miRNA-126和miRNA-92a在冠心病患者血清中的表達(dá)水平及臨床意義

艾世宜，李佳娜，李 星

(榆林市第二醫(yī)院心血管內(nèi)科,陜西 榆林719000)

冠心病(Coronary heart disease，CHD)通常被認(rèn)為是冠脈血管內(nèi)形成粥樣硬化斑塊，影響心肌供血所致的一大類疾病，具有較高致死風(fēng)險(xiǎn)。有關(guān)冠狀動(dòng)脈病變機(jī)理的研究證實(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和慢性炎癥反應(yīng)均是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的病理基礎(chǔ)[1-2]。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)屬于高度保守的內(nèi)源性非編碼核酸分子，約包括21～25個(gè)核苷酸序列。通常，血漿內(nèi)miRNA含量較為穩(wěn)定，且具有一定組織特異性，故可作為反應(yīng)某些疾病的潛在標(biāo)志物。近來，越來越多研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在血管完整性[3]、新生血管形成[4]、血管損傷修復(fù)[5]等方面發(fā)揮重要作用。miRNA-126和miRNA-92a作為miRNA主要分型，前者可參與血管生成和炎癥反應(yīng)等生理病理過程[6]；后者與血管內(nèi)皮損傷有關(guān)，可能成為血管內(nèi)皮損傷預(yù)防治療的新靶標(biāo)[7]。近年來，隨著生活節(jié)奏加快，我國CHD發(fā)病率逐年升高，且有年輕化趨勢(shì)，其預(yù)防和治療也越來越受關(guān)注[8]。本研究擬通過測(cè)定分析miRNA-126與miRNA-92a在CHD患者體內(nèi)表達(dá)變化，探究其在病情診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)中的價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年2月至2020年10月本院心內(nèi)科收治的56例CHD患者為觀察組研究對(duì)象。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合CHD相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，且經(jīng)冠脈造影(Coronary arteriography，CAG)檢查確診；②首次發(fā)病入院；③意識(shí)清楚，自愿參與研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并局部或全身性感染；②確診為急性心肌炎、心包炎和先天性心臟病；③合并肺動(dòng)脈栓塞和腦血管疾病；④合并惡性腫瘤；⑤合并嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病或其他類型血管病變。觀察組男33例，女23例；年齡43～80歲，平均(64.85±7.53)歲；吸煙者23例；高血壓29例，糖尿病17例。同時(shí)選擇同期入院接受健康體檢的同年齡段，排除CHD及其他系統(tǒng)疾病的健康者30例為對(duì)照組。對(duì)照組男19例，女11例；年齡43～80歲，平均(62.98±7.76)歲；吸煙者12例；高血壓14例，糖尿病5例。兩組上述資料間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 血清脂代謝指標(biāo)和細(xì)胞因子檢測(cè)：留取入選者次日晨起空腹?fàn)顟B(tài)下周靜脈血樣5 ml，常溫下離心分離血清，-80 ℃保存。酶聯(lián)免疫法測(cè)定兩組血清總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(High-density lipoproteincholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein cholesterin，LDL-C)、Krüppel 樣轉(zhuǎn)錄因 2(Kruppel like transcription factor 2，KLF2)、血管細(xì)胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)。

1.2.2 Gensini評(píng)分：納入患者均有同一組醫(yī)師完成CAG檢查，采用Gensini評(píng)分評(píng)估患者冠脈狹窄程度。①冠脈病變部位賦值系數(shù)：左主干記為5；前降支和回降支近端記為2.5；前降支中段記為1.5；前降支和回旋支遠(yuǎn)端、右冠動(dòng)脈、第1對(duì)角支、第2對(duì)角支、左心室后支均記為1.0；其余均記為0.5。②冠脈狹窄程度評(píng)分：無狹窄為0分，狹窄≤25%為1分，狹窄26%～50%為2分，狹窄51%～70%為4分，狹窄76%～90%為8分，狹窄91%～99%為16分，100%阻塞為32分。各冠脈狹窄程度評(píng)分與部位系數(shù)乘積之總和即為Gensini評(píng)分。Gensini評(píng)分>25分為冠脈中重度病變，≤25分為輕度病變[10]。

1.2.3 血清miRNA檢測(cè)：留取入選者次日晨起空腹?fàn)顟B(tài)下周靜脈血樣3 ml，常溫下離心分離血清，-80 ℃保存。HS0403-2型血液總RNA提取試劑盒(北京厚生博泰科技有限公司)和Rneasy MiNi Kit總RNA提取試劑盒(廣州創(chuàng)侖生物制品有限公司)提取血清總miRNA；紫外分光光度計(jì)測(cè)定提取miRNA純度，以A260/A280≥1.80為合格樣品。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 K1622(美國Fermentas)逆轉(zhuǎn)錄模板鏈cDNA。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Fluorescence quantitative polymerase chain reaction，PCR)試劑盒(日本TaKaRa公司)測(cè)定miRNA-92a和miRNA-126。U6作為內(nèi)參物，2-△△CT法計(jì)算兩種miRNA相對(duì)表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清指標(biāo)含量比較 見表1。與對(duì)照組比，觀察組血清TC、TG、LDL-C、VCAM-1、和miRNA-92a含量明顯增加，血清HDL-C、KLF2、miRNA-126含量明顯減少，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表1 兩組血清指標(biāo)含量比較

