急性冠狀動脈綜合征患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平及其與心肌損傷和冠狀動脈病變程度的相關性

何亞磊，魏引，蔡葉銳，普永紅，洪琴

急性冠狀動脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)是常見的心血管危重癥之一，其包括不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris,UAP)和急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)，主要是由于各種原因?qū)е碌墓跔顒用}損傷粥樣硬化引起冠狀動脈血管堵塞，進而導致心肌缺血缺氧壞死引發(fā)急性心臟病。其發(fā)病急，病死率較高[1]。ACS治療的最佳時期在發(fā)病1 h以內(nèi)，超過4 h患者死亡風險會上升數(shù)倍，因此其早診早治對患者的預后至關重要[2]。目前，臨床對ACS的快速篩查手段主要有體表心電圖及心肌酶譜等，但體表心電圖診斷ACS的特異度較差，心室肥大及心包炎均會導致心電圖ST段的改變；另外患者心肌酶的改變較為滯后，多數(shù)指標在患者發(fā)病3 h以后才升高明顯，并且特異度亦欠佳，因此對于ACS的快速評估診斷不利[3]。近年來機體基因組學發(fā)展迅速，越來越多的微小RNA(microRNA，miR)家族成員出現(xiàn)在心血管疾病的相關研究中，其中miR-133a和miR-208b一直是研究熱點，其在心肌細胞中特異性表達，并且檢測操作方便快捷，可能為ACS的早期快速診斷提供新思路[4-5]。鑒于此，現(xiàn)分析ACS患者血漿miR-133a、miR-208b的表達水平及其與心肌損傷和冠狀動脈病變程度的相關性，旨在為ACS的快速診斷及病情評估提供臨床依據(jù)，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年5月—2019年5月云南省第三人民醫(yī)院心內(nèi)科收治的ACS患者106例作為研究對象，其中UAP患者51例(UAP組)，AMI患者55例(AMI組)。另選取同期于醫(yī)院進行體檢的健康者40例作為對照(CON組)。3組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性， 見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過，入選者或家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準：①年齡≥18周歲；②ACS的診斷符合“急性冠狀動脈綜合征急診快速診療指南”診斷標準[6]；③無精神疾病或意識障礙。(2)排除標準：①合并全身感染性或免疫性疾病；②合并惡性腫瘤；③合并肝、肺、腎等重要器官功能障礙；④發(fā)病至入院時間超過6 h。

1.3 觀察指標與方法 ACS患者確診后即刻、健康者體檢當日采集外周靜脈血10 ml，分裝為2管，其中1管靜置5 min后離心留取血清置于-20℃冰箱中備用。以SYSMEXBX-5000全自動生化檢測儀(日本希森美康公司)進行檢測。(1)血清心肌損傷標志物：包括肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)、腦鈉肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)。(2)血脂指標：包括總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)。(3)外周血漿miR-133a和miR-208b表達水平：另一管加抗凝取血漿應用定量聚合酶鏈反應檢測外周血miR-133a和miR-208b表達水平，總RNA提取—逆轉(zhuǎn)錄—PCR擴增。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于日本Takara公司，引物由上海生工生物工程股份有限公司提供。miR-133a和miR-208b的PCR判讀使用公式：ΔCt=樣品Ct均值-內(nèi)參Ct均值[7]，以2-ΔΔCt表示基因的相對表達量。(4)左心室射血分數(shù)(LVEF)：使用飛利浦iE33超聲診斷儀進行檢測。(5)冠狀動脈病變程度：應用Gensini評分[8]評估患者冠狀動脈病變程度，得分越高，病變越嚴重。

表1 3組臨床資料比較 [例(%)]

2 結(jié) 果

2.1 3組心肌損傷指標比較 與CON組比較，UAP組和AMI組患者血清cTnI、BNP、CK-MB水平均明顯升高，且AMI組血清cTnI、BNP、CK-MB水平高于UAP組，而LVEF低于UAP組(P<0.05)， 見表2。

2.2 3組Gensini評分比較 CON組Gensini評分(8.23±5.42)分

2.3 3組血漿miR-133a、miR-208b表達水平比較 血漿miR-133a、miR-208b表達水平比較，CON組

2.4 血漿miR-133a、miR-208b表達水平與心肌損傷指標的相關性 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b的表達水平與血清cTnI、BNP、CK-MB呈正相關(P<0.05)，與LVEF呈負相關(P<0.05)，見表4。

表3 3組受試者血漿miR-133a、miR-208b表達水平比較

表4 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平與心肌損傷指標的相關性

2.5 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平與冠狀動脈病變程度的相關性 ACS患者血漿miR-133a、miR-208b的表達水平與Gensini評分均呈正相關(r=0.647、0.666，P=0.002、0.013)。

3 討 論

ACS是常見的危重心血管疾病，為冠心病的嚴重類型，臨床主要表現(xiàn)為急性胸痛、胸悶，嚴重者導致心律失常及心力衰竭，甚至導致猝死，其早發(fā)現(xiàn)早診斷可明顯降低患者并發(fā)癥發(fā)生率及病死率[9-10]。近年來，各種類型的生物標志物對于ACS的早期篩查診斷、病情評估及預后判斷做出了重大貢獻，降低了患者的病死率。miRNA一直是冠心病研究的熱點，很多類型的miRNA亞型在心肌細胞中特異性表達，冠心病發(fā)作時其在血漿中的表達水平出現(xiàn)異常，研究其生物學特性可進一步揭示心血管疾病發(fā)展的病理生理過程。還有很多研究顯示，miRNA對冠狀動脈粥樣硬化的形成進展、心肌缺血梗死后的血管重建再生等方面在基因水平起著調(diào)控作用[11-13]。雖然miRNA對ACS的發(fā)生發(fā)展至關重要，但是目前有關此方面的研究較少，其具體的影響機制尚不明確，因此，本研究通過分析ACS患者血漿中miR-133a、miR-208b的表達水平及與心肌損傷指標和冠狀動脈病變程度的相關性，以期為臨床中選擇理想的ACS早期診斷及病情評估標志物提供充分的理論依據(jù)。

