中華鱉虹彩病毒感染的臨床病理學觀察

陳銘，潘延樂*，伍洋，張璐璐，胡積霞，徐華，彭燕

（1.信陽市動物疫病預防控制中心，河南 信陽 464000；2.宜賓市翠屏區動物疫病預防控制中心, 四川 宜賓 644000）

中華鱉(Trionyx)隸屬爬行綱、龜鱉目（Testudinata）、鱉科（Trionychidae）、鱉屬（Trionyx），是一種珍貴的、經濟價值很高的水生動物。中華鱉在野外廣泛分布于除寧夏、新疆、青海和西藏外的我國大部分地區，尤以湖南、湖北、江西、安徽、江蘇等省產量較高，另外在日本、朝鮮、越南等地也有分布。

近幾年來，特種水產養殖尤其是養鱉業迅猛發展，高密度人工養殖中鱉病頻頻發生，在全國許多省份暴發流行，養鱉業遭受慘重的經濟損失。每年初春和夏末，中華鱉有2次發病高峰期，死亡率極高，經濟損失慘重[1]。張奇亞，李正秋從患有典型病癥（中華鱉紅脖子病）、瀕于死亡的病鱉中，首次分離出了1種病毒，即虹彩病毒（Iridovirus,TSV）。虹彩病毒病的危害較大，且在全世界水生動物中廣泛流行。因此，國內外學者也進行了廣泛而深入的研究，主要集中在以下幾個方面：魚和蛙虹彩病毒的比較研究，虹彩病毒基因組及基因的測序研究，虹彩病毒基因與細胞基因的同源性研究。但對于中華鱉感染虹彩病毒的病理學研究較少。且近日在德陽某養殖場發現大量中華鱉感染虹彩病毒的狀況。為了解病毒對中華鱉的致病作用及其致病機理，總結特征性病變為臨床治療作指導，本實驗擬用疑似虹彩病毒感染的病鱉進行解剖學和組織病理學觀察，總結其病理變化，為研究其致病機理等后續研究提供依據，奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物材料

德陽某中華鱉養殖場提供的中華鱉，經PCR診斷為虹彩病毒感染。

1.1.2 主要儀器設備

101-2 型電熱鼓風干燥箱(上海)；FEICA RM2315切片機(德國)；HH數顯恒溫水浴鍋（金壇）；OLYMPS CH2OBIMF200光學顯微鏡（日本）

1.1.3 主要實驗試劑

10%福爾馬林、各濃度梯度酒精、二甲苯、石蠟、蘇木紫、伊紅、鹽酸酒精

1.2 方法

觀察病鱉外部病理變化（出血點及潰瘍灶等），將病鱉迅速處死后隨即解剖、染色，進行病理觀察。

2 結果

2.1 剖解變化

病鱉背甲或腹甲上有小出血點，各部位均有出血性潰瘍，隨病情加重，潰瘍由小變大，數量增多，并向體內發展，甚至出現穿孔等癥狀（見圖1）。經解剖觀察發現：病鱉的肝，脾，腸等充血，在肝的被膜下有大小形狀不一出血區；肝、脾、膽明顯腫大（見圖2）。腫大充血的肝、脾、腎等組織失去彈性，易碎。腸腔中空無食物，亦無黃色粘液。

2.3 病理組織學觀察

肝臟：病鱉肝細胞廣泛性顆粒變性和空泡變性(見圖3)；細胞腫脹，使肝血竇受壓萎縮消失；局部出現嗜酸性粒細胞；在部分肝小葉內大量增多；病變嚴重區域肝細胞核溶解，細胞崩解形成局灶性壞死灶。肝小葉靜脈淤血及大量淋巴細胞浸潤（見圖4）。

脾臟：病鱉脾內淋巴細胞數量顯著減少，白髓萎縮甚至消失成為壞死灶；紅髓內有淤血，并有大量巨噬細胞增生，嗜酸性粒細胞浸潤，同時有大量含鐵血黃素沉積（見圖6）；脾被膜出血（見圖5），被膜水腫增寬。

