子宮內膜癌組織中血管緊張素（1-7）及線粒體組裝受體水平表達與臨床病理特征的相關性

陳麗華,朱婕曼,劉玉鳳,劉 浩,馬春星,張 凡,劉云春(河北北方學院附屬第一醫(yī)院.婦產科；.病理科，河北張家口075061)

絕經后女性是子宮內膜癌的高發(fā)群體，患者多并發(fā)高血壓、糖尿病等基礎疾病，且部分患者因早期無癥狀而未能及時治療干預，給患者治療帶來困難，成為短期預后不良的誘因。糖鏈抗原125（cancer antigen 125，CA125）、糖類抗原199(carbohydrate antigen199，CA199)等腫瘤標記物在子宮內膜癌早期診斷與預后判斷中的價值已被臨床多次報道，但CA125，CA199 亦可在子宮內膜異位癥、盆腔炎癥及卵巢癌等患者中出現(xiàn)異常表達，這使其判斷患者短期預后的特異性價值有所局限。血管緊張素（1-7）[angiotensin-（1-7），Ang-（1-7）]與受體阻斷藥（Ang Ⅱ）均屬腎素-血管緊張素系統(tǒng)具有多功能的活性肽，有研究表明，腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin‐angiotensinsystem，RAS）是一種調節(jié)系統(tǒng)，能調節(jié)水鈉平衡、體液平衡等，在調節(jié)體內平衡和正常生理功能中起著重要作用[1-2]。其不僅存在于循環(huán)系統(tǒng)中，還存在于心、腎、腦、子宮等許多其他器官中[3]。本研究旨在探討Ang-（1-7）及其MasR 受體在子宮內膜癌臨床治療及患者預后等方面的價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取我院2017年4月～2019年4月手術切除的78例子宮內膜癌組織，經病理確診均為子宮內膜癌。患者年齡35～73歲，平均年齡52.73±19.45歲，體重指數(shù)20.25±2.36kg/m2，其中絕經有57例，未絕經有33例，40例并發(fā)高血壓，27例并發(fā)糖尿病，23例并發(fā)子宮肌瘤，并收集同時期32例子宮內膜不典型增生患者子宮內膜組織及16例正常子宮內膜組織作為對照，所有患者術前均未進行化療。本研究獲得我院倫理委員會批準。納入標準：①患者均簽署知情同意書；②患者均在宮腔鏡下穿刺活檢后證實為子宮內膜癌。排除標準：①嚴重肝腎疾病者；②自身免疫系統(tǒng)缺陷者；③并發(fā)有其他原發(fā)性惡性腫瘤者。見表1。

表1 各組研究對象一般資料比較（±s）

表1 各組研究對象一般資料比較（±s）

類 別 子宮內膜癌組(n=78) 子宮不典型增生組(n=32) 正常子宮組織組(n=16) F/Z P年齡(歲) 52.73±19.45 51.61±19.32 49.27±18.69 75.142 0.946體重指數(shù)（kg/m2） 20.25±2.36 20.31±3.21 20.24±1.96 24.213 0.266宮腔深度(mm) 7.25±2.47 7.02±2.65 7.13±2.52 35.123 0.735孕次 2 2 2-0.526 0.615

1.2 儀器與試劑 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，試劑盒購自美國Adlitteram Diagnostic Laboratories 公司，酶標儀為澳大利亞anthos 2010型，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 方法 ELISA檢測Ang-（1-7）,將新鮮冷凍子宮內膜組織在預冷氯化鈉注射液中多次洗滌，稱取0.2g，然后依次加入氯化鈉注射液和甲基磺酰氟（Phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF）。組織凈重（G）∶0.9g/L 氯化鈉注射液（M1）∶PMSF（BT1）=1∶10∶100。超聲勻漿至透明無顆粒狀。在4℃下于1 2000g 離心5 min，取上清液。Wstern blot檢測MasR 受體的蛋白表達,將子宮內膜組織超聲勻漿成透明無顆粒狀，離心后取上清液。將30g總蛋白加入15g/L的SDS 聚丙烯酰胺凝膠混合電泳，在PVDF 膜上印跡，用5g/L 脫脂牛奶密封1h，抗MasR 一級抗體（1∶1 000）4℃孵育過夜。TBST 膜清洗3次，每次10 min，然后與辣根過氧化物酶標記的次級抗體在室溫下孵育1h。用TBST沖洗薄膜3次，然后顯影。使用QuantityOne 軟件進行灰度分析。

1.4 統(tǒng)計學分析 統(tǒng)計分析使用SPSS 18.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據分析，子宮內膜組織及子宮內膜癌組織中Ang-(1-7)和MasR表達水平差異采用單因素方差分析（F檢驗）,計量資料采用均數(shù)±標準差(±s)表示，陽性率采用百分比表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三組患者Ang-（1-7），MasR陽性率比較 子宮內膜癌組、不典型增生組與正常子宮組織組Ang-（1-7）陽性率分別為56（71.79%），12（37.50%），2（12.50%）；陰性率為22（28.20%），20（62.50%），14（87.50%），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=11.506，P=0.000）。MasR陽性率分別為51（65.38%），11（34.38%），1（6.25%）；陰性率為27（34.62%），21（65.62%），15（93.75%），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=8.619，P=0.002）。

