羊痘綜合防治措施

郝良玉，郭衍冰，呼延含蓉，程榮華，劉沂霖，李昱潔，姚新華，王改麗*

1.吉林省畜牧獸醫科學研究院，吉林長春 130062；2.吉林省動物疫病預防控制中心，吉林長春 130062；3.吉林省畜牧業管理局，吉林長春 130000

羊痘是由羊痘病毒感染山羊、綿羊等動物的急性、接觸性傳染性疾病，包括山羊痘、綿羊痘和疙瘩皮膚病。羊痘病毒屬包括山羊痘病毒、綿羊痘病毒和疙瘩皮膚病病毒。

在我國，羊痘又名羊“天花”，被列為一類重大傳染性動物疾病，其傳播快、發病高，不同品種、性別、年齡的羊均可感染，老年羊、哺乳期母羊、羔羊尤其新生羔羊更易感染，羊群的集中飼養不利于疫病防控，該病傳播至無病例地區則易造成大流行，羊痘的流行給附近養羊戶造成嚴重經濟損失的同時也阻礙了養羊業和羊副產品貿易發展，故而在輸入輸出羊只時需加強檢測。

1 臨床表現

因羊痘病毒具有親上皮特性，病毒粒子主要存在于病羊皮膚和黏膜處，且血液和口鼻分泌物中也含有病毒。臨床上常以病羊無毛或少毛處皮膚和黏膜上出現典型痘疹為特征。病羊發病初期體溫升高至39.5～41.5 ℃，部分病羊呆立或臥地不起，主要癥狀有食欲削減甚至停止，精神萎靡不振，眼結膜出現潮紅，從鼻孔流出漿液性、黏液性或膿性分泌物，呼吸及脈搏加速；病羊皮膚出現豆粒大小的紅斑，形成凸出皮膚的硬實丘疹，逐漸發展為結節、水皰或膿瘡，浸潤成片的疹塊幾天后開始脫落，部分羊病變部位疹塊相互融合，病羊隨病程延長呼吸愈發困難，加速死亡[1]。

若體況不佳、飼養管理差或出現繼發感染可導致病羊死亡，懷孕母羊患病后流產概率極高，新生羔羊染病后易死亡，同時受感染羊群整體生產力大大下降，毛皮品質隨之降低；若加強飼養管理，進行有效的對癥治療，可避免出現繼發感染，病羊痊愈后可產生永久免疫力，重復感染率為零。

2 分子生物學特性

山羊痘病毒和綿羊痘病毒基因組約有150 kb，二者十分相似，約有96%的核苷酸完全相同。同大多數痘病毒一致，羊痘病毒是線性、雙股DNA基因組[2]，分子質量約為(130×103)～(240×106)ku,由中間編碼區和兩端相同的反向互補序列構成，中心區包含所有保守序列的同源序列，內含病毒復制基因編碼的必需因子，參與病毒轉錄、逆轉錄、病毒DNA復制、病毒粒子的構建和裝配等過程。雖然山羊痘病毒和綿羊痘病毒具有較強特異性，分別只感染山羊和綿羊，但在實際生產生活中兩者定義并不十分清晰，國內已有山羊痘和綿羊痘混合感染案例報道，這也增加了防控及治療羊痘的難度。

3 P32蛋白特性

早期研究者對羊痘病毒結構蛋白進行分析時，發現一種能與山羊痘陽性血清特異性結合的蛋白，因分子質量為32 ku，故將其命名為 P32蛋白。進一步研究證實，SPPV和GTPV的P32蛋白與牛痘病毒晚期H3L基因編碼的P35蛋白具有同源性，晶體結構相似，是目前分離鑒定羊痘病毒株中共有且特異性強的膜結構蛋白。P32蛋白也是羊痘病毒特有的囊膜結構蛋白，具有混合的α螺旋和β折疊結構，全長較難表達純化[3]。作為典型的膜囊蛋白，P32蛋白在病毒感染早期即可刺激機體產生抗體，同時具有抗原特異性，由此引起研究者的廣泛關注。P32蛋白可誘導機體產生強烈的細胞免疫，常作為靶標進行疫苗研究和診斷試劑開發。

