氣相色譜-質譜聯用法直接分析白酒中18種鄰苯二甲酸酯

（江蘇洋河酒廠股份有限公司，江蘇宿遷 223800）

鄰苯二甲酸酯（Phthalates，PAEs）是一種常見的塑化劑，在包裝材料、塑料管道、塑料墊片等各類塑料制品中廣泛應用，可通過呼吸道、消化道和皮膚等途徑進入人體[1]，是一種環境激素類內分泌干擾化合物，具有生殖毒性、發育毒性及致癌性[2]。白酒作為我國特有酒類，乙醇含量較高，是鄰苯二甲酸酯類塑化劑的良好“溶劑”，在白酒生產、運輸及貯存過程中接觸到塑料制品均有可能引入污染，進而促使PAEs 的遷移[3]。白酒質量安全性依然是人們關注的熱點。

PAEs 的檢測方法主要有氣相色譜法[4]、氣質聯用法[5-6]、液相色譜法[7-8]等，目前，國內對食品中PAEs 通用測定方法為氣質聯用法，即國標法[9]，但國標法一方面前處理操作較繁瑣，需進行稱量—加水—混勻—加正己烷—超聲—離心等，工作效率較低，對生產性企業適用性不夠；另一方面國標法作為通用標準，試樣均需用正己烷萃取，采用正己烷萃取白酒試樣時，因白酒中乙醇含量較高，增大了PAEs 在水相中的溶解度，同時導致萃取劑正己烷大量溶解到水層，進而導致萃取回收率顯著偏低[10-11]，白酒與其他食品試樣相比，基底相對干凈，具備了直接進樣檢測的條件[7]，DBP 和DEHP 為白酒中兩種常見鄰苯二甲酸酯[12]，同時國家衛生計委僅對DEHP和DBP的健康風險做了評價，含量分別在5.0 mg/kg和1.0 mg/kg以下時，處于可接受水平[13]，2種PAEs 對應氘代物（D4-DBP 和D4-DEHP）性質和在譜圖上保留時間滿足作為雙內標條件。與外標法相比，內標法可以一定程度校準基質效應，同時可降低重復進樣和實驗條件穩定性對檢測結果的影響。

基于以上背景，本實驗以D4-DBP 和D4-DEHP 為內標，采用直接進樣方式建立白酒中18 種鄰苯二甲酸酯檢測方法，并重點考察該方法檢出限、定量限及精密度，以期建立一種操作簡便、準確快速且適合酒企開展塑化劑檢測的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

酒樣：市售品牌白酒。

儀器設備：GCMS-QP2010SE 氣相色譜質譜儀，帶電子轟擊源（EI），日本島津；MS 3 basic 渦旋混勻器，德國艾卡。

試劑：16 種PAEs 標準品。鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、鄰苯二甲酸二正丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、鄰苯二甲酸二（4-甲基2-戊基）酯（BMPP）、鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、鄰苯二甲酸丁基芐基酯（BBP）、鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、鄰苯二甲酸二環己酯（DCHP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、鄰苯二甲酸二壬酯（DNP）、鄰苯二甲酸二苯酯（DPhP），甲醇體系混合液體標準品，濃度為1000 μg/mL，純度＞95%中國計量科學研究院；鄰苯二甲酸二烯丙酯（DAP）、鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）、氘代鄰苯二甲酸二正丁酯（D4-DBP）、氘代鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（D4-DEHP），純度＞95%，上海安譜實驗科技股份有限公司；色譜無水乙醇，德國默克公司；一級水，實驗室制備。

1.2 實驗方法

1.2.1 溶液配制

60 %（體積分數）乙醇溶液的配制：準確量取300 mL 無水乙醇移于500 mL 容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻備用。

鄰苯二甲酸二烯丙酯標準儲備液（1000 μg/mL）：準確稱取鄰苯二甲酸二烯丙酯(DAP)0.100 g(精確到0.0001 g)于100 mL 容量瓶中，用無水乙醇溶解并準確配制成質量濃度為1000 μg/mL 的標準儲備液。

