豬圓環病毒血清學診斷研究進展

王玉珍，王 珺，張同鑫，劉 曄，盧松巖

1.吉林省動物疫病預防控制中心，吉林長春 130062；2.長白朝鮮族自治縣動物疫病預防控制中心，吉林長白 134400；3.長春市雙陽區畜牧總站，吉林長春 130600；4.吉林市船營區畜牧獸醫科學研究會，吉林吉林市 132012

1 發病機制

PCV顆粒存在于患病豬的呼吸系統以及消化代謝器官中。其中，淋巴結、肺臟、脾臟檢測率高，患豬體況下降，免疫系統被侵傷，由于免疫抑制過度會導致免疫缺陷，因此病原性較低或致病性較低的疫苗接觸健康豬后容易發生畜群患病；反復發病久治不愈，接種疫苗無免疫，同窩仔豬死亡數目增多，豬表現為多種疾病復合的臨床癥狀，這些疾病的臨床表現均與PMWS相同。淋巴細胞數量缺失，巨噬細胞發生透滲，這與B和T細胞減少和細胞在淋巴器官流失相關。

2 流行病學

我國最早在2001年發現該病，種豬存在高感染率。5～16周齡的豬易發病，6～8周的豬為易感高發年齡，極少感染小于5周齡的豬。通常，仔豬發病是在其斷奶后的第2天或第3天，也有部分仔豬一周后發病。由于存在繼發疾病或同時存在并發的細菌或病毒感染，死亡率通常可達25%或更高。PCV多為垂直感染，其母體在懷孕感染后，經胚胎對仔豬進行病毒傳播，并致其患有繁殖障礙病。

PCV在世界各地都很流行且存在已感染的豬并不呈現明顯的PMWS相關癥狀。在中國的部分地區，抽樣檢測出生20 d的未經過斷奶的仔豬，檢測陽性率為0，而其它年齡均存在檢出率且產后母豬高達80%以上。臨床癥狀可持續數月，在6～12個月之內達到峰值后，再慢慢回降。新出生仔豬體內存在母源PCV抗體，當仔豬在11～13周齡被轉移到育肥圈混養時，再次暴露于可能存在PCV的環境中，PCV抗體將再次出現。

3 臨床癥狀與病理變化

第一類PMWS中常見臨床癥狀是厭食、體重減輕、精神低下、行動遲緩、膚色慘白、毛皮暗沉，呼吸急促和咳嗽，也可能出現糞便樣稀和中樞神經系統疾病。淺淋巴結腫大，經表皮按壓有明面異物感。第二類臨床癥狀是先天性顫抖且震顫嚴重程度不等，一窩豬中的感染數量也各不相同。由于一周內沒有得到及時的母乳喂養，嚴重的病態仔豬常死于饑餓。但是，在患病后仍能存活1周的病豬就可以在3周齡時存活并恢復健康。PCV常見混合感染的有PRRSV、PRV、PPV、PEDV、SIV、肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌。病死率大幅度上升，感染后死亡率可達25%～40%。

PMWS的剖檢病變表現為消瘦、缺血和黃疸；淋巴內臟腫大，是正常組織體積的3倍以上，切割表面呈白色且顏色均勻；肺中出現褐灰色炎癥，較正常的肺組織顏色偏深，伴隨發炎和水腫，呈現彌漫性損傷，觸感猶如堅硬的橡皮；肝顏色發暗，呈現或深或淺的黃色，肝小葉間結締組織減少；腎體積變大腫脹，伴隨壞死灶；脾臟腫脹，觸感似生肉；胰腺腫脹、壞死；腎不同程度多焦間質性腎炎。

4 血清學檢測方法

4.1 免疫過氧化物酶單層試驗（IPMA）

Dulac等提出IPMA，是用有PCV的PK-15細胞在斷層血清過程中用96孔板生長。同IFA原理相同，不同在于二者二抗標記物不同，加底物3-氨基-9-乙基昨哩(AEC)顯色，生成紅色沉淀可直接觀察。主要在PAM、Marc-145等細胞上進行IPMA，抗體6 d分離，在4、6周檢測時，試驗數據達到最高值并可持續長達6～12個月，劉昌明等人探究開發出的IPMA抗體檢測方法具有特異性強、靈敏度高等特點。但需要專業的實驗設備，不能直接顯示實驗結果，可能有假陽性結果出現。

4.2 間接熒光抗體實驗（IFA）

IFA操作簡單，投入成本低，PCV2感染的細胞及病變組織是主要檢測樣本。把病畜或待檢的細胞、組織進行實驗室冷凍切片，用藥品丙酮試劑進行固定，加特異性單抗，洗滌后加熒光二抗，洗滌晾干，熒光顯微觀察。如出現熒光，說明感染，PCV2為陽性。在實驗中，也要添加沒有感染PCV2的正常細胞或組織進行試驗結果對比。對比試驗是該試驗成功和判定結果的重要一步，要求操作精準。

4.3 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA具有系統的模式和流程，所用試劑均可批量加工，且價格適中，研究和應用價值較高。兩種間接ELISA方法作為檢測PCV2抗體檢測的全新進展被Nawagigul等建立。第一種是利用包被抗原，其使用的原料是細胞培養物，要求是要被PCV2感染。第二種是重組桿狀病毒表達的蛋白質，要求與ORF2結合并進行包裝。該抗原用來檢測感染PCV2病毒的血清抗體和病毒核衣殼蛋白免疫血清，敏感性好，但該方法不能精準定位病癥，有一定局限性。

4.4 乳膠凝集試驗（LAT）

王忠用純化重組PCV-M蛋白致敏乳膠生成乳膠抗原，用LAT檢測PCV抗體。用抗體試劑盒檢測78種不同的待檢血樣，LAT的檢出率為94.6%，與試劑盒的總吻合率為86.2%，準確性及穩定性較高。LAT成本低、易操作，時效性和靈敏度高、設備要求低，結果易觀察，適合進行相關臨床的應用設計。

5 小結

隨著研究的不斷深入，對豬圓環病毒的了解也將越來越多，診斷技術亦將取得長足發展。歸納總結現有的血清學檢測技術要點，作為進一步研究的基礎，同時有助于提高檢測準確率，對豬圓環病毒病的診斷、防治和凈化具有重要意義。

參考文獻：略