腎臟：腎小管上皮細胞腫脹，可見廣泛性顆粒變性與空泡變性，胞漿可見透明滴狀變（見圖7），滴狀物大小不等、半透明、紅染，嚴重時充滿胞漿；有紅染漿液滲出；局灶性腎小管上皮細胞壞死解體（見圖8）；腎小球變性萎縮；組織間可見紅細胞滲出和大量淋巴細胞浸潤。

心臟：主要表現為心肌纖維腫脹，橫紋模糊消失，出現顆粒變性和空泡變性；局部肌纖維扭曲斷裂或溶解消失（見圖9）；纖維間有滲出的紅細胞和紅染漿液，可見有微血栓形成（見圖10）。

腸道：腸組織切片中，粘膜下層肌纖維腫大，斷裂扭曲，細胞腫脹變性，結構混亂，模糊不清（見圖11）。

肺臟：上皮細胞核碎裂，細胞腫脹或壞死萎縮；局部肺泡腔萎縮消失；肺泡隔淤血，伴有淋巴細胞增生（見圖12）；并有紅色血栓與含鐵血黃素沉積（見圖13）。

3 討論

本實驗經與正常中華鱉組織進行比較，病鱉的肝、脾、腎、心、腸、肺及體表等組織均不同程度的受到損害。其中肝臟，脾臟和腎臟的病變較嚴重。這說明肝，脾及腎可能是中華鱉虹彩病毒（TSV）主要靶器官。國內外有關虹彩病毒感染中華鱉及兩棲類魚類的病理學研究，多認為肝，脾嚴重變形壞死及皮膚肌肉的潰爛為病毒感染的主要標志[2]。在此基礎上，本實驗發現腎臟亦有嚴重顆粒變性、空泡變性直至細胞萎縮壞死，腎小球上皮細胞內出現透明滴變現象，心腔、肺臟內出現紅色血栓。因此，可認為表皮肌肉潰瘍，肝、脾和腎的嚴重病變，腎小球上皮細胞的透明滴變，心腔肺臟形成微血栓，為虹彩病毒感染的主要病理學變化。

中華鱉虹彩病毒可能首先入侵肝和脾內，在其細胞中大量繁殖，擴增出的病毒經過血液循環，再轉移到其他器官中，造成多個器官的損害。各個器官多出現出血與水腫，則由于病毒入侵，在宿主細胞里增殖，破壞了宿主細胞，細胞出現腫大和壞死。侵入毛細血管，則毛細血管細胞腫大，血管壁受損。血管壁的損傷進一步激活凝血系統，出現彌漫性血管內凝血（DIC）。血管內堆積大量微血栓，血栓的頭部、體部進一步增大并順血流方向延伸，當血管腔大部分或完全被阻塞后，則其下游血流近于停止，血液發生凝固，形成暗紅色的血凝塊，即紅色血栓。在凝血因子大量消耗的同時，出血則會更加普遍和嚴重，循環血量不足，全身血液循環功能下降，各種營養物質不能運進組織，組織代謝產生的各種代謝產物也不能運出，使正常代謝出現障礙，器官出現梗死或壞死，喪失功能，最終病鱉急性死亡。而脾的感染，一方面使得本身的造血功能下降，不能有效補充循環血量的流失；另一方面，作為重要的免疫器官，不能對入侵的病毒迅速產生有效的免疫反應，且阻礙了體液免疫信息傳遞，使得病鱉免疫力下降甚至喪失。所以被感染病鱉，很有可能同時被其它微生物混合感染，且造成在水體中的大量流行，出現中華鱉的大規模死亡。

虹彩病毒在上皮細胞胞漿內可形成嗜酸性包涵體，本實驗中在腎臟可見腎小管上皮細胞漿內嗜酸性滴狀物，其是否為包涵體或是由于腎小球炎癥引起的透明滴變有待進一步研究。

[1]錢明明,宋杰,物斌,王海靜,趙寶華.中華鱉常見疾病的診斷及其綜合防治[J].動物醫學進展, 2009,30(4):103-107.

[2]Youhua Huang,Xiaohong Huang,Hong Liu. Complete sequence determination of a novel reptile iridovirus isolated from soft-shelled turtle and evolutionary analysis of Iridoviridae [J]. BMC Genomics,2009,10:224.