三陰性乳腺癌組織中Ki-67表達與微血管密度關系

李亮

(駐馬店市中心醫院 病理科，河南 駐馬店 463000)

近年來，我國乳腺癌發病率呈上升趨勢[1]，三陰性乳腺癌是乳腺癌的一種特殊亞型。隨著醫療技術的提升，乳腺癌的治療技術取得很大進展，但該病易轉移和復發，其治療仍是臨床急需解決的重點問題。劉焱等[2]研究發現，腫瘤需新生血管為其生長增殖提供足夠氧及營養物質，因此新生血管在腫瘤細胞生長增殖過程中起到非常重要的作用。Ki-67 是一種具有蛋白酶性質的堿性蛋白質，能夠很好反映細胞的增殖活性[3]。目前，關于Ki-67 表達與微血管密度關系的研究較少見，臨床仍需進一步證實。故本文回顧性分析2018年1月至2019年6月期間駐馬店市中心醫院收治的102 例三陰性乳腺癌患者的臨床資料，探究三陰性乳腺癌組織中Ki-67 表達與微血管密度的相關性，旨在為臨床抗血管生成等輔助治療提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年1月至2019年6月期間本院收治的102 例三陰性乳腺癌患者的臨床資料。所有患者均為女性，年齡29 ～68 歲，平均年齡(47.60±9.04)歲，腫瘤直徑(3.11±0.97) cm，腫瘤分期(TNM)：Ⅰ期10 例，Ⅱ期39 例，Ⅲ期44 例，Ⅳ期9 例。本研究通過本院醫學倫理委員會批準后執行。

納入標準：①患者均符合乳腺癌相關臨床表現，并經病理檢查確診為三陰性乳腺癌；②均無遠處轉移；③未進行抗腫瘤治療。

排除標準：①合并其他腫瘤者；②伴有免疫缺陷、傳染性疾病者；③哺乳期或妊娠期婦女；④心、肝、肺等重要臟器功能不全者；⑤依從性差者。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫組化染色

所有患者的腫瘤標本在免疫組化染色前進行10% 福爾馬林固定、常規石蠟包埋、4 μm 連續切片處理。每批免疫組化染色均設置陽性、陰性對照，陽性對照采用已知的Ki-67 陽性切片( 深圳華瑞同康生物技術有限公司)；陰性對照采用磷酸緩沖鹽溶液(PBS，0.01 mol/L，PH7.4) 替代一抗。將切片后的4 μm 腫瘤標本置于載玻片上，于60℃恒溫箱中放置2 h，再于37℃恒溫箱中進行固片。切片脫蠟水化：首先，使用二甲苯清洗切片兩次，每次10 min；其次，使用100%乙醇清洗切片兩次，每次5 min；然后，使用梯度乙醇(95%、80%) 各沖洗5 min；最后，清水沖洗、蒸餾水清洗3 min。抗原熱修復：將脫蠟水化后的切片置于壓力鍋中，使抗原修復液包裹切片，開始噴氣時再計時加熱3 min，而后停止加熱；使用冷水降至室溫后取出切片，使用蒸餾水和PBS各沖洗三次，每次2 min；將過氧化物酶滴加在切片上，于37℃條件下孵育10 min；使用PBS 沖洗三次，每次2 min；在切片組織表面滴加3,3- 二氨基聯苯顯色，顯微鏡觀察，適時終止顯色反應；用蘇木素復染，乙醇脫水，封片。

1.2.2 結果判定

根據Weidner 計數法[4]算出微血管密度，在低倍鏡下觀察整個切片，選出三個熱區(微血管密度最高區)，在高倍鏡下對微血管數目進行計數，取三個熱區微血管數平均值作為微血管密度。Ki-67 在細胞核中陽性表達，內皮細胞著色棕黃色為陽性，Ki-67 表達程度用陽性細胞比例表示，陽性細胞超過腫瘤細胞總數的10%為陽性，低于10% 為陰性。所有病理切片均由同一組病理科醫師進行閱片。

