乳腺癌中抵抗素和Fascin-1蛋白表達的相關性及臨床預后意義

金璐璐 王艷 王倩 邵俊康 黃必飛 王超群

1東陽市人民醫院溫州醫科大學附屬東陽醫院生物醫學實驗室 322100；2東陽市人民醫院溫州醫科大學附屬東陽醫院腫瘤內科 322100；3東陽市人民醫院溫州醫科大學附屬東陽醫院病理科 322100

乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，其發病人數和死亡人數均處于惡性腫瘤前列［1-2］。抵抗素（Resistin）是脂肪細胞分泌的一種細胞因子，最初對其的研究主要集中在肥胖和胰島素抵抗等方面，它可通過多種分子途徑參與機體的代謝、炎癥和自身免疫［3］。目前研究發現其和多種惡性腫瘤的發生和進展相關［4］。在乳腺癌中，多項研究顯示血清Resistin 水平升高與乳腺癌風險增加及進展相關［5-7］。細胞骨架蛋白Fascin-1（FSCN1）在乳腺癌、胃癌等多種腫瘤中高表達，與腫瘤發生、進展密切相關［8-13］。我們先前的研究顯示p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路調控FSCN1 表達，并進一步影響乳腺癌細胞侵襲轉移［12］。有研究報道Resistin 亦可通過p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路促進骨肉瘤血管新生及平滑肌增殖［14-15］。而乳腺癌中Resistin和FSCN1之間是否存在某種關聯尚未見相關報道。本研究采用免疫組織化學Envision 法檢測400 例乳腺癌組織中Resistin 和FSCN1 蛋白的表達，探討Resistin 和FSCN1 的相關性，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2007 年1 月至2019 年6 月東陽市人民醫院病理科浸潤性乳腺癌石蠟標本400例。按WHO標準（2012年）對各病例進行分型和分級。患者年齡范圍為26～90 歲，中位年齡52 歲；組織學分級：Ⅰ級20 例，Ⅱ級264例，Ⅲ級116例；pTNM 分期：Ⅰ期106例，Ⅱ期195例，Ⅲ期99例，Ⅳ期0例。所有患者術前未做化療、免疫及放射治療。在本組乳腺癌病例中，239例有完整的隨訪資料者納入本研究生存分析。本研究經東陽市人民醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 免疫組織化學染色 免疫組織化學實驗采用Envision 二步法（Dako 公司），具體實驗步驟、條件如前所述［12-13］。本研究所使用一抗包括：鼠抗人Resistin 單克隆一抗（克隆號：C-10，Santa Cruz公司）；鼠抗人FSCN1單克隆一抗（克隆號：55K-2，Santa Cruz公司）。

1.3 免疫組織化學評分 （1）Resistin染色主要定位于細胞漿，其染色強度計分：0（無染色）、1（淡黃色）、2（棕黃色）和3（棕褐色），以0～1 為低表達，2～3 為高表達［16］。（2）FSCN1染色結果判定采用前述標準［13］，以強陽性視為高表達。

1.4 隨訪 隨訪方案及具體步驟如前所述［17］。

1.5 統計學分析 數據處理采用SPSS19.0 統計軟件，樣本率比較應用χ2檢驗。Resistin 和FSCN1 蛋白表達的相關性采用Spearman 相關分析。采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，患者生存分析用Log-Rank 檢驗。P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 乳腺癌中Resistin 和FSCN1 蛋白的表達及相關性 在400 例乳腺癌組織中，334 例（83.5%）Resistin 蛋白高表達；75 例（18.8%）FSCN1 蛋白高表達。Resistin 高表達患者的FSCN1 蛋白高表達率（21.0%，70/334）較Resistin 低表達者（7.6%，5/66）顯著增強，差異有統計學意義（P=0.011），見圖1。Spearman 相關分析顯示乳腺癌中Resistin 和FSCN1蛋白表達顯著正相關（r=0.127，P=0.011）。

2.2 乳腺癌中Resistin 和FSCN1 共同高表達對患者預后的影響 乳腺癌患者術后平均隨訪時間為60 月（3～80 月）。生存分析顯示，在獲得隨訪信息的239 例乳腺癌患者中，5 年總生存率為88.3%（211/239），5 年無復發生存率為79.1%（189/239）。

Resistin和FSCN1均高表達的乳腺癌患者5年平均生存期為54.3 月，總生存率為78.8%（26/33），顯著低于Resistin和FSCN1 單一高表達者［5 年平均生存期為57.9 月、總生存率為88.5%（146/165）］及Resistin和FSCN1均低表達者［5年平均生存期為58.0 月、總生存率為95.1%（39/41）］，差異有統 計學意義（χ2=4.744、P=0.029，圖2A）。 Resistin 和FSCN1 均高表達者5 年平均無復發生存期為50.3 月，無復發生存率為75.8%（25/33），低于Resistin 和FSCN1單一高表達者［5 年平均無復發生存期為53.6 月、無復發生存率為78.2%（129/165）］及Resistin 和FSCN1均低表達者［5年平均無復發生存期為54.8 月、無復發生存率為85.4%（35/41）］，但差異未見統計學意義（χ2=1.228、P=0.268，圖2B）。

圖1 乳腺癌中Resistin和FSCN1免疫組織化學染色，Envision二步法（×200）

圖2 239例乳腺癌患者生存曲線

3 討 論

先前研究顯示，Resistin 參與肥胖相關的亞臨床炎癥、胰島素抵抗、動脈粥樣硬化等疾病，其通過下游分子途徑參與代謝、炎癥和自身免疫［3］。近年來，研究發現Resistin 在非小細胞肺癌、乳腺癌、子宮內膜癌等惡性腫瘤患者血液中高表達，其單核苷酸多態性與多種腫瘤發生和進展密切相關，提示Resistin 與惡性腫瘤發生或進展密切相關［4-7，18-19］。然而，目前關于Resistin 在乳腺癌組織中表達的報道少見。我們前期應用免疫組化技術檢測了154 例乳腺癌組織中Resistin 蛋白的表達，結果顯示乳腺癌相對于正常乳腺組織Resistin 表達顯著增強，表明Resistin 與乳腺癌發生密切相關［16］。

FSCN1與腫瘤細胞侵襲和轉移密切相關［20］。研究顯示乳腺癌中p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路通過調控FSCN1 表達，進一步影響乳腺癌細胞侵襲轉移［12］。同時有報道顯示Resistin 通過p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路促進骨肉瘤血管新生及平滑肌增殖［13-14］。那么，在乳腺癌中，Resistin 和FSCN1 之間是否存在某種關聯呢？目前尚未見相關報道。闡明該問題可能為今后抗乳腺癌治療提供新的靶點和思路。

本研究結果顯示，在Resistin 高表達的乳腺癌組織中FSCN1 表達增高，Spearman 相關分析顯示Resistin 和FSCN1 蛋白表達顯著正相關。結合文獻報道，我們推測乳腺癌中Resistin 及其下游信號通路可能對FSCN1 存在正性調控作用。p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路是否可能介導了Resistin 對FSCN1 表達的調控有待進一步研究。本研究生存分析結果顯示Resistin 和FSCN1 均高表達的乳腺癌患者5年平均生存期和總生存率顯著低于Resistin和FSCN1單一高表達者及Resistin 和FSCN1 均低表達者，提示Resistin 和FSCN1 均高表達的乳腺癌患者預后不良，它們高表達對患者預后的影響可能具有協同作用。因此，同時抑制Resistin和FSCN1 可能是抗乳腺癌治療的一個新的潛在可行的策略。

利益沖突：作者已申明文章無相關利益沖突。