一例豬肺炎克雷伯氏菌病的診療報告

劉海林，郭力偉

（1.新鄉(xiāng)市動物疫病預防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453003；2.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學院洛陽分院，河南洛陽 471002）

每年冬季豬呼吸道疾病較天熱季節(jié)會明顯增多。究其原因一方面是氣溫驟降、溫差大，豬受寒后引起咳嗽等疾病；另一方面，豬場冬季封閉過嚴，空氣不流通，有毒有害氣體聚集過多，刺激呼吸道黏膜，破壞黏膜屏障，這時豬舍環(huán)境中的一些條件性致病菌便會侵入豬體發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病。2019年冬季，新鄉(xiāng)市一小型養(yǎng)豬場豬發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病，發(fā)病日齡主要集中在斷奶后1周左右，常規(guī)治療無效，一直有保育豬零星散發(fā)該病。獸醫(yī)通過臨床觀察、病理剖檢、生化鑒定和PCR等多種方法，確診豬場感染豬肺炎克雷伯氏菌病，現(xiàn)將具體診療情況報告如下。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

該豬場目前存欄200頭，哺乳期仔豬、種豬和肥育商品豬一般不表現(xiàn)臨床癥狀，只有保育豬發(fā)病嚴重，發(fā)病日齡主要集中在斷奶后的1～2周。發(fā)病初期豬有咳嗽或流鼻涕癥狀，體溫達到40～41.5 ℃。發(fā)病后豬采食量下降，病情嚴重豬絕食。病程后期豬表現(xiàn)伸頸、張口呼吸，同時可見豬瞳孔放大，四肢末端、腹部和耳部皮膚出現(xiàn)發(fā)紺斑塊。使用磺胺類藥物和中藥制劑小柴胡注射液進行治療，效果不明顯。

2 病理變化

病死豬鼻腔常見有黏液或氣泡，解剖后發(fā)現(xiàn)病情嚴重豬的肺臟表面有大面積淤血和充血斑塊，膈葉病變更為明顯。肺門淋巴結(jié)腫大、充血，多呈現(xiàn)暗紫色。剪開氣管和支氣管發(fā)現(xiàn)有很多白色泡沫，一些支氣管壁發(fā)現(xiàn)有充血現(xiàn)象，個別細支氣管中可見紅色出血性泡沫，主要與肺泡毛細血管出血有關(guān)。由于肺臟大面積受損，使呼吸系統(tǒng)氣體交換效率下降，血氧含量降低，代償性地引起心臟功能增強，進而導致心包積液增多。解剖發(fā)現(xiàn)除胸腔的肺臟和心臟外，其他器官無明顯病理變化。

3 實驗室診斷

3.1 鏡檢

無菌操作，用組織鑷和剪刀采集病變典型的肺門淋巴結(jié)進行涂片，經(jīng)酒精燈火焰固定后，用革蘭氏染色法進行染色。染色涂片水洗晾干后滴香柏油進行鏡檢。發(fā)現(xiàn)視野中有大量粉紅色革蘭氏陰性球桿狀細菌，大小在0.5～0.8 μm×1～2 μm之間，單個散在或者成短鏈狀排列。

3.2 分離培養(yǎng)

無菌采集肺門淋巴結(jié)，研磨后轉(zhuǎn)移至普通肉湯，37 ℃增菌12～18 h，然后將菌液接種至MIAC瓊脂板[1]，37 ℃培養(yǎng)18～24 h。在MIAC平板的表面可見粉紅色、表面光滑、邊緣整齊、濕潤的菌落，菌落直徑2～4 mm左右，培養(yǎng)時間稍長會出現(xiàn)菌落融合現(xiàn)象。