1.3 統計學分析

采用SPSS 19.0 軟件進行統計學分析，以±s表示正態分布的計量資料，并行t檢驗；以例表示計數資料，并行χ2檢驗或Fisher’s 精確檢驗，Ki-67 表達與微血管密度關系采用pearson 相關分析。P＜0.05 為差異顯著，具有統計學意義。

2 結 果

2.1 Ki-67 表達結果與病理因素關系

102 例三陰性乳腺癌組織切片中，66 例Ki-67 表達陽性，陽性表達率為64.71%；Ki-67 在Ⅲ～Ⅳ期表達程度高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，在直徑＞2 cm 腫瘤表達程度高于直徑≤2 cm 腫瘤(P＜0.05)。見表1。

表1 Ki-67表達結果與病理因素關系

2.2 微血管密度與病理因素關系

Ⅲ～Ⅳ期腫瘤微血管密度高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，直徑＞2 cm 的腫瘤微血管密度高于直徑≤2 cm 腫瘤(P＜0.05)。見表2。

表2 微血管密度與病理因素關系（±s ）

表2 微血管密度與病理因素關系（±s ）

n 微血管密度 t P 因素 年齡0.353 0.725＞50 歲 70 163.24±15.63≤50 歲 32 162.07±15.38腫瘤分期6.433 ＜0.001Ⅰ～Ⅱ期 49 160.82±15.60Ⅲ～Ⅳ期 53 181.07±16.14腫瘤直徑2.907 0.005＞2 cm 57 169.26±14.88≤2 cm 45 160.61±14.98

2.3 三陰性乳腺癌組織中Ki-67 表達與微血管密度相關性分析

pearson 相關分析顯示，三陰性乳腺癌組織中Ki-67表達與微血管密度呈正相關(r=0.563，P＜0.001)。

3 討 論

乳腺癌在是臨床較常見的女性惡性疾病，發病率在女性惡性腫瘤中排名第二[5]。三陰性乳腺癌是乳腺癌的一種特殊亞型，檢查結果顯示人表皮生長因子受體(HER-2)、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR) 均為陰性[6]。Ki-67 是一種具有蛋白酶性質的核抗原基因，多表達于增殖細胞的細胞核內，在惡性腫瘤中的表達遠高于正常組織，因其能夠很好地反映腫瘤增殖活性，成為臨床檢測腫瘤增殖活性的常用指標[7-8]。豐富的脈管系統是腫瘤發生、浸潤及轉移的必要條件，沒有新生血管提供足夠營養物質，腫瘤僅能生長到1 ～2 cm[9]。微血管密度可直接反映腫瘤組織中新生微血管活躍程度，故微血管密度是評價預后的一項重要指標[10]。

本研究結果顯示，Ki-67 陽性表達率為64.71%，Ki-67 在Ⅲ～Ⅳ期表達程度高于Ⅰ～Ⅱ期，在直徑＞2 cm 腫瘤表達程度高于直徑≤2 cm 腫瘤；Ⅲ～Ⅳ期腫瘤微血管密度高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，直徑＞2 cm的腫瘤微血管密度高于直徑≤2 cm 腫瘤，提示Ki-67、微血管密度與腫瘤直徑和臨床分期相關。三陰性乳腺癌病情越嚴重，Ki-67 表達程度越高，微血管密度越大。原因可能為腫瘤增長刺激微血管密度增高，以滿足癌組織的營養運輸[11]。臨床可根據Ki-67 及微血管密度診斷和篩選高危患者，為抗血管生成等輔助治療提供依據，及早制定理治療方案。三陰性乳腺癌組織中Ki-67 表達與微血管密度呈正相關，表明隨著腫瘤細胞增殖活性的增加，腫瘤血管生成數量也相應增加，提示腫瘤細胞增殖能力越強，血管越豐富，腫瘤惡化越嚴重，與文顯梅等[12]人研究結果相符。

綜上所述，三陰性乳腺癌組織中Ki-67 表達與微血管密度呈正相關，可將其作為輔助判斷三陰性乳腺癌浸潤程度及惡性程度的生物學指標，具有一定臨床價值。