一例豬肺炎克雷伯氏菌病的診療報(bào)告

劉海林，郭力偉

（1.新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453003；2.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院洛陽分院，河南洛陽 471002）

每年冬季豬呼吸道疾病較天熱季節(jié)會(huì)明顯增多。究其原因一方面是氣溫驟降、溫差大，豬受寒后引起咳嗽等疾病；另一方面，豬場(chǎng)冬季封閉過嚴(yán)，空氣不流通，有毒有害氣體聚集過多，刺激呼吸道黏膜，破壞黏膜屏障，這時(shí)豬舍環(huán)境中的一些條件性致病菌便會(huì)侵入豬體發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病。2019年冬季，新鄉(xiāng)市一小型養(yǎng)豬場(chǎng)豬發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病，發(fā)病日齡主要集中在斷奶后1周左右，常規(guī)治療無效，一直有保育豬零星散發(fā)該病。獸醫(yī)通過臨床觀察、病理剖檢、生化鑒定和PCR等多種方法，確診豬場(chǎng)感染豬肺炎克雷伯氏菌病，現(xiàn)將具體診療情況報(bào)告如下。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

該豬場(chǎng)目前存欄200頭，哺乳期仔豬、種豬和肥育商品豬一般不表現(xiàn)臨床癥狀，只有保育豬發(fā)病嚴(yán)重，發(fā)病日齡主要集中在斷奶后的1～2周。發(fā)病初期豬有咳嗽或流鼻涕癥狀，體溫達(dá)到40～41.5 ℃。發(fā)病后豬采食量下降，病情嚴(yán)重豬絕食。病程后期豬表現(xiàn)伸頸、張口呼吸，同時(shí)可見豬瞳孔放大，四肢末端、腹部和耳部皮膚出現(xiàn)發(fā)紺斑塊。使用磺胺類藥物和中藥制劑小柴胡注射液進(jìn)行治療，效果不明顯。

2 病理變化

病死豬鼻腔常見有黏液或氣泡，解剖后發(fā)現(xiàn)病情嚴(yán)重豬的肺臟表面有大面積淤血和充血斑塊，膈葉病變更為明顯。肺門淋巴結(jié)腫大、充血，多呈現(xiàn)暗紫色。剪開氣管和支氣管發(fā)現(xiàn)有很多白色泡沫，一些支氣管壁發(fā)現(xiàn)有充血現(xiàn)象，個(gè)別細(xì)支氣管中可見紅色出血性泡沫，主要與肺泡毛細(xì)血管出血有關(guān)。由于肺臟大面積受損，使呼吸系統(tǒng)氣體交換效率下降，血氧含量降低，代償性地引起心臟功能增強(qiáng)，進(jìn)而導(dǎo)致心包積液增多。解剖發(fā)現(xiàn)除胸腔的肺臟和心臟外，其他器官無明顯病理變化。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 鏡檢

無菌操作，用組織鑷和剪刀采集病變典型的肺門淋巴結(jié)進(jìn)行涂片，經(jīng)酒精燈火焰固定后，用革蘭氏染色法進(jìn)行染色。染色涂片水洗晾干后滴香柏油進(jìn)行鏡檢。發(fā)現(xiàn)視野中有大量粉紅色革蘭氏陰性球桿狀細(xì)菌，大小在0.5～0.8 μm×1～2 μm之間，單個(gè)散在或者成短鏈狀排列。

3.2 分離培養(yǎng)

無菌采集肺門淋巴結(jié)，研磨后轉(zhuǎn)移至普通肉湯，37 ℃增菌12～18 h，然后將菌液接種至MIAC瓊脂板[1]，37 ℃培養(yǎng)18～24 h。在MIAC平板的表面可見粉紅色、表面光滑、邊緣整齊、濕潤(rùn)的菌落，菌落直徑2～4 mm左右，培養(yǎng)時(shí)間稍長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)菌落融合現(xiàn)象。

3.3 生化鑒定

用接種環(huán)從平板培養(yǎng)基上挑選特征典型的菌落，接種到生化鑒定管中進(jìn)行細(xì)菌生化鑒定，結(jié)果見表1。

3.4 病原學(xué)檢測(cè)

