貴陽市2020年中小型豬場病毒性疫病調(diào)查與分析

藺俐仲，楊 源，張 海，劉 艷，徐春志，景書灝，袁翠霞，楊 峰

（1.貴陽市草地站，貴州 貴陽 5500811；2.貴陽市動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽 550081）

病毒性疫病是制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要因素之一，尤其自2018年8月我國發(fā)生第1例非洲豬瘟以來，國內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)受到重創(chuàng)，隨著國家相關(guān)部門對疫情的重視和采取嚴(yán)格管控措施，我國非洲豬瘟疫情趨于平穩(wěn)[1]。但是在做好非洲豬瘟常態(tài)化防控的同時也不能忽視其他疫病的防控，豬瘟（Classical Swine Fever, CSF）、藍(lán)耳?。≒orcinereproductive and Respiratory Syndromevirus,PRRS）、口蹄疫（Foot-and-mouth disease,FMD）、圓環(huán)病毒2型?。≒orcine Circovirus Subtype 2b, PCV2）、偽狂犬?。≒seudorabies,PR）、細(xì)小病毒?。≒orcine Parvovirus Infection,PP）等病毒性疫病同樣是威脅養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要疫病，一旦發(fā)生也具有大流行可能，造成巨大損失，應(yīng)引起養(yǎng)殖場和疫病防控部門關(guān)注[2-3]。何羽揚(yáng)等（2020）采用病毒宏基因組學(xué)分析方法對貴州省4個規(guī)?；i場健康仔豬所攜帶的病毒進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果顯示，4個豬場仔豬攜帶25個科病毒，包括豬瘟病毒、圓環(huán)病毒、冠狀病毒、細(xì)小病毒等，其中豬圓環(huán)病毒感染率更是達(dá)到了75%～100%，由此可見，豬場疫病防控任務(wù)仍然十分艱巨[4-5]。大型規(guī)?；B(yǎng)殖場越來越重視生物安全，但在中小型養(yǎng)殖場、散養(yǎng)戶生物安全防控措施、意識稍有欠缺，是潛在的疫病發(fā)生風(fēng)險點(diǎn)，因此對貴陽市11個中小型養(yǎng)豬場進(jìn)行豬瘟、藍(lán)耳病、口蹄疫、圓環(huán)病毒2型、偽狂犬病和細(xì)小病毒病6種病毒性疫病調(diào)查，旨在掌握貴陽市中小型豬場病毒性疫病流行情況，為貴陽市豬場疫病防控和免疫程序制定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

2020年1月1日至12月31日期間，從貴陽市開陽縣、息烽縣、清鎮(zhèn)市、修文縣內(nèi)11個中小型養(yǎng)豬場（編號1—11）采集豬淋巴結(jié)組織樣本438份，豬抗凝血液樣本576份。

1.2 主要試劑

豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬口蹄疫病毒、豬細(xì)小病毒、豬圓環(huán)病毒2型和豬偽狂犬病病毒實(shí)時熒光定量RT-PCR/PCR檢測試劑盒均購自無錫優(yōu)聯(lián)生物科技有限公司；病毒DNA/RNA核酸提取試劑購自西安天隆科技有限公司。

1.3 主要儀器

熒光定量PCR儀ABI 7500；核酸提取儀器：西安天隆NP968-S。

1.4 核酸檢測方法

對438份豬淋巴結(jié)組織樣本進(jìn)行研磨處理后，采用磁珠法提取研磨液和576份豬抗凝血液樣本基因組，并采用實(shí)時熒光定量RT-PCR/PCR方法進(jìn)行豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬口蹄疫病毒、豬細(xì)小病毒、豬圓環(huán)病毒2型和豬偽狂犬病病毒核酸檢測，根據(jù)檢測試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)，對檢測結(jié)果進(jìn)行判定。

1.5 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用Excel和Prism軟件對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 豬瘟等6種病毒核酸檢測結(jié)果

采用豬瘟病毒、藍(lán)耳病病毒、口蹄疫病毒、圓環(huán)病毒2型、偽狂犬病病毒、細(xì)小病毒實(shí)時熒光定量RT-PCR/PCR檢測試劑盒對1 014份樣本檢測，按試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)，以Ct值小于30且出現(xiàn)典型S型擴(kuò)增曲線即判為陽性的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定，結(jié)果如表1所示。