2.2 CHD患者不同指標(biāo)和評(píng)分間相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析顯示，CHD患者血清miRNA-126含量與KLF2呈顯著正相關(guān)(r=0.374，P<0.01)，與VCAM-1含量和Gensini評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.297、-0.349、-0.362，P<0.01)；血清miRNA-92a含量與KLF2呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.316，P<0.01)，與VCAM-1含量和Gensini評(píng)分呈顯著正相關(guān)(r=0.262、0.315、0.377，P<0.01)。

2.3 血清miRNA-92a和miRNA-126在CHD診斷中的價(jià)值 見圖1。miRNA-126診斷CHD的曲線下面積(Area under curve，AUC)為0.962[95%置信區(qū)間(Confidence interval，CI)：0.783～0.941)]，敏感度90.0%，特異度82.1%；miRNA-92a的AUC為0.923(95%CI：0.866～0.979)，敏感度85.7%，特異度93.3%。

圖1 miRNA-126和miRNA-92a診斷CHD ROC曲線

2.4 血清miRNA-126和miRNA-92a預(yù)測(cè)冠脈中重度病變的價(jià)值 見圖2。miRNA-126預(yù)測(cè)冠脈中重度病變的AUC為0.897(95%CI：0.802～0.993)，敏感度93.5%，特異度84.0%；miRNA-92a預(yù)測(cè)AUC為0.866(95%CI：0.769～0.964)，敏感度80.0%，特異度90.3%。

圖2 miRNA-126和miRNA-92a預(yù)測(cè)冠脈中重度病變ROC曲線

3 討 論

CHD是一類嚴(yán)重威脅人類健康和生命安全的心血管疾病，給家庭和社會(huì)帶來沉重負(fù)擔(dān)，是目前國內(nèi)居民死亡的第2大因素。動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)所致冠脈狹窄是CHD發(fā)生的主要病理基礎(chǔ)[11]。AS則是慢性炎癥病變。miRNA作為內(nèi)源性微小RNA，通過其轉(zhuǎn)錄水平的蛋白表達(dá)，從而參與機(jī)體物質(zhì)和能量代謝、免疫炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖凋亡、血管損傷修復(fù)等生理病理過程。近年來，諸多研究證實(shí)，多個(gè)miRNA分子與血管損傷修復(fù)相關(guān)，參與AS發(fā)生發(fā)展[12-14]。

miRNA-126是一種特異性表達(dá)于人體血管內(nèi)皮細(xì)胞的微小RNA之一，位于染色體9q34.3，與血管生成有關(guān)[15]。血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)襯于血管內(nèi)皮，保護(hù)血管功能，同時(shí)是機(jī)體重要內(nèi)分泌組織，可通過分泌各種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、炎癥介質(zhì)等，調(diào)節(jié)血管功能。單核細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附作用的增強(qiáng)是AS炎癥性反應(yīng)的早期表現(xiàn)之一。miRNA-126可通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞中VCAM-1合成分泌，抑制單核細(xì)胞的黏附作用，從而抑制AS病情進(jìn)展[16-17]；在血管缺氧和受損時(shí)，上調(diào)miRNA-126表達(dá)水平能激活血管內(nèi)皮祖細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)新生血管形成和受損血管修復(fù)[18]。本研究顯示，與對(duì)照組比，CHD患者血清miRNA-126含量明顯下降，VCAM-1表達(dá)水平升高，血清miRNA含量與VCAM-1水平和Gensini評(píng)分呈明顯負(fù)相關(guān)，該結(jié)果與郭觀華等報(bào)道相似[4]。miRNA-92a是一種位于染色體13q13，內(nèi)含miRNA-17～92的基因簇，其表達(dá)高度保守，且存在極強(qiáng)組織特異性。研究證實(shí)，miRNA-92a除與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)外，還參與內(nèi)皮細(xì)胞損傷和AS過程[19-20]。本研究顯示，與對(duì)照組比，CHD患者血清miRNA-92a含量明顯增加，KLF2表達(dá)水平下降，血清miRNA含量與KLF2水平顯著負(fù)相關(guān)，與Gensini評(píng)分明顯正相關(guān)。提示，miRNA-12下調(diào)表達(dá)和miRNA-92a上調(diào)表達(dá)均與冠脈病變發(fā)生發(fā)展密切，前者可通過抑制VCAM-1表達(dá)，減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥性損傷，影響AS進(jìn)程和CHD病情發(fā)展[6]；而后者則可通過抑制KLF2表達(dá)，破壞血管功能穩(wěn)定性，阻礙內(nèi)皮系統(tǒng)形成，加速AS形成和CHD病情進(jìn)展[21]。ROC曲線分析進(jìn)一步證實(shí)，miRNA-126和miRNA-92a異常表達(dá)在CHD臨床診斷及冠脈病變程度預(yù)測(cè)方面均具有良好價(jià)值。

綜上所述，CHD患者血清中miRNA-126表達(dá)水平降低，miRNA-92a表達(dá)水平升高，且其表達(dá)水平變化與冠脈病變程度顯著相關(guān)，可作為CHD診斷及病情進(jìn)展?fàn)顩r預(yù)測(cè)的可靠指標(biāo)。