沙利度胺治療晚期非小細胞肺癌一代EGFR-TKI獲得性耐藥的臨床效果及安全性研究*

王根和，吳怡青，吳鵬飛，方 平，左 剛，陳 雍，胡善良，汪曙紅

(黃山市人民醫院腫瘤科，安徽 黃山 245000)

肺癌是發病率和致死率第一的腫瘤，而非小細胞肺癌(NSCLC)約占其中的80%[1]。隨著研究的深入，腫瘤發病機制和分子靶點越來越清晰，使得近些年來晚期非小細胞肺癌患者的5年生存率有所提高。吉非替尼、厄洛替尼等是表皮生長因子受體(EGFR)酪氨酸激酶抑制劑(TKI)的代表性藥物，在臨床治療EGFR陽性的非小細胞肺癌患者中發揮了重要作用[2]。然而，獲得性耐藥是患者及臨床醫師最終不可避免的難題，雖然既往研究效果良好，但是仍有可能發生病情進展[3]。而在對相關耐藥機制的研究中發現，在經TKI治療耐藥后，以血管內皮生長因子(VEGF)/EGFR通路為主的血管通路系統會被腫瘤細胞激活，且會上調VEGF的表達[4]。部分臨床研究證實，VEGF和EGFR通路雙阻斷可以延緩耐藥或一定程度上逆轉耐藥，甚至還能提高療效。作為一種人工合成的谷氨酸衍生物，沙利度胺能抑制部分由堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和VEGF介導的腫瘤血管生成，還能夠抑制腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及整合素的表達，從而導致細胞凋亡[5]。沙利度胺在臨床上早已被用于治療多發性骨髓瘤等一系列腫瘤。前期研究結果表明，沙利度胺有部分逆轉一代TKI耐藥的作用，能延長更換一代TKI的時間，對TKI治療進展緩慢的患者具有一定意義[6-7]。為研究沙利度胺逆轉耐藥的機制是否與bFGF和VEGF有關，作者設計了本研究，希望從分子機制上分析逆轉耐藥的機制，或者提供較為敏感的預測因素。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2010年1月1日至2015年12月31日本院收治的病理證實為晚期非小細胞肺癌患者52例作為研究對象。初始EGFR-TKI(一代TKI:吉非替尼、厄洛替尼或埃克替尼)治療后由影像學等檢查證實疾病進展，在不停用TKI基礎上聯合使用沙利度胺治療。所有患者臨床資料均完整，臨床病理特征見表1。納入標準：(1)所有患者疾病進展判定均經影像學檢查證實；(2)聯合治療過程中，無局部治療因素(如手術等)；(3)所有患者體力狀況評分(PS評分)均小于或等于3分，且至少有1個可測量病灶；(4)其他相關指標如心電圖、血常規、肝功能、腎功能等均正常；(5)符合JACKMAN等[8]關于EGFR-TKI繼發性耐藥的定義。本試驗經醫院倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

表1 患者臨床病理特征

1.2方法 主要評估指標和研究終點為腫瘤緩解率和無疾病進展時間(PFS)，次要研究指標和終點為血清bFGF和VEGF的變化。在沙利度胺服用前(治療前)及確認疾病進展時(治療后)留取血清標本進行VEGF和bFGF檢測。VEGF和bFGF檢測試劑盒均為武漢博士德公司產品。檢測原理：均采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，預包被捕獲抗體于酶標板上,當加入標本時,被檢測物與預包被抗體相結合,其他游離成分則通過洗滌被除去。加入生物素化的抗人抗體,形成固相抗體-抗原-酶標抗體型夾心的免疫復合物。加入帶有辣根過氧化物酶標記的親和素。親和素與生物素特異性結合,親和素連接的酶與夾心的免疫復合物相連接;游離的其他成分通過洗滌被除去。最后加入顯色劑顯色,形成夾心的免疫復合物,酶催化顯色劑氧化成為藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀取其在450 nm處的A值,通過參考品繪制出標準曲線,對照未知樣本中的A值,即可測算出標本中被檢測濃度。具體步驟按說明書進行。

2 結 果

2.1臨床療效 經一代TKI治療進展聯合沙利度胺治療后，所有患者中，完全緩解(CR)0例，部分緩解(PR)4例，病情穩定(SD)16例，有效率(CR+PR)為7.7%，疾病控制率(CR+PR+SD)為38.5%。

2.2生存分析 全組隨訪率100%。在對生存分析時發現，聯合治療后中位PFS是7周(3～44周)，中位總生存時間(OS)為108周(52～240周)。

2.3血清VEGF和bFGF檢測結果 血清VEGF和bFGF檢測結果顯示，PR+SD治療后血清VEGF和bFGF水平明顯下降，差異均有統計學意義(P<0.05)，而PD治療前后比較差異均無統計學意義(P>0.05)。PFS≥44周患者，治療前后血清VEGF和bFGF水平比較差異均有統計學意義(P<0.05)。對于性別和轉移部位等因素，治療前后VEGF和bFGF水平比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2～5。