由表1可知，共計檢測樣本1 014份，陽性樣本66份，總體陽性率為6.51%；其中豬瘟病毒和豬藍(lán)耳病病毒各檢出4份，陽性率均為2.37%，占比均為6.06%；細(xì)小病毒陽性數(shù)為7份，陽性率為4.14%，占比10.61%；豬圓環(huán)病毒2型檢出51份，陽性率為30.18%，占比最高，達(dá)到77.27%；口蹄疫病毒和豬偽狂犬病病毒并無陽性檢出。

2.2 不同檢測樣本病毒核酸檢測結(jié)果對比

對豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬口蹄疫病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病病毒、豬細(xì)小病毒核酸檢測結(jié)果按豬淋巴結(jié)組織樣本和抗凝血液樣本進(jìn)行分類統(tǒng)計分析，結(jié)果如表2所示。

由表2可知，豬淋巴結(jié)組織樣本中，病毒核酸陽性率為9.13%；豬血液樣本中，病毒核酸陽性率為4.51%，組織樣本核酸陽性檢出率約是血液樣本2倍；其中豬瘟病毒核酸在組織樣本中檢出，但在血液中并未檢出；藍(lán)耳病病毒、豬圓環(huán)病毒2型和豬細(xì)小病毒核酸在組織樣本中陽性檢出率均高于血液樣本。

2.3 不同養(yǎng)殖場病毒核酸檢測結(jié)果對比

對豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬口蹄疫病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病病毒、豬細(xì)小病毒核酸檢測結(jié)果按不同養(yǎng)殖場進(jìn)行分類統(tǒng)計分析，結(jié)果如表3所示。

表3 不同養(yǎng)殖場病毒核酸檢測結(jié)果對比

由表3可知，11個養(yǎng)殖場中有9個養(yǎng)殖場在豬瘟病毒等6種病毒核酸檢測中均有陽性，總體核酸陽性率為6.51%，其中8號養(yǎng)殖場陽性檢出率最高，達(dá)到了18.33%，1號、2號、3號、7號、8號和10號養(yǎng)殖場的核酸陽性率均高于總體水平，4號和9號養(yǎng)殖場無陽性檢出。圓環(huán)病毒2型在7個養(yǎng)殖場中檢出陽性，養(yǎng)殖場檢出率為63.64%（7/11）；細(xì)小病毒在3個養(yǎng)殖場中檢出陽性，養(yǎng)殖場檢出率為27.27%（3/11）；豬瘟病毒和藍(lán)耳病病毒均在2個養(yǎng)殖場中檢出陽性，養(yǎng)殖場檢出率為18.2%（2/11）；同時1號、3號、8號養(yǎng)殖場存在以圓環(huán)病毒2型為主混合感染細(xì)小病毒、豬瘟病毒的情況，存在混合感染場占27.27%（3/11）。病例檢測結(jié)果經(jīng)卡方檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，感染圓環(huán)病毒后導(dǎo)致豬群易被豬瘟病毒、藍(lán)耳病病毒、細(xì)小病毒感染，有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（X2=26.35，P＜0.01）。