表2 3組受試者心肌損傷指標比較

miRNA是長度在18～23個核苷酸之間的非編碼核糖核酸，其可以有效地調(diào)控機體內(nèi)DNA轉(zhuǎn)錄后翻譯效率，并可以維持目標RNA的穩(wěn)定性，對細胞的分化、生長及程序性凋亡起著重要的作用[14]。miR-133a和miR-208b是miRNA的2個亞型，是機體內(nèi)多種生物過程的調(diào)控因子，在心肌細胞中特異性表達，對心血管疾病的發(fā)生發(fā)展作用重大，當患者發(fā)生ACS時，可以通過受損破裂的心肌細胞滲漏入體循環(huán)，還可通過心肌細胞的微囊泡主動分泌[15-16]。本研究顯示，ACS患者血漿miR-133a和miR-208b表達水平明顯高于健康者，且AMI患者較UAP患者表達水平更高，說明當患者發(fā)生ACS時，2種標志物在血漿中的表達水平明顯上升，并且疾病程度越嚴重，其表達水平越高，與既往研究一致。孫杰等[17]對AMI患者血漿中miR-208b進行實時定量PCR檢測時發(fā)現(xiàn)，其在AMI急性期時表達水平顯著升高，2周后開始下降至基線水平；Wang 等[18]通過分析AMI患者及AMI鼠模型心肌細胞miR-208b表達的規(guī)律后得出，其在心肌細胞中特異性表達，病情急性發(fā)作時升高顯著，在正常心肌細胞中表達較少；張松林等[19]研究發(fā)現(xiàn)，miR-133a在心肌梗死患者體內(nèi)表達顯著升高，并且表達水平變化趨勢與cTnI一致，即疾病發(fā)作時升高數(shù)倍，1～2 d內(nèi)恢復至基線水平。miR-133a是心肌特異性miRNA，其參與了心肌細胞的分化生長，其可能通過MAPK/ERK信號通路調(diào)控心肌細胞的生長狀態(tài)[20]。miR-208b屬于miR-208基因簇類別，高特異性表達于損傷的心肌細胞中，其可通過正性調(diào)節(jié)—主要組織相容性復合物引起心肌重構(gòu)及纖維化的形成[21]。因此，患者發(fā)生ACS時，心肌細胞受損嚴重，胞內(nèi)核物質(zhì)大量釋放，作為心肌細胞特異性表達的miR-133a和miR-208b，可通過各種機制釋放，故在患者體內(nèi)呈現(xiàn)高表達，病情越嚴重，其表達水平越高。本研究觀察到AMI患者miR-133a和miR-208b表達水平較UAP患者亦明顯升高，進一步證實早期檢測其表達水平，可為ACS的早發(fā)現(xiàn)、早診斷提供新思路。

患者發(fā)生ACS時，各種心肌損傷指標均會不同程度的升高，本研究也發(fā)現(xiàn)，ACS患者血清cTnI、BNP、CK-MB明顯升高，而代表心功能的LVEF明顯下降，并且ACS患者冠狀動脈病變程度Gensini評分明顯升高，且病情更嚴重的AMI患者升高程度高于UAP患者，這些指標均可以作為ACS診斷及病情評估的輔助指標之一。本研究顯示，ACS患者血漿miR-133a和miR-208b表達水平與心肌損傷指標及冠狀動脈病變程度具有一定的相關性[22]，具體表現(xiàn)為ACS組患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平均與血清cTnI、BNP、CK-MB及Gensini評分呈正相關，與LVEF呈負相關，此結(jié)果說明，miR-133a和miR-208b在ACS早期診斷及病情評估中的地位不亞于傳統(tǒng)的評估指標。Wang等[23]研究得出，miR-208b在AMI患者中較對照組明顯升高，上升幅度與cTnI及CK-MB明顯相關；Zhang等[24]研究顯示，AMI患者血清miR-133a表達水平與Gensini評分、cTnI及LDL呈明顯的正相關，與本研究結(jié)果基本一致。cTnI、BNP、CK-MB均是ACS發(fā)作時的血清標志物，其水平越高，心肌損傷程度越大，心功能越差，心功能指標LVEF也越低，而Gensini評分代表了冠狀動脈阻塞情況，其分值越高冠狀動脈病變程度越嚴重，miR-133a和miR-208b均與上述指標有著明顯的相關性，可見檢測2種miRNA在ACS患者血漿中的表達水平可能成為預測ACS發(fā)生和評估病情嚴重程度的標志物。

綜上所述，ACS患者血漿miR-133a、miR-208b表達水平明顯升高，且與心肌損傷指標和冠狀動脈病變程度呈現(xiàn)明顯的相關性，可為ACS的早期診斷和病情評估提供新思路。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

何亞磊：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；魏引：提出研究思路，分析試驗數(shù)據(jù)，論文審核;蔡葉銳：進行統(tǒng)計學分析;普永紅、洪琴：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改