表2 不同療效分組血清VEGF和bFGF水平比較

表3 不同性別分組血清VEGF和bFGF水平比較

表4 TKI治療后PFS分組血清VEGF和bFGF水平比較

表5 轉移部位數分組血清VEGF和bFGF水平比較

3 討 論

EGFR-TKI藥物應用于臨床治療后，為EGFR突變型晚期非小細胞肺癌患者帶來較好療效，然而，大多數患者在經歷9～13個月的治療后[8]，會遭遇藥物耐藥的難題。目前已知的耐藥性機制有以下數點[9]：(1)EGFR通路的改變。所有的通路突變中，T790M突變是最常見的，另外D761Y(外顯子19)、T854A(外顯子21激活環)和L747S(外顯子19)也被發現與耐藥機制有關。(2)旁路激活。包括c-Met基因擴增，肝細胞生長因子(HGF)介導的MET活化，胰島素樣生長因子1受體(IGF-1R)介導的EGFR下游通路激活等。(3)其他，如腫瘤誘導的非EGFR依賴性血管生成。(4)組織類型轉化，如3%～14%的EGFR-TKI繼發耐藥患者會由腺癌轉化為小細胞肺癌。

對EGFR-TKI獲得性耐藥機制的研究發現，在耐藥細胞中，以VEGF/EGFR通路為主的血管通路系統被激活，提高了VEGF表達。VEGF在腫瘤血管生成過程中的重要作用已被證實，其可結合并激活酪氨酸激酶受體(廣泛存在于內皮細胞表面)，通過一系列信號通路，最終誘導內皮細胞增生、遷移、細胞間質蛋白水解等，從而參與血管和淋巴管的生成，調節腫瘤整個生長過程。有關研究針對VEGF/EGFR雙阻斷已經證實能夠提高療效。Ⅱ期試驗JO25567[10]針對EGFR陽性非鱗非小細胞肺癌患者，采用貝伐單抗和厄洛替尼聯合治療，結果發現，聯合治療組PFS明顯延長，中位PFS對比為9.7個月vs.16個月(P=0.001 5)。亞組分析時，19外顯子突變的患者中也發現陽性意義，提示聯合阻斷治療對患者有益。

新生血管對于腫瘤的發生、發展具有極其重要的作用。在有關血管生成的假說中，最為重要的是血管開關平衡假說。該假說認為，相關促血管因子的合成和釋放是一種啟動因素，開關的開閉由誘導蛋白活性和生物利用度、促血管基因表達介導，相關因子表達提高則打開開關，否則關閉開關。目前，已知的相關調控因子有白細胞介素(IL)-8、多效生長因子、轉化生長因子β(TGF-β)、bFGF、MMP、VEGF、整合素等。

在最重要的血管促進因子VEGF家族中，共有A、B、C、D、E等5個亞型和胎盤生長因子(PIGF)。其分別與血管生成、維持血管存活、腫瘤淋巴管生成相關聯。

bFGF屬于FGF家族，在人體多種正常組織中廣泛存在，其重要作用主要體現在調節機體的胚胎發育與分化、修復損傷組織、促進血管生成及幫助創傷愈合等。其也被發現存在多種腫瘤組織中，具有誘導新血管生成、促進細胞有絲分裂等作用，與腫瘤新生血管及腫瘤生物學活動密切相關。

有證據表明，沙利度胺能夠抑制由bFGF和VEGF介導的腫瘤血管生成、TNF-α和整合素的表達，從而誘導細胞凋亡。VERHEUL等[11]相關研究證實，沙利度胺能夠抑制腫瘤細胞分泌的血管生長刺激因子，從而抑制腫瘤血管生成，導致腫瘤凋亡，這其中就包括bFGF和VEGF。

本研究結果表明，對于從聯合治療中獲益的患者，血清VEGF和bFGF水平在治療前后比較差異均有統計學意義(P<0.05)，說明聯合治療能抑制VEGF和bFGF，從而抑制一代TKI耐藥后的VEGF通路激活。而這種差異在沙利度胺治療無效的患者中不明顯。在亞組分析中，PFS≥44周的患者，血清VEGF和bFGF水平在沙利度胺治療后明顯下降，差異均有統計學意義(P<0.05)；而PFS<44周的患者血清VEGF和bFGF水平在治療前后比較差異均無統計學意義(P>0.05)，表明TKI治療期間緩慢進展的患者，VEGF通路激活可能在耐藥過程中起主要作用。綜上所述，沙利度胺可能是通過抑制bFGF和VEGF介導的血管生成，在一定程度上逆轉TKI耐藥，而TKI治療期間進展緩慢的患者可能從此方案中獲益。