K.Sumana等人對25次綿羊痘和山羊痘疫情中的28株分離毒株進行了系統發育分析，通過多位點序列分析P32基因結果表明，LSDV與SPPV的親緣關系比GTPV更密切。SPPV和GTPV分離毒株中各基序具有穩定的保守結構和結合模式，如糖胺聚糖(GAG)、趨化因子(CX3C)，以及病毒特異性標記殘基；另外，該研究團隊以P32受體蛋白為基礎，采用硫酸肝素和UDP-葡萄糖進行同源建模和對接，研究發現參與病毒附著的硫酸肝素具有保守的結合模式，并且糖基轉移酶與UDP-葡萄糖的折疊度不同，這個發現可能有助于開發針對其他痘病毒的疫苗及建立相應診斷和治療方法。

以重組P32蛋白為抗原的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)被廣泛用于羊痘血清學診斷。成偉偉等人[4]將含有GST標簽的重組P32蛋白表達純化后免疫小鼠，結果發現該蛋白能夠刺激機體產生較強體液免疫及細胞免疫，表明P32蛋白具有良好的免疫原性，可作為診斷抗原對羊痘病毒血清抗體進行監測，同時高效表達P32蛋白對研究該蛋白功能及羊痘疫苗研制具有重大意義。

4 常用診斷方法

PCR技術利用某段DNA為模板，通過變性、復性、延伸等步驟在聚合酶和核苷酸底物共同參與下對該段DNA序列進行大量擴增，是研究疾病感染過程發生、發展及轉歸的一種重要手段。多重PCR分析具備所需樣品量較少、消除移液等操作誤差、一個反應可設內部對照等優勢。Ya等人建立了一種能夠同時檢測山羊、綿羊6種DNA和RNA病毒的多重PCR方法，包括口蹄疫病毒(FMDV)、藍舌病病毒(BTV)、小反芻動物害蟲病毒(PPRV)、綿羊痘病毒(SPPV)、山羊痘病毒(GTPV)和羊傳染性膿皰病毒(ORFV)。該方法對待檢樣品中一種或多種病毒均具有較高敏感性和特異性，通過一個PCR反應程序從六種病毒混合物中檢測到至少100 pg病毒基因組DNA或RNA，可用于綿羊、山羊DNA和RNA病毒混合感染的臨床診斷，為同時診斷綿羊和山羊6種病毒性疾病提供了方法。

實時熒光定量PCR方法是指在PCR反應體系中加入熒光基團，每經一輪循環便檢測并記錄熒光信號強度，進而達到實時監測PCR進程的目的，通過標準曲線對未知模板進行定量分析，具有靈敏度高、特異性強、高效簡便等優點。理論上樣品中只要有一個病原體存在，該方法就可以檢測到，其檢測限度最低可達10拷貝，通常2～3 h即可得出結果。雜交探針、染料與實時定量PCR技術相結合，可提高檢測效率、增強檢測靈敏度和特異性，也可實現一個反應同時檢測多個目標基因。G.Venkatesan等人建立了一種基于TaqMan的雙鏈探針實時熒光PCR檢測方法，使用兩對寡核苷酸引物和分別用Cy5/BHQ1和Hex/BHQ1標記的CaPV和ORFV雜交探針，其標準質粒的檢測限度為20拷貝，CaPV和ORFV病毒基因組DNA的檢出限為35 fg，該方法僅對靶向病毒具有特異性，對其它的羊常見傳染病病毒無反應，檢測結果組間差異極低、具有高度重復性。

G.Venkatesan等人以羊痘DNA聚合酶基因為靶點建立了一種環介導等溫擴增（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）檢測方法，該LAMP方法檢出率高于常規PCR方法，在檢測限度和準確度上能夠媲美熒光定量PCR，同時該方法不需要熱循環階段，極大地縮短了操作時間，可實現現場臨床病例的快速診斷和疫病監測。

5 預防及疫苗免疫措施

目前，尚無針對羊痘的特效治療藥物，主要通過以下方法進行預防控制。

5.1 飼養管理

羊痘病毒對乙醚和氯仿敏感、耐熱性低，平時加強飼養管理，有針對性噴灑消毒劑，維持圈舍整潔衛生。冬季防寒保暖，夏季防高溫滅蚊蠅，加強營養提高羊群抗病能力。

5.2 預防接種

30日齡后用羊痘活疫苗每頭份經0.5 mL生理鹽水稀釋后，在尾巴根內側或股內側進行皮內注射接種，定期強化免疫。

6 結語

羊養殖業是我國重要的畜牧產業之一，其低投入、周期短、效益高的特點使之成為廣受養殖戶喜愛的產業。而羊類疾病一旦出現病例則會快速在同群中傳播，只有盡早做好預防免疫，在疾病初期早發現才能減少損失，建立行之有效的快速檢測手段成為科研人員不懈努力的方向。