2.2 三組患者Ang-（1-7），MasR組織內表達結果 見表2。與不典型增生組織和正常組織相比，子宮內膜癌組Ang-（1-7）和MasR表達顯著增高（P<0.05）。

表2 三組Ang-（1-7），MasR組織內表達結果（±s）

表2 三組Ang-（1-7），MasR組織內表達結果（±s）

項 目 子宮內膜癌組（n=78） 不典型增生組（n=32） 正常子宮組織組（n=32） F p Ang-（1-7）（μg/L） 1.35±0.23 0.78±0.15 0.45±0.08 45.323 <0.05 MasR（μg/L） 2.43±0.83 0.87±0.56 0.78±0.23 76.238 <0.05

2.3 Ang-（1-7），MasR的表達與子宮內膜癌臨床病理特征的關系 見表3。Ang-（1-7），MasR表達在不同TNM 病理分期、不同分化程度及有無轉移子宮內膜癌患者中差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.05）。

表3 Ang-（1-7），MasR的表達與子宮內膜癌臨床病理特征的關系

3 討論

絕經后女性是子宮內膜癌的高發(fā)群體，患者多并發(fā)高血壓、糖尿病等基礎疾病，且部分患者因早期無癥狀而未能及時治療干預，成為短期預后不良的誘因[4-5]。因而，對患者預后影響因素進行研究可為臨床治療提供參考。CA125，CA199 等腫瘤標記物在子宮內膜癌早期診斷與預后判斷中的價值已被臨床多次報道，但CA125，CA199 亦可在子宮內膜異位癥、盆腔炎癥及卵巢癌等患者中出現(xiàn)異常表達，這使其判斷患者短期預后的特異性價值有所局限[6-8]。

Ang-（1-7）與Ang Ⅱ均屬腎素-血管緊張素系統(tǒng)具有多功能的活性肽，侯智為等[9]動物實驗證實Ang Ⅱ可促進血管內皮生長因子表達而加快子宮內膜癌腫瘤血管生長，還有基礎研究顯示Ang Ⅱ可通過調節(jié)轉化生長因子β 和c-myc 基因參與腫瘤增殖[10]。而Ang-(1-7)是Ang Ⅱ拮抗因子，Ang-(1-7)可能通過抑制Ang Ⅱ達到抑制腫瘤增殖的作用。另外，Ang-(1-7)可抑制子宮內膜上皮細胞分化，誘導異常增生的腫瘤細胞凋亡，其作用具有劑量依賴性[11]。MasR 對Ang-(1-7)可發(fā)揮傳遞效應，并可調節(jié)Ang Ⅱ表達，達到調控子宮內膜組織生長作用[12]。因而，MasR 在子宮內膜癌組織中表達與Ang-(1-7)一致，本研究發(fā)現(xiàn)子宮內膜癌組Ang-（1-7）及MasR陽性率均高于子宮內膜不典型增生組和正常子宮組織組，說明子宮內膜組織Ang-（1-7）及MasR陽性率高表達可能提示患者預后不良。

我們還發(fā)現(xiàn)，MasR表達上調，VEGF和MVD也上調。VEGF是一種功能強、特異性高的可溶性血管生成啟動因子，與腫瘤生長、侵襲和轉移具有密切的相關性[13-14]。SEKI 等[15]發(fā)現(xiàn)子宮內膜癌細胞可分泌VEGF，促進血管生成，淋巴管浸潤區(qū)高于非淋巴管浸潤區(qū)，與MVD 一起對患者生存率有顯著影響。MVD 作為腫瘤血管生成定量分析的指標，能清楚地反映其浸潤轉移能力[16]。SALVESEN等[17]對60例子宮內膜癌患者進行了平均19年的隨訪調查,發(fā)現(xiàn)子宮內膜癌中MVD 與腫瘤分級、肌層浸潤及淋巴管脈管浸潤具有相關性，是子宮內膜癌的獨立預后因素。本次實驗表明MasR表達上調、VEGF表達上調和MVD 升高呈正相關，證明AngII 可能通過MasR 增加VEGF的分泌達到促進子宮內膜癌間質新生血管形成的作用。

綜上所述，MasR 在子宮內膜癌中表達上調與病理分期、分化程度及有無轉移等因素具有密切的相關性，且MasR，VEGF水平表達上調和MVD水平升高呈正相關，提示MasR 可能參與了子宮內膜癌的發(fā)生發(fā)展，而MasR表達的上調促進了子宮內膜癌細胞的生長和血管生成，可能成為判斷子宮內膜癌預后的一個指標。而Ang-(1-7)可能通過抑制Ang Ⅱ達到抑制腫瘤增殖作用，Ang-(1-7)還可抑制子宮內膜上皮細胞分化，誘導異常增生的腫瘤細胞死亡，且MasR 對Ang-(1-7)可發(fā)揮傳遞效應，并可調節(jié)Ang Ⅱ表達，達到調控子宮內膜組織生長作用。因此，Ang-（1-7）和MasR的表達與子宮內膜癌患者的預后密切相關，為臨床診斷及治療提供了新的治療靶向，值得臨床進一步推廣應用。