鄰苯二甲酸二異壬酯標準儲備液（1000 μg/mL）：準確稱取鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）0.100 g(精確到0.0001 g)于100 mL 容量瓶中，用無水乙醇溶解準確配制成質量濃度為1000 μg/mL 的標準儲備液。

17 種PAEs 標準中間液（10 μg/mL）：分別準確移取16 種PAEs 標準品(1000 μg/mL)和鄰苯二甲酸二烯丙酯標準儲備液(1000 μg/mL)各1 mL 至100 mL 容量瓶中加入無水乙醇并準確定容至刻度。

2種氘代同位素內標使用溶液：準確轉移10 mg D4-鄰苯二甲酸二正丁酯（D4-DBP）和25 mg D4-鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酸（D4-DEHP）至100 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解并準確定容至刻度，得到100 μg/mL D4-DBP 和250 μg/mL D4-DEHP，然后取上述溶液1 mL 至10 mL 容量瓶，用60 %乙醇并準確定容至刻度，得到10 μg/mL D4-DBP 和25 μg/mL D4-DEHP內標使用液。

18 種PAEs 標準系列工作液：準確吸取17 種PAEs標準中間溶液(10 μg/mL)和DINP(10 μg/mL)，用60%乙醇逐級稀釋，配制成17種濃度為0.0 μg/mL、0.02 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的標準系列溶液和濃度分別為0.0 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2 μg/mL、4.0 μg/mL、8.0 μg/mL、10.0 μg/mL 的DINP 標準系列溶液，加入雙內標使用液，臨用時配制。

1.2.2 儀器條件

氣相色譜條件：色譜柱：HP-5MS 石英毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）。進樣口溫度：290 ℃。升溫程序：初始柱溫60 ℃，保持l min，以20 ℃/min 升溫至220 ℃，保持1 min，再以5 ℃/min升溫至280 ℃，保持2 min，最后以20 ℃/min升溫至300 ℃，不保持。載氣：氦氣（純度＞99.999%），流速：l mL/min。進樣方式：不分流進樣。進樣量：0.6μL。

質譜條件：電離方式：電子轟擊電離源(EI)。電離能量：70 eV。傳輸線溫度：280 ℃。

離子源溫度：230 ℃。監測方式：選擇離子掃描模式（SIM）。溶劑延遲：7 min。

1.2.3 樣品處理

準確量取5 mL 樣品至比色管，加入60 μL 內標使用液，混勻后，轉移至進樣瓶，GC/MS 分析檢測。

2 結果與分析

2.1 18種鄰苯二甲酸酯色譜質譜分析

在SACN 模式下，分別采集18 種PAEs 混標溶液和內標混合溶液（D4-DBP 10 mg/L 和D4-DEHP 25 mg/L）全掃譜圖，對色譜圖進行分析，得到18 種PAEs和2種內標的質譜圖，盡量選擇響應較高和質量數較大的為定量離子，選擇2 個響應和質量數次之的為定性離子，同時確定各指標保留時間，結果見表1。

表1 目標化合物保留時間及特征離子

采用上述定性、定量離子，進行SIM 模式掃描，得到18種PAEs總離子流色譜圖，見圖1。

由圖1 可知，18 種鄰苯二甲酸酯化合物標準品峰形和分離度均較好。

由于DINP峰多簇，呈現“五指峰”峰型，其出峰時間較寬，包裹DNOP，國標方法均選149 m/z 為DNOP 和DINP 定量離子，本研究為避免DNOP 和DINP 定量時相互干擾，故選DINP 定量離子為293 m/z。

