miR-206靶向Cx43調(diào)控ERK1/2通路在兔激素性股骨頭壞死中的作用

席源，羅高斌，魏桂清，覃文濤，薄占東

1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨關(guān)節(jié)外科，南寧 530021；2.中國(guó)人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院骨科醫(yī)院，廣州 510010

股骨頭壞死是臨床常見的難治性疾病，后期可導(dǎo)致股骨頭塌陷并繼發(fā)嚴(yán)重的功能障礙，致殘率極高，多數(shù)患者最終需選擇關(guān)節(jié)置換等外科治療。近年來由于激素的廣泛運(yùn)用，糖皮質(zhì)激素已成為非創(chuàng)傷性股骨頭壞死的重要致病因素[1,2]，且口服皮質(zhì)類固醇對(duì)股骨頭缺血性壞死的病理發(fā)展有持續(xù)性影響[3]。但其確切機(jī)制尚不明確，多種治療方法的療效不盡人意。探索激素性股骨頭壞死（steroid-induced avascular necrosis of the femoral head，SANFH）發(fā)病機(jī)理，對(duì)SANFH 的診治有重要意義。本組前期研究證實(shí)，SANFH 患者股骨頭內(nèi)微小RNA（MicroRNA，miR）-206 表達(dá)上調(diào)，同時(shí)縫隙連接蛋白（connexin，Cx）43 表達(dá)下調(diào)，提示Cx43/miR-206 參與SANFH 的發(fā)生發(fā)展[4]。據(jù)載，Cx43高表達(dá)可激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）1/2 信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)成骨分化[5]。本研究檢測(cè)兔SANFH 模型中miR-206、Cx43、ERK1/2 及Runx2表達(dá)變化，探討Cx43/miRNA-206 及其下游ERK1/2 通路在SANFH 中的作用，初步闡明其機(jī)制，期為SANFH 診治提供新的理論支持。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康新西蘭大白兔（廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供并代為飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK 桂2014-0003），質(zhì)量（2.5±0.3）kg。

1.1.2 主要試劑及儀器 注射用甲潑尼龍琥珀酸鈉（輝瑞制藥，比利時(shí)），大腸桿菌內(nèi)毒素（sigma，美國(guó)）；miRNA 原位雜交試劑盒（EXIQON，丹麥）；鼠抗-Cx43（Santa，美國(guó)）、兔抗-ERK1/2、兔抗-P-ERK1/2、鼠抗-βtubulin（CST，美國(guó)），鼠抗-Runx2（Abnova，中國(guó)臺(tái)灣）；IRDye 800CW goat anti-mouse IgG（H+L）、IRDye 800CW goat anti-rabbit IgG（H+L）二抗（Licor，美國(guó)）；磷酸酶抑制劑PhosSTOP（Roche，瑞士），RIPA 裂解液（強(qiáng)）、Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒（生工生物，中國(guó)），免疫組織化學(xué)試劑盒（博士德，中國(guó)）；總RNA 小量制備試劑盒（Corning，美國(guó)）、PrimeScript ?RT reagent Kit 和TB Green?Premix Ex Taq?II（Takara，日本）。……