“消痘靈”口崩片的處方優化及內外合治藥效研究

李澤福，曹鳳媚，胡等慧

1.廣州中醫藥大學 第三附屬醫院，廣東 廣州 510378；2.北京中醫藥大學，北京 102488

“消痘靈”水煎液是廣州中醫藥大學第三附屬醫院的院內制劑，主要由金銀花、黃柏、丹參、當歸、三顆針等中藥組成。該方具有清熱燥濕、瀉火解毒、養血活血之功效，臨床上主要用于治療痤瘡等癥，其有效率高達70%左右。現代藥理研究表明，方中主藥金銀花不僅在體外對多種細菌具有明顯的抑制作用，而且還能預防再次感染；黃柏、三顆針對病毒有不同程度的抑制作用；丹參中丹參酮能明顯抑制皮脂腺的分泌，且對痤瘡丙酸桿菌高度敏感；當歸能夠通過對毛孔的收斂作用及對血管細胞活性的提升機制綜合改善皮膚質量，達到對痤瘡治療的目的[1-5]。

“消痘靈”水煎液治療痤瘡具有很好的療效，但存在攜帶、儲存不便，易霉變，患者耐受性差等缺點。相比于水煎液而言，口崩片作為一種新型速釋制劑，具有易儲存、易運輸及攜帶、服用方便、口感好、穩定等優點。同時，結合中醫“內治治本，外治治標”的理念，口服口崩片結合皮膚擦涂同時給藥，能夠實現中醫“內外同治”增強療效的目的。因此，本研究篩選“消痘靈”口崩片的處方，考察其內外合治的藥效及抑菌能力，以期為醫院制劑的創新及臨床治療提供研究思路。

1 材料

1.1 儀器

ZP33型旋轉式壓片機(海信源制藥機械有限公司)；FA2004型分析天平(上海雙旭電子科技有限公司)；FT104B型休止角測定儀(寧波海曙瑞柯儀器有限公司)；SY-6D型片劑四用測試儀(上海圣科儀器設備有限公司)。

1.2 試藥

羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，批號：171008)、交聯聚維酮XL(PVPP-XL，批號：141006)、羧甲基淀粉鈉(CMS-Na，批號：171204)、低取代羥丙基纖維素(L-HPC，批號：161003)均購自安徽山河藥用輔料股份有限公司；微晶纖維素(上海昌為醫藥輔料技術有限公司，批號：P0101F1510)；微粉硅膠(批號：171110)、硬脂酸鎂(批號：170228)均購自安徽山河藥用輔料股份有限公司；山梨醇(批號：170819)、甘露醇(批號：161222)均購自西安天正藥用輔料有限公司；金花消痤丸(昆明中藥廠有限公司，批號：271257)；中性福爾馬林固定液(10%，北京博奧拓達科技有限公司)。

金銀花、黃柏、丹參、當歸、三顆針等均為市購，經廣州中醫藥大學第三附屬醫院李澤福主管中藥師鑒定均為正品。

1.3 實驗動物

SPF級昆明種小鼠，雄性，5周齡，體質量20～25 g[合格證號：SCXK9(粵)2018-0002]購于廣東省實驗動物中心。審批單位：廣州中醫藥大學第三附屬醫院，批號：1903009。

2 方法與結果

2.1 口崩片檢測方法

2.1.1硬度測定 取5片已制備的“消痘靈”口崩片置于硬度儀中測定，取其平均值記為口崩片硬度[6]。

2.1.2崩解時限的測定 崩解時限測定方法依據《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)2015年版，以口崩片接觸水面開始，至全部顆粒通過篩網的時間止[6]。

2.1.3脆碎度測定 片劑脆碎度測定方法依據《中國藥典》2015年版，以未檢出斷裂、龜裂或粉碎片，質量減失未超過1%為合格[6]。

2.2 “消痘靈”口崩片的制備

2.2.1干膏粉的制備 稱取處方量中藥，80 ℃水提2次，合并水提液并減壓濃縮得浸膏，將適量微粉硅膠加入上述浸膏中，真空干燥得干浸膏，粉碎，過100目篩，得干浸膏粉。

2.2.2口崩片的制備 稱取上述干浸膏粉及崩解劑、填充劑、微粉硅膠、硬脂酸鎂等輔料適量，混勻，過80目篩，粉末直壓法壓片，控制片劑硬度為4～7 kg。

2.3 單因素考察

2.3.1崩解劑考察 固定干浸膏粉添加量20%，潤滑劑微粉硅膠20%、硬脂酸鎂0.5%，填充劑微晶纖維素、山梨醇各20%，片劑硬度4～7 kg，考察不同崩解劑對片劑崩解時限的影響。