采用何禮洋等[2]設(shè)計(jì)的檢測(cè)肺炎克雷伯氏菌Ⅲ型菌毛蛋白基因的方法，從分子生物學(xué)角度對(duì)分離細(xì)菌進(jìn)行鑒定，試驗(yàn)同時(shí)用肺炎克雷伯氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC46117作對(duì)照。擴(kuò)增所需各種試劑均購自大連寶生物工程有限公司。擴(kuò)增結(jié)束后進(jìn)行凝膠電泳，在凝膠成像系統(tǒng)中采集電泳照片。發(fā)現(xiàn)本次分離菌株電泳圖像與購買的克雷伯氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株電泳圖像均擴(kuò)增出了長(zhǎng)度為609 bp的片段。擴(kuò)增出的片段與預(yù)期片段大小一致，證明本次分離到的細(xì)菌確實(shí)為肺炎克雷伯氏菌（圖1）。

圖1 肺炎克雷伯氏菌PCR電泳

4 藥敏試驗(yàn)

采用紙片法對(duì)從豬體內(nèi)分離到的肺炎克雷伯氏菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，培養(yǎng)結(jié)束后用游標(biāo)卡尺測(cè)量并記錄每種藥物的抑菌圈大小。經(jīng)過測(cè)量和比較發(fā)現(xiàn)，此次分離的豬源克雷伯氏菌對(duì)磷霉素最為敏感，對(duì)其它藥（如四環(huán)素、多黏菌素B、阿莫西林、環(huán)丙沙星等）表現(xiàn)明顯的耐藥性，結(jié)果見表2。

表2 克雷伯氏菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果 mm

5 防制

5.1 加強(qiáng)管理嚴(yán)格消毒

發(fā)病后，首先將發(fā)病豬和臨床健康豬進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，切斷傳染源。安排不同的飼養(yǎng)員飼養(yǎng)健康豬和發(fā)病豬，飼喂健康豬和發(fā)病豬的料具、飲水器具禁止交叉使用，有效切斷傳播途徑。嚴(yán)格限制人員和車輛的出入，對(duì)養(yǎng)豬場(chǎng)采取先清掃再消毒的措施，堅(jiān)持每天進(jìn)行消毒，持續(xù)兩周，消毒劑要交替使用。適當(dāng)提高豬舍溫度，提高豬的舒適度，在保溫的基礎(chǔ)上適當(dāng)通風(fēng)，改善豬舍空氣質(zhì)量。

5.2 預(yù)防和治療

對(duì)臨床發(fā)病豬要及時(shí)進(jìn)行隔離和治療，可通過藥敏試驗(yàn)選取療效好的藥物有針對(duì)性地治療。對(duì)臨床疑似健康豬要多觀察、早發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)問題豬要及早轉(zhuǎn)移到治療圈舍。對(duì)健康豬群要做好豬瘟、高致病性藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒病、豬偽狂犬病等疫病的監(jiān)測(cè)和補(bǔ)免工作，避免豬場(chǎng)再感染其它動(dòng)物疫病。另外，應(yīng)適當(dāng)補(bǔ)充維生素C、B族維生素、維生素E等，選用優(yōu)質(zhì)無霉變的飼料，增加豬群的免疫力，保證豬群健康。

養(yǎng)豬場(chǎng)在技術(shù)人員指導(dǎo)下采取加強(qiáng)消毒、藥物治療等防控措施有效控制了該病，恢復(fù)了生產(chǎn)。

6 討論

（1）目前由于畜禽抗生素的大量使用，尤其是不按照國家的規(guī)定濫用，導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)致病菌的耐藥性越來越強(qiáng)，細(xì)菌性疾病治療效果越來越差，經(jīng)常篩選不到敏感性藥物。對(duì)于獸用抗生素的使用應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步規(guī)范管理，避免大量耐藥性細(xì)菌的產(chǎn)生。

（2）對(duì)于細(xì)菌性疾病，分離到致病菌后，最好用藥敏試驗(yàn)篩選出敏感性藥物，然后有針對(duì)性地治療，這樣可以減少抗生素的濫用情況，既可以節(jié)約用藥成本，又可以減少耐藥菌的產(chǎn)生。

（3）對(duì)于動(dòng)物細(xì)菌病的治療要堅(jiān)持用藥1～2個(gè)療程，不要為了節(jié)約成本，發(fā)現(xiàn)病情好轉(zhuǎn)就立即停止用藥，這樣容易導(dǎo)致細(xì)菌殺滅不徹底，而產(chǎn)生耐藥性。

（4）隨著中國養(yǎng)殖量和養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，抗生素的使用量也越來越多，動(dòng)物耐藥性細(xì)菌的產(chǎn)生也層出不窮，今后我們應(yīng)當(dāng)通過各種渠道對(duì)動(dòng)物細(xì)菌的耐藥情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，聯(lián)合多部門共同參與，重視動(dòng)物耐藥性細(xì)菌的產(chǎn)生，科學(xué)應(yīng)對(duì)耐藥性細(xì)菌造成的生物危害。