急性冠狀動脈綜合征患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平及其與心肌損傷和冠狀動脈病變程度的相關性

何亞磊，魏引，蔡葉銳，普永紅，洪琴

急性冠狀動脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)是常見的心血管危重癥之一，其包括不穩定型心絞痛(unstable angina pectoris,UAP)和急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)，主要是由于各種原因導致的冠狀動脈損傷粥樣硬化引起冠狀動脈血管堵塞，進而導致心肌缺血缺氧壞死引發急性心臟病。其發病急，病死率較高[1]。ACS治療的最佳時期在發病1 h以內，超過4 h患者死亡風險會上升數倍，因此其早診早治對患者的預后至關重要[2]。目前，臨床對ACS的快速篩查手段主要有體表心電圖及心肌酶譜等，但體表心電圖診斷ACS的特異度較差，心室肥大及心包炎均會導致心電圖ST段的改變；另外患者心肌酶的改變較為滯后，多數指標在患者發病3 h以后才升高明顯，并且特異度亦欠佳，因此對于ACS的快速評估診斷不利[3]。近年來機體基因組學發展迅速，越來越多的微小RNA(microRNA，miR)家族成員出現在心血管疾病的相關研究中，其中miR-133a和miR-208b一直是研究熱點，其在心肌細胞中特異性表達，并且檢測操作方便快捷，可能為ACS的早期快速診斷提供新思路[4-5]。鑒于此，現分析ACS患者血漿miR-133a、miR-208b的表達水平及其與心肌損傷和冠狀動脈病變程度的相關性，旨在為ACS的快速診斷及病情評估提供臨床依據，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年5月—2019年5月云南省第三人民醫院心內科收治的ACS患者106例作為研究對象，其中UAP患者51例(UAP組)，AMI患者55例(AMI組)。另選取同期于醫院進行體檢的健康者40例作為對照(CON組)。3組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性， 見表1。本研究經醫院倫理委員會審核通過，入選者或家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準：①年齡≥18周歲；②ACS的診斷符合“急性冠狀動脈綜合征急診快速診療指南”診斷標準[6]；③無精神疾病或意識障礙。(2)排除標準：①合并全身感染性或免疫性疾?。虎诤喜盒阅[瘤；③合并肝、肺、腎等重要器官功能障礙；④發病至入院時間超過6 h。

1.3 觀察指標與方法 ACS患者確診后即刻、健康者體檢當日采集外周靜脈血10 ml，分裝為2管，其中1管靜置5 min后離心留取血清置于-20℃冰箱中備用。以SYSMEXBX-5000全自動生化檢測儀(日本希森美康公司)進行檢測。(1)血清心肌損傷標志物：包括肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)、腦鈉肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)。(2)血脂指標：包括總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)。(3)外周血漿miR-133a和miR-208b表達水平：另一管加抗凝取血漿應用定量聚合酶鏈反應檢測外周血miR-133a和miR-208b表達水平，總RNA提取—逆轉錄—PCR擴增。逆轉錄試劑盒購于日本Takara公司，引物由上海生工生物工程股份有限公司提供。miR-133a和miR-208b的PCR判讀使用公式：ΔCt=樣品Ct均值-內參Ct均值[7]，以2-ΔΔCt表示基因的相對表達量。(4)左心室射血分數(LVEF)：使用飛利浦iE33超聲診斷儀進行檢測。(5)冠狀動脈病變程度：應用Gensini評分[8]評估患者冠狀動脈病變程度，得分越高，病變越嚴重。

表1 3組臨床資料比較 [例(%)]

2 結 果

2.1 3組心肌損傷指標比較 與CON組比較，UAP組和AMI組患者血清cTnI、BNP、CK-MB水平均明顯升高，且AMI組血清cTnI、BNP、CK-MB水平高于UAP組，而LVEF低于UAP組(P<0.05)， 見表2。

2.2 3組Gensini評分比較 CON組Gensini評分(8.23±5.42)分

2.3 3組血漿miR-133a、miR-208b表達水平比較 血漿miR-133a、miR-208b表達水平比較，CON組

2.4 血漿miR-133a、miR-208b表達水平與心肌損傷指標的相關性 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b的表達水平與血清cTnI、BNP、CK-MB呈正相關(P<0.05)，與LVEF呈負相關(P<0.05)，見表4。

表3 3組受試者血漿miR-133a、miR-208b表達水平比較

表4 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平與心肌損傷指標的相關性

2.5 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平與冠狀動脈病變程度的相關性 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b的表達水平與Gensini評分均呈正相關(r=0.647、0.666，P=0.002、0.013)。