結果表明，CMC-Na和CMS-Na崩解時限分別為401、323 s，不符合《中國藥典》2015年版規定。L-HPC和PVPP-XL崩解時限分別為189、180 s，崩解效果較優，符合《中國藥典》2015年版規定。考慮到生產成本，最終選用L-HPC作為崩解劑進行處方篩選。

2.3.2潤滑劑考察 固定干浸膏粉添加量20%，填充劑微晶纖維素、山梨醇，崩解劑L-HPC各20%，片劑硬度4～7 kg。考察潤滑劑微粉硅膠和硬脂酸鎂對粉末流動性、片劑粘沖程度及崩解時限的影響，結果見表1。

表1 不同潤滑劑對粉末流動性和崩解時限的影響

結果表明，微粉硅膠和硬脂酸鎂兩者以一定的比例(4∶1)混合使用時粉末的流動性好，且崩解時限最優。

2.3.3填充劑考察 固定干浸膏粉添加量20%、潤滑劑微粉硅膠2%、硬脂酸鎂0.5%、崩解劑L-HPC 20%、片劑硬度4～7 kg，考察不同填充劑對崩解時間影響，結果見表2。

表2 不同填充劑對口崩片崩解時限的影響

由表2可知，不同填充劑混合使用的效果明顯優于單一填充劑的使用，以山梨醇和微晶纖維素混合作為填充劑時崩解時限為優，尤其以山梨醇-微晶纖維素比例為1∶3和1∶1為優，兼顧口感，微晶纖維素用量過大增強沙礫感，故選擇填充劑為山梨醇和微晶纖維素1∶1。

2.4 Box-Behnken響應面法優選“消痘靈”口崩片的成型工藝

2.4.1實驗設計及結果 依據前期單因素試驗和預試驗，設定將藥粉用量(A)、崩解劑用量(B)、微粉硅膠和硬脂酸鎂用量比(C)為自變量，口崩片綜合評分為評價指標，綜合評分按公式(1)計算。考察各因素對口崩片成型工藝的影響，見表3～4。

綜合評分=外觀×20%+硬度×20%+脆碎度×20%+崩解時限×40%

(1)

表4 Box-Behnken響應面法優選制備工藝實驗設計及其結果

2.4.2模型擬合 上述數據用Design-Expert軟件分析，并以Y對變量進行模型擬合，得二次多項式回歸方程：Y=78.80-4.87A-0.12B+4.50C-1.25AB-1.50AC+2.50BC+0.72A2-6.78B2+4.98C2，r=0.991 1。由表5可知，P<0.01，F=87.10，表明模型差異有統計學意義；失擬項P=0.332 95>0.01，失擬項差異無統計學意義，說明該模型擬合度和可信度均有效，誤差小，可以用此模型對“消痘靈”口崩片的制備工藝進行分析和預測。

表5 “消痘靈”口崩片處方響應面結果方差分析

2.4.3響應面優化分析 根據擬合方程，采用Design-Expert V8.0.6.1軟件繪制各因素指標變化對“消痘靈”口崩片綜合評分影響的等高線圖和響應面圖，見圖1～3。

圖1 藥粉量-崩解劑量對綜合評分影響

圖2 藥粉量-微粉硅膠∶硬脂酸鎂比對綜合評分影響

圖3 崩解劑量-微粉硅膠∶硬脂酸鎂比對綜合評分影響

從圖1～3可以看出，口崩片綜合評分與A和C成正比，與B成拋物線。即在一定范圍內，隨著A和口崩片用量的增加，綜合評分隨之增加；隨著B的增加，綜合評分先增大后減小。

2.4.4優化結果 分析回歸模型并結合實際情況，“消痘靈”口崩片的最佳制備工藝為藥粉量20%、崩解劑量20%、微粉硅膠-硬脂酸鎂為4∶1。

2.5 “消痘靈”口崩片的優化制備工藝

按處方量浸膏粉20%、微晶纖維素20%、山梨醇20%、L-HPC 20%、阿斯巴甜0.50%、微粉硅膠2%、硬脂酸鎂0.5%，采用粉末直接壓片法壓片，片劑硬度為4～7 kg、崩解時限45～54 s、脆碎度0.93～0.98，表面淺棕色，光滑，有光澤，酸甜適中，稍有沙礫感，可接受，片質量0.4 g，浸膏質量分數為10%。

2.6 驗證實驗

按最優處方配比制備3批“消痘靈”口崩片進行驗證。結果所得口崩片片形完整，崩解時限、硬度及脆碎度均符合《中國藥典》2015年版要求，具體結果見表6。

表6 “消痘靈”口崩片處方驗證實驗

2.7 藥效學研究

2.7.1實驗動物分組及給藥 24只雄性昆明種小鼠隨機分成對照組、陽性對照組、口崩片內治組、口崩片內外合治組共4組。對照組給予等體積0.9%氯化鈉溶液，陽性組給予金花消痤丸270 mg·kg-1·d-1，“消痘靈”口崩片內治組給360 mg·kg-1·d-1(取適量藥物粉末用蒸餾水配成溶液)、口崩片內外合治組給予“消痘靈”口崩片的同時配合口崩片水溶液擦涂，其中口服給藥量同“消痘靈”口崩片內治組，連續給藥14 d。