2.2 方法的線性范圍

圖1 18種PAEs標準品總離子流色譜圖

依據GB 5009.271 和樣品檢出情況，本實驗選擇0.00 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L為17種鄰苯二甲酸酯濃度線性范圍，選擇0.0 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L、8.0 mg/L、10.0 mg/L 為DINP 標準濃度線性范圍，每個濃度重復進3 次，采集結果取平均值，制作標準曲線，得到18 種PAEs 線性方程、相關系數、線性范圍，詳見表2。由表2 可知，在要求的線性范圍內，18種PAEs 線性關系良好，相關系數R2均大于0.99，滿足分析要求。

2.3 方法檢出限和定量限

本試驗采用基于響應值的標準偏差法確定本方法的檢出限和定量限，方法檢出限和方法定量限可分別用測定結果3δ/S 和10δ/S 進行計算，其中δ為低濃度時測量結果的標準偏差，S 為標準曲線的斜率。向空白樣品中加標樣，配制0.05 mg/L 濃度（17 種混標）和0.50 mg/L（DINP）加標樣品進樣測試11 次，計算其測量結果標準偏差，進而計算方法檢出限和定量限，結果見表3。

由表3 可知，18 種標準物質的方法檢出限和定量限存在一定差異性，其中17 種鄰苯二甲酸酯類物質（除DINP）的檢出限范圍在0.01～0.05 mg/L 之間，定量限范圍在0.03～0.17 mg/L之間，DINP 的方法檢出限和定量限分別為0.49 mg/L 和1.63 mg/L，均優于國標對定量限的要求，即DBP 定量限為0.30 mg/mL，DINP 定量限為9.0 mg/mL，除DBP 和DINP 之外其他16 種鄰苯二甲酸酯定量限均為0.50 mg/mL。

表4 18種PAEs的相對標準偏差和回收率

2.4 方法的精密度和回收率

隨機取一接近空白樣品，僅DMP 和DBP 有檢出，檢出值為0.01 mg/L，在樣品中分別添加兩種標準溶液的3 水平濃度，即17 種鄰苯二甲酸酯標準溶液（0.06 mg/L、0.20 mg/L、1.00 mg/L）和DINP 標準溶液（0.50 mg/L、2.00 mg/L、6.00 mg/L），每個添加濃度重復測定6 次，計算RSD 值和回收率，結果見表4。

表5 質控樣驗證測定結果

由表4 可知，18 種鄰苯二甲酸酯的RSD 在0.44%～8.84%之間，說明該分析方法的精密度較好，重現性良好；加標回收率范圍在88.89 %～116.67 %之間，說明該方法檢測結果準確度較好，方法準確可靠。

2.5 質控樣驗證

配制質控樣，使得17 種鄰苯二甲酸酯濃度0.50 mg/L，DINP 濃度為5.00 mg/L，采用本檢測方法對配制質控樣平行測定6 次，計算RSD 和相對誤差，以進一步驗證方法的可行性，結果見表5。

由表5 可知，質控樣檢測結果RSD 在0.99%～4.97%范圍內，均小于10%，同時相對誤差絕對值均在0.33 %～4.77 %范圍內，均小于10 %，說明該方法準確性和穩定性均較好，能夠滿足檢測分析要求。

3 結論

本研究采用氣相色譜串聯質譜結合雙內標定量法直接分析白酒中18 種PAEs。結果表明：采用D4-DBP 和D4-DEHP 雙內 標可 對18 種PAEs 的準確定量；標準曲線相關系數均在0.99 以上，說明線性良好；RSD 在0.44 %～8.84 %之間，加標回收率在88.89%～116.67%之間，說明該方法準確可靠；除DINP 以外17 種PAEs 檢出限在0.01～0.05 mg/L之間，定量限在0.03～0.17 mg/L之間，DINP 的檢出限和定量限分別為0.49 mg/L 和1.63 mg/L，均優于國標對定量限的要求。以上可知，采用該方法檢測白酒中18種PAEs具有可行性。

本方法采用直接進樣法，簡化前處理流程，減少溶劑污染，提高分析效率，適于白酒中塑化劑的檢測分析，對白酒生產企業就塑化劑檢測提供一定參考價值。