E003對RSA 模型小鼠蛻膜組織超微結構的影響

龍生根，章志琴，黃志輝，夏雷震，唐亮，伍瓊芳，黃歐平

江西省婦幼保健院 1.婦科腫瘤，2.輔助生殖中心，3.婦科，南昌 330006

反復自然流產（recurrent spontaneous abortion，RSA）又稱習慣性流產，是指連續發生兩次及以上的妊娠20 周以內妊娠損失，發病率為1%～5%，60%以上原因不明，稱為不明原因復發性流產（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA），RSA 是全世界共同關注的疑難雜癥[1～3]。E003 即瑞香素（daphnetin）作為我國首創的天然藥物，其藥理作用十分廣泛，主要包括：抗炎、抗氧化、抗病原微生物、抗腫瘤、免疫調節等[4～8]，但其在流產方面的作用尚未見任何報道。本研究通過觀察RSA 模型小鼠蛻膜組織形態和超微結構，首次探討瑞香素對RSA 模型小鼠的可能治療作用。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

將雌性CBA/J 與雄性BALB/c 小鼠按2：1 合籠交配建立正常妊娠小鼠模型，雌性CBA/J 小鼠與雄性DBA/2 小鼠按2：1 比例合籠交配建立RSA 小鼠模型，檢出陰栓者計為妊娠第0 d。實驗共分4 組：正常妊娠組、RSA 模型組、E003 低劑量組（1 mg·kg-1·day-1）、E003 高劑量組（4 mg·kg-1·day-1），每組10 只雌鼠。

1.2 實驗方法

1.2.1 RSA 模型小鼠制備及大體胚胎觀察 各組從妊娠第0 d 開始灌胃給藥，E003 高劑量組和低劑量組灌胃容積均為0.4 ml/20 g[9]，正常妊娠組和RSA 模型組給予相同體積蒸餾水，連續給藥14 d，末次給藥1 h后處死小鼠，打開腹腔，暴露子宮，觀察子宮生長情況，記錄胚胎著床數目和胚胎吸收數目并取其蛻膜組織。

1.2.2 蘇木精-伊紅（HE）染色 分離蛻膜組織，4%多聚甲醛溶液內固定24 h，水洗，固定，脫色，包埋，切片，經HE 染色后BX51 熒光顯微鏡觀察。

1.2.3 透射電鏡標本制備 新鮮組織確定取材部位，組織體積≤1 mm×1 mm×1 mm，迅速投入電鏡固定液4 ℃固定2～4 h。0.1 mol/L 磷酸緩沖液PB（pH 7.4）漂洗3 次，每次15 min；……