3 討論

豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、口蹄疫被我國列為一類動物疫病，被世界動物衛(wèi)生組織列為必須報告疫病，一旦發(fā)生，將有可能造成大流行，圓環(huán)病毒2型病、偽狂犬病和細(xì)小病毒病同樣是常發(fā)且能造成巨大損失的豬病毒性疫病。近年來，在國家及地方各級動物疫病防控機(jī)構(gòu)努力下，這6種病毒性疫病并未有大流行發(fā)生，但在多地流調(diào)中均有陽性檢出報道，如梁俊超等（2019）對我國9個省豬場進(jìn)行CSFV、PRRSV和PRV-gE流行病學(xué)調(diào)查，陽性率分別為2.62%、26.15%和1.67%[6]；王懷禹等（2020）對四川省南充市規(guī)?；i場進(jìn)行了主要病毒性疫病的流行病學(xué)調(diào)查及分析，結(jié)果顯示，CSFV、PRRSV、PRV和PCV2陽性率分別為9.21%、17.11%、18.42%和22.37%[7]；胡玲玲等（2019）對貴州省16個規(guī)?；B(yǎng)殖場進(jìn)行了豬偽狂犬病gE抗體檢測，結(jié)果陽性率為1.89%[8]；貴陽市動物疫病預(yù)防控制中心2018年對貴陽市37個規(guī)?；i場進(jìn)行了CSFV和PRRSV的流行情況調(diào)查，陽性率分別為4.30%和9.68%，混合感染發(fā)生率為2.15%[9-10]。由此可見，CSFV、PRRSV、PCV2、PRV在全國范圍內(nèi)規(guī)?；i場存在散發(fā)或小范圍流行情況，但對于中小型豬場、散養(yǎng)戶流調(diào)資料相對較少，因此為加強(qiáng)貴陽市中小型養(yǎng)豬場病毒性疫病防控，把控疫病發(fā)生風(fēng)險點(diǎn)，本研究對2020年貴陽市11家豬場進(jìn)行了豬瘟等6種病毒性疫病調(diào)查，結(jié)果顯示，貴陽市中小型養(yǎng)豬場同樣存在PCV2、PRRSV、CSFV、PPV散發(fā)的情況，陽性率分別為30.18%、2.37%、2.37%和4.14%。該結(jié)果與其他研究者調(diào)查結(jié)果大致相符合，但在偽狂犬病檢測項(xiàng)目有區(qū)別，分析認(rèn)為，參考的其他研究者在進(jìn)行偽狂犬病調(diào)查時均采用ELISA-gE方法，而本次調(diào)查則主要采用熒光定量PCR方法，檢測方法的差別或許是導(dǎo)致該結(jié)果產(chǎn)生的原因，在今后工作中會考慮將ELISA和核酸檢測相結(jié)合，進(jìn)一步研究兩種檢測方法對于檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的差異。

在非洲豬瘟防控背景下，越來越多的大型規(guī)?；B(yǎng)豬場配備了熒光定量PCR儀器，用于開展非洲豬瘟、豬瘟、藍(lán)耳病等相關(guān)疫病自檢工作。由于日常調(diào)運(yùn)過程中，通常是采集豬EDTA抗凝血液作為非洲豬瘟檢測樣本，加之血液采集相對簡單，導(dǎo)致有些臨床工作者會將血液作為檢測任何項(xiàng)目的樣本，但是抗凝血液是否真正可以作為檢測豬瘟、藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒病等其他疫病的樣本，關(guān)于這方面研究資料相對較少。病毒嗜性研究是研究者開展病毒致病機(jī)理研究時都會涉及的內(nèi)容，不同病毒入侵機(jī)體后，根據(jù)自身結(jié)構(gòu)會選擇特定細(xì)胞進(jìn)行定植[11-13]，如豬瘟病毒在感染后1天即可在淋巴結(jié)、脾臟、扁桃體中檢出，且隨著感染時間推移，病毒含量逐漸增加，而在肺臟呈現(xiàn)相反的病理變化[14]，不同病毒入侵組織細(xì)胞會有區(qū)別，因此生物制品市場上，試劑說明書中會注明最佳檢測樣本的選擇，但現(xiàn)實(shí)情況下，活體動物很難做到大規(guī)模采集淋巴結(jié)等組織樣本，所以很多基層技術(shù)人員會選擇較好采集的血液樣本作為檢測樣本，但檢測結(jié)果是否科學(xué)準(zhǔn)確，有關(guān)這方面的研究相對較少。因此本文選擇血液和組織樣本作為此次調(diào)查的檢測對象，結(jié)果顯示，組織和血液樣本中的病毒核酸檢出率分別為9.13%和4.51%，藍(lán)耳病病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬瘟病毒和細(xì)小病毒核酸在組織樣本中檢出率均高于血液樣本，其中豬瘟病毒核酸在組織樣本中檢出，而在血液樣本中并未檢出。由此可見，組織與血液作為檢測樣本時，結(jié)果存在差異，在臨床中若以血液作為檢測豬瘟、藍(lán)耳病等疫病樣本時，結(jié)果存在誤差，需要進(jìn)一步選擇組織樣本等其他檢測手段才能確診。本研究為從事臨床檢測工作技術(shù)人員提供參考。