IL-32，Cys-C和β2-MG在多發性骨髓瘤患者外周血中的表達

費曉莉, 章 帆, 張開基,何 東, 林 娟, 侯 錚

1.成都市第一人民醫院 血液內科，成都 610016；2.成都市第一人民醫院 檢驗科，成都 610016

多發性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)是一種克隆性漿細胞異常增殖的惡性疾病，發病率僅次于淋巴瘤，約占惡性腫瘤的1%[1]．目前，各種治療方案(如免疫療法、自體造血干細胞移植、靶向藥物等)層出不窮為MM 患者提供了更多的治療選擇[2-3]．盡管如此，MM仍無法達到完全治愈，絕大部分患者仍會因疾病進展、復發，最終導致治療失敗[4]．大量研究證實炎癥微環境與腫瘤的發生發展密切相關，炎癥微環境中多種免疫細胞分泌大量細胞因子、趨化因子、生長因子等可以促進腫瘤細胞生長和增殖，從而導致腫瘤性疾病進展惡化[5]．白介素32(interleukin 32，IL-32)呈現出促炎癥因子的特性，能夠促進MIP-2，TNF-α，IL-6等多種炎癥因子分泌增加，從而導致“級聯放大效應”[6-7]．目前，已有文獻報道IL-32在多種實體腫瘤如肝癌、肺癌、結腸癌等中呈高表達，被認為是這些疾病的獨立不良預后因素[8-9]，但在多發性骨髓瘤中相關研究甚少．胱抑素-C(Cys-C)是半胱氨酸蛋白酶抑制家族成員，可直接或間接參與腫瘤生長、血管生成、腫瘤細胞轉移等過程，有研究表明Cys-C與腫瘤負荷、疾病發展有關[10-11]．生理代謝活躍的腫瘤細胞可分泌大量β2微球蛋白(β2-MG)，β2-MG能夠反映MM細胞增殖活性，研究表明它與MM腫瘤負荷、疾病進展有關[12-13]．本研究通過比較MM患者不同ISS分期，以及化療前后血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平變化，探討其與MM發生、發展的關系，旨在為臨床工作尋找簡單易操作，并且可靠的MM 腫瘤負荷、病情分期、近期療效的評價指標．

1 資料和方法

1.1 病例樣本

將2015年1月-2019年7月期間，成都市第一人民醫院收治的初診MM患者62例(MM組)納入本研究．其中男性38例、女性24例；年齡36～76歲，中位年齡59歲；IgG型34例，IgA型17例，IgD型2例，輕鏈型9例，所有病例診斷均符合《2017年中國多發性骨髓瘤診治指南》的診斷標準[14]．依據國際分期系統(ISS)進行分期[15]，I期11例、Ⅱ期19例、Ⅲ期32例．納入MM組患者排除慢性阻塞性肺病、乙型病毒性肝炎、類風濕關節炎等慢性炎性疾病，化療前或化療過程中出現感染者．MM組62例患者接受化療，其中43例接受BD方案化療：硼替佐米1.3 mg/m2，第1，4，8，11 d；地塞米松20 mg/d，第1～2，4～5，8～9，11～12 d，21 d為1個療程．另19例MM患者接受VAD方案化療：長春新堿0.5 mg/d，第1～4 d；阿霉素10 mg/d，第1～4 d；地塞米松40 mg/d，第1～4，9～12，17～20 d，28 d為1個療程．經4個療程化療后進行療效評估，參考2016年國際骨髓瘤工作組(IMWG)療效標準[16]，其中達完全緩解患者(CR)17例，非常好的部分緩解患者(VGPR)21例，部分緩解患者(PR)20例，疾病進展患者(PD)4例．此外，選擇年齡、性別相匹配的健康體檢者28例(對照組)，男性15例、女性13例，年齡38～72歲，中位年齡54歲．本研究通過成都市第一人民醫院醫學倫理委員會批準，受試者簽署同意書．

1.2 標本采集和制備

MM組患者采集標本時間為化療前和化療4個療程后，對照組為體檢當日采集．分別采集兩管空腹靜脈外周血各5 mL(肝素抗凝)，其中一管離心提取上層血清置于1.5 mL Eppendorf管中，-70 ℃ 保存用于IL-32水平測定．另一管外周血置于全自動生化檢測儀中(美國貝克曼庫爾特公司)當日完成Cys-C，β2-MG 水平測定．

1.3 檢測方法

采用ELISA法檢測血清IL-32水平(上海酶聯有限公司試劑盒)，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，操作步驟為：對應板孔中加入100 μL標準品工作液或血清標本，37 ℃孵育90 min，棄掉板內液體后，立即加入100 μL生物素化抗體工作液，37 ℃孵育60 min，棄掉板內液體，洗板3次，每孔加入100 μL HRP酶結合物工作液，37 ℃孵育30 min，棄掉板內液體，洗板5次，每孔加入90 μL底物溶液，37 ℃孵育約15 min，每孔加入50 μL終止液，最后在450 nm波長下讀取OD值．使用全自動生化檢測儀免疫比濁法測定血清Cys-C，β2-MG水平．

1.4 統計學處理

2 結 果

2.1 化療前MM組和對照組血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平比較

MM組化療前血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平明顯高于正常對照組，差異具有統計學意義(p<0.05)(表1)．

