豬圓環(huán)病毒血清學(xué)診斷研究進展

王玉珍，王 珺，張同鑫，劉 曄，盧松巖

1.吉林省動物疫病預(yù)防控制中心，吉林長春 130062；2.長白朝鮮族自治縣動物疫病預(yù)防控制中心，吉林長白 134400；3.長春市雙陽區(qū)畜牧總站，吉林長春 130600；4.吉林市船營區(qū)畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究會，吉林吉林市 132012

1 發(fā)病機制

PCV顆粒存在于患病豬的呼吸系統(tǒng)以及消化代謝器官中。其中，淋巴結(jié)、肺臟、脾臟檢測率高，患豬體況下降，免疫系統(tǒng)被侵傷，由于免疫抑制過度會導(dǎo)致免疫缺陷，因此病原性較低或致病性較低的疫苗接觸健康豬后容易發(fā)生畜群患病；反復(fù)發(fā)病久治不愈，接種疫苗無免疫，同窩仔豬死亡數(shù)目增多，豬表現(xiàn)為多種疾病復(fù)合的臨床癥狀，這些疾病的臨床表現(xiàn)均與PMWS相同。淋巴細胞數(shù)量缺失，巨噬細胞發(fā)生透滲，這與B和T細胞減少和細胞在淋巴器官流失相關(guān)。

2 流行病學(xué)

我國最早在2001年發(fā)現(xiàn)該病，種豬存在高感染率。5～16周齡的豬易發(fā)病，6～8周的豬為易感高發(fā)年齡，極少感染小于5周齡的豬。通常，仔豬發(fā)病是在其斷奶后的第2天或第3天，也有部分仔豬一周后發(fā)病。由于存在繼發(fā)疾病或同時存在并發(fā)的細菌或病毒感染，死亡率通常可達25%或更高。PCV多為垂直感染，其母體在懷孕感染后，經(jīng)胚胎對仔豬進行病毒傳播，并致其患有繁殖障礙病。

PCV在世界各地都很流行且存在已感染的豬并不呈現(xiàn)明顯的PMWS相關(guān)癥狀。在中國的部分地區(qū)，抽樣檢測出生20 d的未經(jīng)過斷奶的仔豬，檢測陽性率為0，而其它年齡均存在檢出率且產(chǎn)后母豬高達80%以上。臨床癥狀可持續(xù)數(shù)月，在6～12個月之內(nèi)達到峰值后，再慢慢回降。新出生仔豬體內(nèi)存在母源PCV抗體，當仔豬在11～13周齡被轉(zhuǎn)移到育肥圈混養(yǎng)時，再次暴露于可能存在PCV的環(huán)境中，PCV抗體將再次出現(xiàn)。

3 臨床癥狀與病理變化

第一類PMWS中常見臨床癥狀是厭食、體重減輕、精神低下、行動遲緩、膚色慘白、毛皮暗沉，呼吸急促和咳嗽，也可能出現(xiàn)糞便樣稀和中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。淺淋巴結(jié)腫大，經(jīng)表皮按壓有明面異物感。第二類臨床癥狀是先天性顫抖且震顫嚴重程度不等，一窩豬中的感染數(shù)量也各不相同。由于一周內(nèi)沒有得到及時的母乳喂養(yǎng)，嚴重的病態(tài)仔豬常死于饑餓。但是，在患病后仍能存活1周的病豬就可以在3周齡時存活并恢復(fù)健康。PCV常見混合感染的有PRRSV、PRV、PPV、PEDV、SIV、肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌。病死率大幅度上升，感染后死亡率可達25%～40%。

PMWS的剖檢病變表現(xiàn)為消瘦、缺血和黃疸；淋巴內(nèi)臟腫大，是正常組織體積的3倍以上，切割表面呈白色且顏色均勻；肺中出現(xiàn)褐灰色炎癥，較正常的肺組織顏色偏深，伴隨發(fā)炎和水腫，呈現(xiàn)彌漫性損傷，觸感猶如堅硬的橡皮；肝顏色發(fā)暗，呈現(xiàn)或深或淺的黃色，肝小葉間結(jié)締組織減少；腎體積變大腫脹，伴隨壞死灶；脾臟腫脹，觸感似生肉；胰腺腫脹、壞死；腎不同程度多焦間質(zhì)性腎炎。

4 血清學(xué)檢測方法

4.1 免疫過氧化物酶單層試驗（IPMA）

Dulac等提出IPMA，是用有PCV的PK-15細胞在斷層血清過程中用96孔板生長。同IFA原理相同，不同在于二者二抗標記物不同，加底物3-氨基-9-乙基昨哩(AEC)顯色，生成紅色沉淀可直接觀察。主要在PAM、Marc-145等細胞上進行IPMA，抗體6 d分離，在4、6周檢測時，試驗數(shù)據(jù)達到最高值并可持續(xù)長達6～12個月，劉昌明等人探究開發(fā)出的IPMA抗體檢測方法具有特異性強、靈敏度高等特點。但需要專業(yè)的實驗設(shè)備，不能直接顯示實驗結(jié)果，可能有假陽性結(jié)果出現(xiàn)。

4.2 間接熒光抗體實驗（IFA）

IFA操作簡單，投入成本低，PCV2感染的細胞及病變組織是主要檢測樣本。把病畜或待檢的細胞、組織進行實驗室冷凍切片，用藥品丙酮試劑進行固定，加特異性單抗，洗滌后加熒光二抗，洗滌晾干，熒光顯微觀察。如出現(xiàn)熒光，說明感染，PCV2為陽性。在實驗中，也要添加沒有感染PCV2的正常細胞或組織進行試驗結(jié)果對比。對比試驗是該試驗成功和判定結(jié)果的重要一步，要求操作精準。

4.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA具有系統(tǒng)的模式和流程，所用試劑均可批量加工，且價格適中，研究和應(yīng)用價值較高。兩種間接ELISA方法作為檢測PCV2抗體檢測的全新進展被Nawagigul等建立。第一種是利用包被抗原，其使用的原料是細胞培養(yǎng)物，要求是要被PCV2感染。第二種是重組桿狀病毒表達的蛋白質(zhì)，要求與ORF2結(jié)合并進行包裝。該抗原用來檢測感染PCV2病毒的血清抗體和病毒核衣殼蛋白免疫血清，敏感性好，但該方法不能精準定位病癥，有一定局限性。

4.4 乳膠凝集試驗（LAT）

王忠用純化重組PCV-M蛋白致敏乳膠生成乳膠抗原，用LAT檢測PCV抗體。用抗體試劑盒檢測78種不同的待檢血樣，LAT的檢出率為94.6%，與試劑盒的總吻合率為86.2%，準確性及穩(wěn)定性較高。LAT成本低、易操作，時效性和靈敏度高、設(shè)備要求低，結(jié)果易觀察，適合進行相關(guān)臨床的應(yīng)用設(shè)計。

5 小結(jié)

隨著研究的不斷深入，對豬圓環(huán)病毒的了解也將越來越多，診斷技術(shù)亦將取得長足發(fā)展。歸納總結(jié)現(xiàn)有的血清學(xué)檢測技術(shù)要點，作為進一步研究的基礎(chǔ)，同時有助于提高檢測準確率，對豬圓環(huán)病毒病的診斷、防治和凈化具有重要意義。

參考文獻：略