探討循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)在乳腺癌患者預后判斷中的應用價值

吳慧

1.山東衛(wèi)康醫(yī)學檢驗有限公司，淄博市精準基因檢測關鍵技術重點實驗室，山東淄博 255000；2.山東省遺傳性疾病基因檢測技術應用示范中心，山東濟南 250000

乳腺癌是女性常見并發(fā)癥，我國每年約有超過200萬新增乳腺癌患者。 目前該病的治療方法包括手術、化療、放療、內(nèi)分泌治療以及分子靶向治療等，早期乳腺癌患者可通過根治術治愈， 但是由于早期乳腺癌無特異性癥狀，因此很多患者在確診時已經(jīng)發(fā)展為中晚期，錯過最佳手術時間，因此多采取以手術+化療為主的治療方案[1]。 但是患者在治療中所表現(xiàn)出的療效有個體差異，因此需要科學評估患者的化療效果，從而為后續(xù)治療方案確定提供有效依據(jù)。 循環(huán)腫瘤細胞常見于多種惡性腫瘤患者， 在健康人群和其他疾病患者中的水平較低。 有研究指出[2]，循環(huán)腫瘤細胞在乳腺癌臨床診斷、治療及預后評估中具有較好的應用價值。 因此，該文方便選取2017 年1 月—2019 年2 月374 例乳腺癌患者，針對循環(huán)腫瘤細胞在乳腺癌患者預后判斷中的應用價值展開分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取374 例乳腺癌患者，年齡為28～72 歲，平均為（50.4±5.1）歲，所有患者經(jīng)病理組織活檢確診為乳腺癌，TNM 分期為：Ⅱa 期 34 例、Ⅱb 期 152 例、Ⅲa 期132 例、Ⅲb 期 64 例。 納入標準：無其他惡性腫瘤及轉移灶、血尿常規(guī)檢查正常、肝腎功能正常。 排除標準：合并凝血障礙、急慢性炎癥、自體免疫性疾病。 該次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準， 所有患者均對該次研究知情并簽署同意書，并經(jīng)倫理委員會批準。

1.2 方法

所有患者化療方案選擇FEC 方案，用藥方法為：第1 天和第 8 天靜脈滴注 5-Fu（國藥準字 H33022622），計量為500 mg/m2；第1 天靜脈滴注吡柔比星（國藥準字H10930105），劑量為 50 mg/m2；第 1 天和第 8 天靜脈滴注環(huán)磷酰胺（國藥準字H20084627），計量為500 mg/m2。3 周為1 個療程，連續(xù)治療3 個療程后進行療效評價。

循環(huán)腫瘤細胞檢測方法： 患者清晨空腹采取7.5 mL肘靜脈血并放置于EDTA 試管備用。 使用PBS 緩沖液稀釋后將靜脈血裝入聚蔗糖泛影葡胺細胞分層液試管，以3 500 r/min 離心處理25 min，吸附血沉層，然后加入5 mLPBS 緩沖液，然后以2 500 r/min 離心處理6 min，分離上清液， 再加入0.5 mLPBS 緩沖液和1 mL 固定液，標記后放入4℃冰箱冷藏30 min，以2 300 r/min 離心處理3 min，取上清液加入4 mL 重懸細胞PBS 液，然后以2 300 r/min 離心處理3 min。 血液樣本加入70 μL血清PBS 液，然后加入10 μLFcR 封閉，之后加入CD45和CK18 抗體。 最后使用流式細胞儀檢測。

1.3 觀察指標

統(tǒng)計患者的臨床療效， 同時比較不同化療效果患者化療前后CTCs 計數(shù)的差異，并采用Spermans 相關分析法分析CTCs 與乳腺癌化療效果的相關性。 該次研究臨床療效參照WHO 關于實體瘤判斷標準，分為完全緩解：病灶完全消失；部分緩解：腫瘤直徑縮小超過30%；疾病穩(wěn)定：腫瘤直徑縮小程度＜30%；疾病進展：腫瘤直徑增大＞20%后出現(xiàn)新發(fā)病灶。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 16.0 統(tǒng)計學軟件予以數(shù)據(jù)處理，計量資料以（）表示，行t 檢驗；計數(shù)資料以頻數(shù)和百分比(%)表示，行 χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌患者的臨床療效

該次研究中374 例患者中經(jīng)規(guī)范治療后， 完全緩解105 例，部分緩解141 例，病情穩(wěn)定68 例，病情進展60 例，見表 1。

表1 374 例乳腺癌患者的化療結局

2.2 不同結局乳腺癌患者化療前后CTCs 計數(shù)變化

完全緩解與部分緩解患者化療前后的CTCs 計數(shù)相比病情穩(wěn)定和病情進展患者明顯更低， 差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表 2。

表2 不同結局乳腺癌患者化療前后CTCs 計數(shù)變化[()，個]

表2 不同結局乳腺癌患者化療前后CTCs 計數(shù)變化[()，個]