表1 化療前MM組與對照組血清IL-32，Cys-C，，β2-MG水平比較

2.2 不同ISS分期MM組患者化療前血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平比較

Ⅲ期MM患者血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平高于I期和II期患者，差異具有統計學意義(p<0.05)，II期患者血清IL-32，β2-MG水平高于I期患者，差異具有統計學意義(p<0.05)，血清Cys-C水平差異無統計學意義(p>0.05)(表2)．

表2 不同ISS 分期初診MM患者血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平比較

2.3 MM組患者化療前后血清中IL-32，Cys-C，β2-MG水平變化比較

化療前MM患者血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平顯著高于化療后，差異具有統計學意義(p<0.05)(表3)．

表3 MM患者化療前后血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平比較

2.4 不同療效MM患者血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平比較

部分緩解、疾病進展MM患者血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平均高于完全緩解患者(p<0.05)．非常好的部分緩解患者血清β2-MG水平高于完全緩解患者(p<0.05)，IL-32，Cys-C水平與完全緩解患者差異無統計學意義(p>0.05)(表4)．

表4 不同療效 MM患者血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平比較

2.5 血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平與MM患者疾病分期、化療后療效的相關性分析

采用Spearman進行相關性分析，發現初診MM患者ISS分期與血清中IL-32，Cys-C，β2-MG水平均呈正相關(p<0.05)，患者疾病分期越靠后，血清中IL-32，Cys-C，β2-MG水平越高．MM患者經化療后療效評估，療效與血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平均呈負相關(p<0.05)，患者預后越差，血清中IL-32，Cys-C，β2-MG水平越高(表5、表6)．

表5 患者ISS分期與血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平相關性分析

表6 化療后MM患者療效與血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平相關性分析

3 結 語

多發性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)是一種克隆性漿細胞異常增殖的惡性疾病，大量單克隆免疫球蛋白產生，導致終末器官損害，老年患者較多[17]．炎癥微環境與腫瘤發生、發展密切相關，在炎癥微環境中的免疫細胞分泌大量細胞因子、趨化因子、生長因子，從而促進腫瘤細胞迅速生長和增殖，最終導致腫瘤進展惡化[5]．約25%的腫瘤性疾病是由慢性炎癥進展而成，在炎性微環境中炎性細胞作為重要的支持細胞保護并促進其生長，同時許多腫瘤從慢性炎癥的病灶處演變而來，因此炎癥和腫瘤有著緊密的聯系[18]．IL-32最早在自然殺傷細胞(NK)細胞中發現，最初命名為NK-4[19]，主要由病原體和促炎細胞因子誘導產生，Monigatti等[20]首次報道了IL-32的促炎癥因子特性．IL-32呈現促炎癥因子特性，能夠促進MIP-2，TNF-α，IL-6，IL-1β等多種炎癥因子分泌增加，并起到“級聯放大效應”．目前，已有大量文獻報道IL-32在多種腫瘤如肝癌[8]、肺癌[9]、慢性淋巴細胞白血病[21]、結腸癌[22]、乳腺癌[23]、骨肉瘤等中高表達，被認為是這些腫瘤性疾病的獨立不良預后因素．

本研究發現MM患者體內高表達IL-32，且經過化療后血清中IL-32水平明顯降低．采用ELISA法檢測初診未治MM 組和對照組血清IL-32水平，結果顯示初診未治MM患者化療前血清IL-32水平明顯高于正常對照組，且ISS分期與IL-32水平呈正相關，提示血清 IL-32水平可以反映MM患者腫瘤負荷以及疾病的嚴重程度，與Wang等[24]、Zahoor等[25]的研究結果一致．本研究還分別檢測了MM組化療前后IL-32水平變化情況，發現化療后IL-32水平顯著降低，化療后進行療效評估，得出化療后完全緩解MM患者IL-32水平較部分緩解、疾病進展患者明顯降低，提示血清 IL-32水平可以作為臨床監測評估MM患者化療療效的指標．

單一指標的檢測很難準確反應疾病病理生理學行為方面的復雜性，因此聯合檢測現已成為共識．β2-MG是由機體有核細胞合成和分泌的分子量較低的蛋白，生理代謝過程活躍的腫瘤細胞可分泌大量β2-MG，已有大量研究證實它能夠反映MM細胞的增殖活性，是MM腫瘤負荷、疾病分期、預后評估公認的可靠指標[26]，也是公認的MM國際分期系統(ISS)的重要指標之一．Cys-C 是半胱氨酸蛋白酶抑制家族成員，能夠抑制細胞內外半胱氨酸蛋白酶，直接或間接參與腫瘤生長、血管生成、腫瘤細胞轉移等過程[27-28]．因此，本研究與IL-32同期監測了β2-MG，Cys-C血清水平變化，發現血清β2-MG，Cys-C水平變化趨勢與IL-32水平變化一致，并進行了相關性分析，發現血清IL-32，Cys-C，β2-MG水平與MM患者腫瘤負荷、疾病分期呈正相關，與化療后療效呈負相關，提示IL-32，Cys-C和β2-MG一樣，在評估MM腫瘤負荷、疾病分期和化療療效中有可靠的臨床應用價值，這與張蘊玉等[29]、Gu等[10]的研究結果一致．

IL-32可能在MM發生、發展中發揮作用，血清IL-32，β2-MG和Cys-C水平不僅能夠作為 MM腫瘤負荷、疾病分期、進展程度的評價參考指標，還能夠預估患者的臨床近期療效，服務于臨床工作．上述指標檢測簡單、快速、易操作，易于被臨床采納應用．