3 討 論

ACS是常見的危重心血管疾病，為冠心病的嚴重類型，臨床主要表現為急性胸痛、胸悶，嚴重者導致心律失常及心力衰竭，甚至導致猝死，其早發現早診斷可明顯降低患者并發癥發生率及病死率[9-10]。近年來，各種類型的生物標志物對于ACS的早期篩查診斷、病情評估及預后判斷做出了重大貢獻，降低了患者的病死率。miRNA一直是冠心病研究的熱點，很多類型的miRNA亞型在心肌細胞中特異性表達，冠心病發作時其在血漿中的表達水平出現異常，研究其生物學特性可進一步揭示心血管疾病發展的病理生理過程。還有很多研究顯示，miRNA對冠狀動脈粥樣硬化的形成進展、心肌缺血梗死后的血管重建再生等方面在基因水平起著調控作用[11-13]。雖然miRNA對ACS的發生發展至關重要，但是目前有關此方面的研究較少，其具體的影響機制尚不明確，因此，本研究通過分析ACS患者血漿中miR-133a、miR-208b的表達水平及與心肌損傷指標和冠狀動脈病變程度的相關性，以期為臨床中選擇理想的ACS早期診斷及病情評估標志物提供充分的理論依據。

表2 3組受試者心肌損傷指標比較

miRNA是長度在18～23個核苷酸之間的非編碼核糖核酸，其可以有效地調控機體內DNA轉錄后翻譯效率，并可以維持目標RNA的穩定性，對細胞的分化、生長及程序性凋亡起著重要的作用[14]。miR-133a和miR-208b是miRNA的2個亞型，是機體內多種生物過程的調控因子，在心肌細胞中特異性表達，對心血管疾病的發生發展作用重大，當患者發生ACS時，可以通過受損破裂的心肌細胞滲漏入體循環，還可通過心肌細胞的微囊泡主動分泌[15-16]。本研究顯示，ACS患者血漿miR-133a和miR-208b表達水平明顯高于健康者，且AMI患者較UAP患者表達水平更高，說明當患者發生ACS時，2種標志物在血漿中的表達水平明顯上升，并且疾病程度越嚴重，其表達水平越高，與既往研究一致。孫杰等[17]對AMI患者血漿中miR-208b進行實時定量PCR檢測時發現，其在AMI急性期時表達水平顯著升高，2周后開始下降至基線水平；Wang 等[18]通過分析AMI患者及AMI鼠模型心肌細胞miR-208b表達的規律后得出，其在心肌細胞中特異性表達，病情急性發作時升高顯著，在正常心肌細胞中表達較少；張松林等[19]研究發現，miR-133a在心肌梗死患者體內表達顯著升高，并且表達水平變化趨勢與cTnI一致，即疾病發作時升高數倍，1～2 d內恢復至基線水平。miR-133a是心肌特異性miRNA，其參與了心肌細胞的分化生長，其可能通過MAPK/ERK信號通路調控心肌細胞的生長狀態[20]。miR-208b屬于miR-208基因簇類別，高特異性表達于損傷的心肌細胞中，其可通過正性調節—主要組織相容性復合物引起心肌重構及纖維化的形成[21]。因此，患者發生ACS時，心肌細胞受損嚴重，胞內核物質大量釋放，作為心肌細胞特異性表達的miR-133a和miR-208b，可通過各種機制釋放，故在患者體內呈現高表達，病情越嚴重，其表達水平越高。本研究觀察到AMI患者miR-133a和miR-208b表達水平較UAP患者亦明顯升高，進一步證實早期檢測其表達水平，可為ACS的早發現、早診斷提供新思路。

患者發生ACS時，各種心肌損傷指標均會不同程度的升高，本研究也發現，ACS患者血清cTnI、BNP、CK-MB明顯升高，而代表心功能的LVEF明顯下降，并且ACS患者冠狀動脈病變程度Gensini評分明顯升高，且病情更嚴重的AMI患者升高程度高于UAP患者，這些指標均可以作為ACS診斷及病情評估的輔助指標之一。本研究顯示，ACS患者血漿miR-133a和miR-208b表達水平與心肌損傷指標及冠狀動脈病變程度具有一定的相關性[22]，具體表現為ACS組患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平均與血清cTnI、BNP、CK-MB及Gensini評分呈正相關，與LVEF呈負相關，此結果說明，miR-133a和miR-208b在ACS早期診斷及病情評估中的地位不亞于傳統的評估指標。Wang等[23]研究得出，miR-208b在AMI患者中較對照組明顯升高，上升幅度與cTnI及CK-MB明顯相關；Zhang等[24]研究顯示，AMI患者血清miR-133a表達水平與Gensini評分、cTnI及LDL呈明顯的正相關，與本研究結果基本一致。cTnI、BNP、CK-MB均是ACS發作時的血清標志物，其水平越高，心肌損傷程度越大，心功能越差，心功能指標LVEF也越低，而Gensini評分代表了冠狀動脈阻塞情況，其分值越高冠狀動脈病變程度越嚴重，miR-133a和miR-208b均與上述指標有著明顯的相關性，可見檢測2種miRNA在ACS患者血漿中的表達水平可能成為預測ACS發生和評估病情嚴重程度的標志物。

綜上所述，ACS患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平明顯升高，且與心肌損傷指標和冠狀動脈病變程度呈現明顯的相關性，可為ACS的早期診斷和病情評估提供新思路。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

何亞磊：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；魏引：提出研究思路，分析試驗數據，論文審核;蔡葉銳：進行統計學分析;普永紅、洪琴：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改