL-6、CD4+T 百分比與CRP、ESR 等指標(biāo)間的相關(guān)性 TNF-α、IL-6、CD4+T 比例與CRP、ESR、BASDAI、WBC、PLT 均有正相關(guān)（均P＜0.05），見表4。

表3 AS患者經(jīng)過(guò)益賽普治療前后各指標(biāo)表達(dá)水平（n = 56,）

表3 AS患者經(jīng)過(guò)益賽普治療前后各指標(biāo)表達(dá)水平（n = 56,）

時(shí)間治療前治療后t值P值TNF-α（pg/ml）101.69±56.44 58.84±54.17 4.099＜0.001 IL-6（pg/ml）21.10±9.64 6.56±2.89 10.811＜0.001 CRP（mg/L）32.22±9.49 7.80±3.78 17.890＜0.001 ESR（mm/h）60.88±44.96 31.52±28.82 4.114＜0.001 BASDAI（分）4.88±2.66 3.46±2.23 3.061 0.003

表4 AS患者TNF-α與臨床病情活動(dòng)指標(biāo)的相關(guān)性

3 討 論

早在二十世紀(jì)九十年代，TNF-α 及IL-6 已證實(shí)是由單核巨噬細(xì)胞分泌的一種促炎性細(xì)胞因子，參與強(qiáng)直性脊柱炎等風(fēng)濕性疾病的發(fā)病過(guò)程，并與病情發(fā)展相關(guān)，其在炎癥反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。AS 均是以關(guān)節(jié)組織慢性炎癥性病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的全身性疾病，其病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，大量文獻(xiàn)表明TNF-α 及IL-6 與AS 的發(fā)病有著密切聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示，AS 患者血清TNF-α 及IL-6明顯高于正常對(duì)照組，且其水平表達(dá)在AS活動(dòng)期患者明顯高于穩(wěn)定期患者。這與Gratacós J 等［7］在1994 年研究的結(jié)果基本一致，Gratacós J 通過(guò)檢測(cè)AS 患者血清TNF-α、IL-6 的表達(dá)水平，探討其與疾病活動(dòng)性的關(guān)系，結(jié)果表明AS 患者體內(nèi)TNF-α 及IL-6 水平異常升高，高于正常對(duì)照組，同時(shí)IL-6 與病情活動(dòng)指標(biāo)如CRP、ESR、PLT 計(jì)數(shù)明顯相關(guān)。方玲等［8］研究結(jié)果亦表明TNF-α 及IL-6 水平在AS活動(dòng)期表達(dá)高于穩(wěn)定期，并大于正常對(duì)照者。本研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)報(bào)道大致相同，提示AS患者可能存在TNF-α及IL-6表達(dá)水平異常。

CD3+CD4+T細(xì)胞具有輔助巨噬細(xì)胞活化和B細(xì)胞產(chǎn)生抗體等功能，起誘導(dǎo)細(xì)胞及體液免疫的作用，而CD3+CD8+T 細(xì)胞則通過(guò)抑制T 細(xì)胞活化和B 細(xì)胞產(chǎn)生抗體，抑制細(xì)胞及體液反應(yīng)。CD3+CD4+T 細(xì)胞和CD3+CD8+T 細(xì)胞之間的相互協(xié)調(diào)和制約能夠產(chǎn)生適應(yīng)性免疫應(yīng)答，其比例失衡是免疫性疾病介導(dǎo)組織損傷的一個(gè)重要因素。B 淋巴細(xì)胞主要介導(dǎo)機(jī)體中的體液免疫反應(yīng)，其在抗原的刺激下可分化為漿細(xì)胞，通過(guò)分泌抗體抵御抗原的侵襲。NK 細(xì)胞是T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞之外的第3 類免疫細(xì)胞，是機(jī)體天然免疫系統(tǒng)的主要成員。NK 細(xì)胞通過(guò)釋放細(xì)胞因子對(duì)機(jī)體免疫功能加以調(diào)節(jié)，可抑制B 淋巴細(xì)胞的增殖和分化，調(diào)節(jié)機(jī)體體液免疫反應(yīng)，同時(shí)對(duì)T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫也起調(diào)節(jié)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組比較，AS 組患者外周血CD8+細(xì)胞及B 細(xì)胞百分比明顯升高，而CD4+及NK 細(xì)胞百分比明顯下降，與國(guó)內(nèi)報(bào)道基本一致［9-10］，表明AS患者機(jī)體內(nèi)存在T淋巴細(xì)胞亞群失衡，導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)失衡，細(xì)胞免疫功能受到抑制，體液免疫功能相對(duì)亢進(jìn)，提示AS患者存在T淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂。本研究中，AS患者組外周血淋巴細(xì)胞中NK細(xì)胞的比率顯著低于對(duì)照組，而B細(xì)胞的比率顯著高于對(duì)照組。提示AS患者存在天然免疫異常，并且隨著NK 細(xì)胞的減少，對(duì)B 細(xì)胞增殖分化的抑制作用可能被削弱，從而使B 細(xì)胞過(guò)度增殖分化，產(chǎn)生過(guò)多的免疫球蛋白，導(dǎo)致體液免疫亢進(jìn)，引起免疫病理反應(yīng)與組織損傷。