2.7.2測定方法 給藥14 d后，小鼠脫頸椎處死，剔除小鼠腹部的被毛，摘取下側腹部皮脂腺斑組織，放入8～10倍體積的中性福爾馬林組織固定液中，蘇木素-伊紅(HE)染色切片(蘇木素染細胞核、伊紅染細胞質)，并在顯微鏡下觀測其組織結構。

2.7.3HE染色結果 如圖4所示，對照組小鼠的皮脂腺排列疏松、整齊且部分開口于毛囊，結構完整。而病理情況下，皮脂腺會發生相應變化，體積變大而飽滿，數量多且排列緊密。本研究根據各給藥組皮脂腺變化情況判斷，各組病理狀態均有所改善，其中“消痘靈”口崩片內外合治組皮脂腺最小、腺體萎縮程度最重，且排列最疏松；然后依次是“消痘靈”口崩片內治組和陽性對照組。

注：A.空白對照組；B.陽性對照組；C.口崩片內治組；D.口崩片內外合治組。

由以上結果可知，口服金花消痤丸在短時間內無法顯著改變小鼠的皮脂腺分泌情況，但“消痘靈”口崩片對皮脂腺組織有一定影響，可使皮脂腺發生萎縮，在一定程度上控制皮脂分泌，且內外合治組的效果更優。

2.8 抑菌實驗

2.8.1“消痘靈”口崩片水溶液的制備 取一定量口崩片溶于水，配置成不同質量濃度的口崩片水溶液，其水溶液質量濃度由高到底依次為300、275、250、225、200、175、150、130、100、75、50、25 mg·mL-1。

2.8.2“消痘靈”口崩片最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的測定 取一次性無菌96孔平底微量培養板4個，分別標記為 A、B、C、D，用來實驗糠秕馬拉色菌、金黃色葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌和表皮葡萄球菌。采用微量移液槍向各板孔中加入相應的微生物培養液100 μL，從藥物稀釋液管中各取100 μL，按高質量濃度到低質量濃度的順序加入到12至1號孔，各濃度做3復孔，培養24～48 h。隨后每孔吸取各混懸液0.1 mL接種于固體培養基中，于37 ℃再次培養24～48 h，觀察各平板是否有菌落產生。

2.8.3MIC及MBC測定結果 “消痘靈”口崩片水溶液對4種致病菌MIC、MBC實驗測定結果見表7。

表7 “消痘靈”口崩片的MIC、MBC測定結果 mg·mL-1

3 討論

痤瘡是一種好發于顏面部的慢性炎癥性疾病，臨床治療中，與使用抗生素相比，中藥不僅能夠提高人體免疫力，發揮非特異性抗菌作用，而且耐藥性低。本研究通過對主要痤瘡致病菌進行抑菌實驗研究，證實了中藥復方“消痘靈”口崩片能夠有效抑制痤瘡丙酸桿菌等4種致病菌的生長，對痤瘡具有一定的治療作用，同時也說明，通過粉末直壓法制備口崩片的工藝并未破壞抗菌的有效成分，體現出了中藥抗菌的獨特優勢，值得推廣使用。

口腔崩解片是近幾年來一種新型速釋制劑，其制備工藝主要有粉末直壓法、噴霧干燥法、濕法制粒壓片等。相比較而言，粉末直接壓片法制備工藝簡單、成本低廉，同時對處方要求高，尤其是對中藥提取浸膏來說，較難實現同時滿足流動性、可壓性和崩解限度。痤瘡患者主體為青少年，服用中藥湯劑順應性差，而口崩片不需要水送服，可以在口腔內迅速崩解，效果與口服液/中藥湯劑接近，且口感好，有時尚感，便于接受，且穩定性好，便于儲存、運輸、攜帶。

內外同治是在中醫理論的指導下，通過內服外用達到治療病癥的目的。一般情況下，采用內外合治法，內治可調攝五臟、清熱解毒、化痰散結，外治可消腫排膿、通瘀化滯。本實驗中，將中藥復方水煎液制備成口崩片，除具有一切口崩片內服的優勢外，還能快速溶解于水而外用，起到內外同治的作用。口崩片內服能夠祛邪外出、培根固本，改變患者“內環境”，達到陰陽平衡；水溶液外涂不僅可以快速在有損害的部位起效，而且無不良反應，能使外出的丘疹、膿皰消退更快。由此可知，中醫內外合治療法治療痤瘡，不影響機體的整體狀況，安全性相對較高，使用也將越來越廣泛。