3.3 生化鑒定

用接種環(huán)從平板培養(yǎng)基上挑選特征典型的菌落，接種到生化鑒定管中進行細菌生化鑒定，結(jié)果見表1。

3.4 病原學檢測

采用何禮洋等[2]設計的檢測肺炎克雷伯氏菌Ⅲ型菌毛蛋白基因的方法，從分子生物學角度對分離細菌進行鑒定，試驗同時用肺炎克雷伯氏菌標準菌株CMCC46117作對照。擴增所需各種試劑均購自大連寶生物工程有限公司。擴增結(jié)束后進行凝膠電泳，在凝膠成像系統(tǒng)中采集電泳照片。發(fā)現(xiàn)本次分離菌株電泳圖像與購買的克雷伯氏菌標準菌株電泳圖像均擴增出了長度為609 bp的片段。擴增出的片段與預期片段大小一致，證明本次分離到的細菌確實為肺炎克雷伯氏菌（圖1）。

圖1 肺炎克雷伯氏菌PCR電泳

4 藥敏試驗

采用紙片法對從豬體內(nèi)分離到的肺炎克雷伯氏菌進行藥物敏感性試驗，培養(yǎng)結(jié)束后用游標卡尺測量并記錄每種藥物的抑菌圈大小。經(jīng)過測量和比較發(fā)現(xiàn)，此次分離的豬源克雷伯氏菌對磷霉素最為敏感，對其它藥（如四環(huán)素、多黏菌素B、阿莫西林、環(huán)丙沙星等）表現(xiàn)明顯的耐藥性，結(jié)果見表2。

表2 克雷伯氏菌藥敏試驗結(jié)果 mm

5 防制

5.1 加強管理嚴格消毒

發(fā)病后，首先將發(fā)病豬和臨床健康豬進行隔離飼養(yǎng)，切斷傳染源。安排不同的飼養(yǎng)員飼養(yǎng)健康豬和發(fā)病豬，飼喂健康豬和發(fā)病豬的料具、飲水器具禁止交叉使用，有效切斷傳播途徑。嚴格限制人員和車輛的出入，對養(yǎng)豬場采取先清掃再消毒的措施，堅持每天進行消毒，持續(xù)兩周，消毒劑要交替使用。適當提高豬舍溫度，提高豬的舒適度，在保溫的基礎上適當通風，改善豬舍空氣質(zhì)量。

5.2 預防和治療

對臨床發(fā)病豬要及時進行隔離和治療，可通過藥敏試驗選取療效好的藥物有針對性地治療。對臨床疑似健康豬要多觀察、早發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)問題豬要及早轉(zhuǎn)移到治療圈舍。對健康豬群要做好豬瘟、高致病性藍耳病、豬圓環(huán)病毒病、豬偽狂犬病等疫病的監(jiān)測和補免工作，避免豬場再感染其它動物疫病。另外，應適當補充維生素C、B族維生素、維生素E等，選用優(yōu)質(zhì)無霉變的飼料，增加豬群的免疫力，保證豬群健康。

養(yǎng)豬場在技術(shù)人員指導下采取加強消毒、藥物治療等防控措施有效控制了該病，恢復了生產(chǎn)。

6 討論

（1）目前由于畜禽抗生素的大量使用，尤其是不按照國家的規(guī)定濫用，導致動物體內(nèi)致病菌的耐藥性越來越強，細菌性疾病治療效果越來越差，經(jīng)常篩選不到敏感性藥物。對于獸用抗生素的使用應當進一步規(guī)范管理，避免大量耐藥性細菌的產(chǎn)生。

（2）對于細菌性疾病，分離到致病菌后，最好用藥敏試驗篩選出敏感性藥物，然后有針對性地治療，這樣可以減少抗生素的濫用情況，既可以節(jié)約用藥成本，又可以減少耐藥菌的產(chǎn)生。

（3）對于動物細菌病的治療要堅持用藥1～2個療程，不要為了節(jié)約成本，發(fā)現(xiàn)病情好轉(zhuǎn)就立即停止用藥，這樣容易導致細菌殺滅不徹底，而產(chǎn)生耐藥性。

（4）隨著中國養(yǎng)殖量和養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，抗生素的使用量也越來越多，動物耐藥性細菌的產(chǎn)生也層出不窮，今后我們應當通過各種渠道對動物細菌的耐藥情況進行監(jiān)測，聯(lián)合多部門共同參與，重視動物耐藥性細菌的產(chǎn)生，科學應對耐藥性細菌造成的生物危害。