食管癌組織中lnc RNA DNAJC3-AS1的表達及其與臨床病理特征的相關性研究

梁曉虎，雷尚昆，郭俊霞(1.寶雞市人民醫院 a.胸外腫瘤外科；b.胸外科，陜西寶雞 71000；.寶雞市中心醫院全科醫學科，陜西寶雞 71008）

食管癌(esophageal cancer,EC)是消化道常見的惡性腫瘤[1-3]，預后較差[4-6]，嚴重危害人類健康。我國是EC的高發國家，也是世界上EC 新發病例最多的國家[7-8]。近年來研究表明，長鏈非編碼RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)的表達異常與多種疾病有關，尤其在腫瘤中扮演重要角色。因此，確定腫瘤相關的lncRNA 并且深度解析其生物學功能對闡明腫瘤的發生、發展至關重要。lnc RNADNAJC3-AS1位于染色體13q32.1，含有2個外顯子，已有報道指出lnc RNADNAJC3-AS1 與骨肉瘤[9]和乳腺癌[10]密切相關。關于lnc RNADNAJC3-AS1 與EC的關聯研究鮮有報道，本研究擬分析EC組織中lnc RNA DNAJC3-AS1的表達及其與臨床病理特征的相關性，旨在為EC的臨床診療提供合理參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2017年6月～2019年5月寶雞市中心醫院全科醫學科收集的246例EC患者的腫瘤組織及相應的癌旁正常組織(距離原發灶＞5cm)為研究對象，取材后用液氮保存并標記。患者均為食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)，手術前未行免疫治療、放化療等抗腫瘤治療。其中，男性180例，女性66例；年齡33～75歲，平均年齡54.9±13.1歲。本研究經由我院倫理委員會批準，患者自愿參加且均簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑 逆轉錄試劑盒(日本TAKARA公司)，ABI7500 PCR 儀(美國ABI)，Sybr Green熒光染料(日本TAKARA 公司)。

1.3 方法 從液氮中取適量EC組織標本，充分研磨后，用Trizol 法抽提總RNA，逆轉錄試劑盒將RNA 逆轉錄為相應的cDNA，用pfimer 5 軟件設計引物，引物設計如下：正向引物5’-TTGCTCT AAGGCAGGTAGGTAA-3’；反向引物：5’-GGG TCTTCCACAATCGCTCT-3’。與Sybr Green 熒光染料配置，使用PCR 儀進行實驗，qPCR Mix選用ABI 公司配套的Master Mix，反應體系根據其說明書配置。結果采用2-ΔΔCt法進行分析，使用GAPDH 作為內參。當lnc RNA DNAJC3-AS1在腫瘤組織中的相對表達量高于相應的癌旁正常組織則為高表達，反之為低表達。

1.4 統計學分析 采用SPSS 19.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料以n(%)表示，采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，以均數±標準差（±s）表示。采用K-M 法繪制EC患者生存曲線，用log-rank檢驗lnc RNA DNAJC3-AS1表達水平與患者總體生存率(overall survival，OS)的關系。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 lnc RNA DNAJC3-AS1 在EC腫瘤組織及相應癌旁正常組織中的相對表達量 見圖1。lnc RNA DNAJC3-AS1 在EC腫瘤組織中的相對表達量高于相應癌旁正常組織(0.008 9±0.020 3 vs 0.004 9±0.010 4，P=0.000 8)。

圖1 lnc RNA DNAJC3-AS1 在EC腫瘤組織及相應癌旁正常組織中的相對表達量

2.2 lnc RNA DNAJC3-AS1表達水平與EC患者臨床特征間的關系 見表1。依據2.1的結果，根據lnc RNA DNAJC3-AS1表達水平的不同將患者分為高表達組和低表達組，每組各123例。lnc RNA DNAJC3-AS1表達水平與EC患者飲酒史(χ2=25.07，P<0.001)、家族腫瘤史χ2=4.73，P=0.047)、BMI指數(χ2=16.94，P<0.001)、臨床分期(χ2=33.39，P<0.001)、是否原位癌(χ2=11.97，P=0.001)、是否淋巴結轉移(χ2=19.01，P<0.001)、是否遠端轉移(χ2=16.65，P<0.001) 和腫瘤類型(χ2=9.17，P=0.010)顯著相關。

2.3 lnc RNA DNAJC3-AS1表達水平與EC患者總體生存率的關系 見圖2。使用Kaplan-Meier法進行生存分析結果顯示，lnc RNA DNAJC3-AS1 低表達組患者的中位生存時間為34.0個月，高表達組患者的中位生存時間為17.0個月。lnc RNA DNAJC3-AS1 高表達組患者的OS 低于lnc RNA DNAJC3-AS1 低表達組(χ2=20.93，P<0.001)。

圖2 lnc RNA DNAJC3-AS1表達水平與EC患者OS的關系

表1 不同臨床特征研究對象lnc RNA DNAJC3-AS1表達水平差異性分析[n=123，n (%)]

3 討論

食管是癌癥的常見發病部位，EC是全球排名第6位的癌癥死因。EC 預后較差，對人類健康危害嚴重。近年來研究指出lncRNAs 在EC的發生、發展中扮演重要角色[11-12]，lnc RNA DNAJC3-AS1位于染色體13q32.1，含有2個外顯子，其與DNAJC3是同源靶基因。有報道指出，在骨肉瘤組織中高表達并與骨肉瘤的分化程度、臨床進展密切相關，其能提高骨肉瘤體內外的細胞增殖、遷移和侵襲能力，并降低對順鉑的藥物敏感性。另外lnc RNA DNAJC3-AS1 在乳腺癌中高表達且其高表達能縮短乳腺癌患者生存期。目前，關于lnc RNADNAJC3-AS1 與EC的關聯研究鮮有報道。

本研究結果顯示，lnc RNA DNAJC3-AS1 在EC腫瘤組織中高表達，并且高表達lnc RNA DNAJC3-AS1 患者的OS 較低，這就說明了lnc RNA DNAJC3-AS1是EC的潛在生物標志物，其表達水平的升高會對EC患者的OS 帶來消極影響。分析lnc RNA DNAJC3-AS1表達水平與EC患者臨床病理特征間的關系，結果表明lnc RNA DNAJC3-AS1表達水平與患者飲酒史、家族腫瘤史、BMI指數、臨床分期、T，N，M 等相關。

EC的組織學類型分為ESCC 和EAC，本研究納入的對象均是ESCC患者，并未涉及EAC患者，因此關于lnc RNA DNAJC3-AS1 與EAC的關聯仍未闡明，值得深入探究和分析。