化療結局 化療前 化療后t 值 P 值完全緩解部分緩解病情穩(wěn)定病情進展6.5±0.6 7.1±0.8 11.8±2.1 12.1±2.3 1.2±0.2 2.0±0.4 4.6±1.1 5.6±1.4 6.652 5.263 5.165 5.024 0.046 0.042 0.041 0.040

2.3 相關性分析

通過Spermans 相關分析法分析，CTCs 計數(shù)與乳腺癌患者化療效果呈正相關性（r=0.426，P＜0.05）。

3 討論

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤， 對女性患者的生活質(zhì)量與生命安全造成了較大的威脅。 根據(jù)我國衛(wèi)生部門統(tǒng)計報告指出， 乳腺癌是我國女性惡性腫瘤中發(fā)生率最高的癌癥，尤其是上海北京等一線城市，呈持續(xù)增長的趨勢。 乳腺癌是一種激素依賴性惡性腫瘤，與生物因素、遺傳因素以及理化因素有密切的相關性，雖然目前仍未明確該病的發(fā)生機制，但是多數(shù)學者認為[3]多種癌癥基因和細胞因子參與該病的發(fā)生和進展。 雖然該病的發(fā)生率不斷升高，但是隨著醫(yī)學技術的進步，該病的病死率也不斷下降，除了早期診斷和治療外，外科手術聯(lián)合放化療的綜合治療方案提高了患者的臨床療效[4]。 早期乳腺癌患者可以實施根治術，但對于中晚期患者主要是采取化療為主的治療方案。 化療主要是通過敏感化療藥物的使用，加速腫瘤細胞凋亡[5]。 在治療過程中需要密切觀察患者的病情變化， 對于化療效果不佳的患者，需要轉為使用其他治療方案，避免疾病的進一步進展。 因此需要采用有效的觀察指標來評價乳腺癌患者的化療效果。

乳腺癌作為一種全身性疾病， 在腫瘤形成后就可能出現(xiàn)轉移的風險，從而影響患者的預后情況。 雌激素受體、 孕激素受體以及人類表皮生長因子受體2 是目前乳腺癌常用的觀察指標， 能夠指導臨床治療和預后評估[6]。 但是這些指標不適合進行連續(xù)監(jiān)測，因此在動態(tài)療效評價方面的應用效果有限。 需要積極尋找新的觀察指標[7]。 循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）是指從腫瘤組織脫離或因為診療操作進入外周血液的腫瘤細胞， 這些細胞能夠通過血液進入其他組織和器官， 并且通過間質(zhì)上皮轉化實現(xiàn)遠處轉移[8]。CTCs 檢測與傳統(tǒng)乳腺癌標志物檢測相比具有穩(wěn)定性高的優(yōu)勢， 且與其他檢查方法相比，具有創(chuàng)傷小、可重復性好、不受疾病分期影響的優(yōu)勢。 有研究[9]指出，CTCs 在乳腺癌臨床診斷中具有較好的應用效果，能夠提高乳腺癌檢出率，采用CTCs 檢測的敏感性為87.6%， 特異性為93.2%， 陽性預測率為100.0%， 陰性預測率為86.2%與該次研究結果一致，該次研究中 CTCs 檢測的敏感性為85.6%， 特異性為92.7%，陽性預測率為100.0%，陰性預測率為85.7%。該次研究中完全緩解與部分緩解患者化療前后的CTCs計數(shù)相比病情穩(wěn)定和病情進展患者明顯更低（P＜0.05），通過Spermans 相關分析法分析，CTCs 計數(shù)與乳腺癌患者化療效果呈正相關性（r=0.426，P＜0.05），這說明預后好的患者化療前后的CTCs 計數(shù)相比于預后不好患者要更低，提示CTCs 計數(shù)高的患者往往預后較差，在臨床治療中需要加強此類患者的病情觀察。

隨著臨床醫(yī)學對乳腺癌研究深入， 遠端轉移是影響乳腺癌患者預后的主要原因。 遠端轉移的主要因素為腫瘤細胞從血液進入其他組織器官， 因此可以根據(jù)這一原因，利用外周血檢測循環(huán)中腫瘤細胞的數(shù)量，評價患者的預后情況[10]。同時外周血作為一個采集方便的樣本，采集難度小，可隨時進行檢查，若能夠從外周血中發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞，可以根據(jù)CTCs 計數(shù)指導患者的治療[11]。腫瘤細胞從組織脫離進入血液之后在24 h 內(nèi)會凋亡，僅有不到0.1%腫瘤細胞仍有活性， 雖然這些腫瘤細胞數(shù)量較少，且不一定會最終形成轉移灶，但是只有腫瘤細胞進入血液之后才會完成腫瘤遠端轉移， 是影響乳腺癌患者預后的重要基礎[12]。同時該方法與活檢樣本相比，外周血采集方便，患者對檢查的耐受性高，采血途徑多。因此，CTCs 能夠作為評價乳腺癌患者療效的重要指標，觀察患者有無復發(fā)風險。

綜上所述，化療前CTCs 計數(shù)低的乳腺癌患者往往預后較好，且化療后乳腺癌患者CTCs 明顯下降，循環(huán)腫瘤細胞在乳腺癌患者預后判斷中具有較好的應用價值，可在臨床推廣使用。