在AS 患者中，處于最核心位置的因子是TNF-α 及IL-6。TNF-α及IL-6是AS關(guān)節(jié)炎癥中的重要介質(zhì)，IL-6可以誘導(dǎo)其他細(xì)胞因子如IL-1、IL-2、TNF-α的產(chǎn)生從而發(fā)揮致病作用，所以抑制血清異常升高的炎性細(xì)胞因子是治療二者疾病的重要手段。本研究結(jié)果表明，AS 患者經(jīng)過(guò)益賽普治療前后，其血清TNF-α 及IL-6 有明顯下降，同時(shí)CRP、ESR、BASDAI 均有下降趨勢(shì)，表明TNF-α 可能通過(guò)抑制TNF-α表達(dá)，降低AS的疾病活動(dòng)性。國(guó)內(nèi)張莉蕓等［11］通過(guò)比較腫瘤壞死因子英夫利昔單抗治療AS 患者前后血清細(xì)胞因子變化，發(fā)現(xiàn)IL-6 水平較前明顯下降，且與AS 的疾病活動(dòng)性相關(guān)，其可通過(guò)部分抑制IL-6 發(fā)揮療效。本研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)報(bào)道大致相同，提示IL-6、TNF-α等有顯著協(xié)同作用，共同相互調(diào)節(jié)，促進(jìn)疾病發(fā)生發(fā)展。

另外，本研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α 及IL-6 與臨床疾病活動(dòng)性指標(biāo)呈正相關(guān)性。這與國(guó)內(nèi)葉俏等［12］研究結(jié)果相似，葉俏發(fā)現(xiàn)AS 患者活動(dòng)期TNF-α、IL-6 與CRP 及ESR 水平升高，同時(shí)IL-6 與CRP、ESR、BASDAI 呈相關(guān)性。梁秋冬等［13］也發(fā)現(xiàn)活動(dòng)期AS 患者，TNF-α 與ESR 呈正相關(guān)。提示TNF-α、IL-6可能參與AS疾病活動(dòng)期發(fā)展。TNF-α 是處于IL-6上游的細(xì)胞因子，是一種促炎癥細(xì)胞因子，它位于促炎癥細(xì)胞因子相互連接形成的網(wǎng)絡(luò)頂點(diǎn)，而IL-6 能誘導(dǎo)B 細(xì)胞增值分化并分泌多種抗體，誘導(dǎo)急性期反應(yīng)蛋白產(chǎn)生，與各種細(xì)胞因子相互協(xié)同，增加滑膜細(xì)胞等產(chǎn)生細(xì)胞因子，可以促進(jìn)骨質(zhì)破壞和骨吸收，從而參與AS 患者病情發(fā)生、發(fā)展過(guò)程［14-15］。

綜上所述，通過(guò)檢測(cè)AS 患者體內(nèi)IL-6、TNF-α 等指標(biāo)變化，可以為判斷病情變化、治療效果提供良好的指標(biāo)。AS患者體內(nèi)存在細(xì)胞免疫紊亂及體液免疫亢進(jìn)，并伴有天然免疫異常，監(jiān)測(cè)AS 患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞亞群有助于全面了解機(jī)體的免疫狀態(tài)。

利益沖突：作者已申明文章無(wú)相關(guān)利益沖突。