高強度電磁輻射對電子對抗部隊官兵外周血淋巴細胞的影響

劉艷麗，冉向陽，王縛鯤，賀政新,馬彥華

免疫系統是機體抵御外來病原體及有效防止腫瘤形成和生長的重要防線，其中淋巴細胞是構成免疫系統的主要細胞類別，可分為許多表型與功能不同的群體;這些淋巴細胞亞群在免疫應答過程中相互協調、相互制約，在維持機體內環境的穩定中起著重要的作用。在外界因素影響下，淋巴細胞可在數量、形態及組成比例方面發生變化，通過對淋巴細胞的檢測可了解機體的免疫狀態，對觀察病情和判斷預后具有指導意義。

大顆粒淋巴細胞(large granular lymphocyte, LGL)是一種胞質豐富的大型淋巴細胞，細胞體積較大，直徑10～15 μm，核呈圓形或腎形，胞質量豐富,胞質內含有大小不等(粗、細或塵樣)、數量不一的紫紅色嗜天青顆粒[1]。LGL在免疫監視、免疫防御中起著重要作用，可作為評價機體自然殺傷免疫狀態的一個重要指標[2-3]。

電子對抗是為削弱、破壞敵方電子設備的使用效能，保護己方電子設備的使用效能而采取的各種措施和行動的統稱[4]。現代戰爭條件下，電子對抗會貫穿整個戰斗過程，電磁輻射在戰場環境中幾乎無處不在，高強度電磁輻射對軍事作業人員的影響日益受到重視。電磁輻射是能量以電磁波形式從輻射源發射到空間的現象，研究發現電磁輻射可對機體造血系統、神經系統、生殖系統產生影響，甚至誘發腫瘤[4-6]。本研究回顧性分析了某電子對抗部隊官兵外周血淋巴細胞數量及組成的變化情況，旨在了解電磁輻射對機體免疫功能的影響，以期為制定平戰時電磁輻射的防護標準提供依據。現報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2020年3—4月參加電子對抗部隊為期1個月軍事演習任務的某部官兵78例為研究對象。①納入標準：軍事演習前體檢身體、心理健康者；均接受強電磁輻射暴露1個月；對本研究知情并簽署同意書。②排除標準：檢測前1周有發熱、咽痛、全身乏力等癥狀者；1周內有服藥情況；自身免疫性疾病史；乙肝表面抗原陽性。按上述納入標準最終選取45例接受強電磁輻射暴露1個月官兵為觀察組。同時選取同駐地無強電磁輻射暴露史體檢健康的官兵44例為對照組。2組性別、年齡、體重指數、吸煙史比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 2組納入者一般情況比較

1.2方法

1.2.1血細胞分析：分別于演習任務結束后第3、90天采集2組空腹靜脈血2 ml，EDTA-K2抗凝，取1 ml使用日本Sysmex XT-4000i全自動血細胞分析儀進行外周血細胞計數，包括白細胞數、淋巴細胞百分率及絕對值檢測；同時制備血涂片觀察LGL形態。采用配套試劑和配套質控物進行檢測。另取1 ml用于外周血淋巴細胞亞群分析。

1.2.2LGL形態觀察:取適量的外周血制作頭、體、尾分明的血涂片，室溫自然干燥后，滴加5滴瑞氏-吉姆薩染液A液(貝索公司)，覆蓋整個血膜;1 min后滴加10滴瑞氏-吉姆薩染液B液，輕吹混勻，靜置染色15 min;流水沖去多余染液，干燥后于顯微鏡油鏡下觀察LGL形態。計數100個淋巴細胞中LGL數量，由血常規淋巴細胞絕對值可計算出LGL絕對值。為保證判斷標準和結果的一致性，該項檢查由同一位高年資細胞形態學專業技師完成。

1.2.3淋巴細胞亞群分析：使用Beckman Coulter XL4流式細胞儀(美國Beckman Coulter公司)進行外周血淋巴細胞亞群分析，操作步驟嚴格按照儀器及試劑說明書進行。將淋巴細胞可分為總T細胞(CD3+)、CD4+T細胞(CD3+CD4+)、CD8+T細胞(CD3+CD8+)、B細胞(CD3-CD19+)及NK細胞(CD3-、CD16+/CD56+)，記錄各淋巴細胞亞群含量以百分比報告。FACS Lysing紅細胞裂解液，單克隆抗體：CD8-PE/CD4-FITC/CD3-PC5 標記三色熒光素抗體，CD3-FITC/CD(16+56)-PE標記抗體，CD19-ECD均購自美國Beckman Coulter公司。

2 結果

2.1LGL形態表現 LGL體積較大，直徑為10～15 μm，核呈圓形或腎形，胞質量豐富，胞質內含有大小不等(粗、細或塵樣)、數量不一的紫紅色嗜天青顆粒。見圖1。

圖1 顯微鏡下4個不同視野范圍的LGL形態(瑞氏-吉姆薩染色×1000)

2.2軍事演習結束后第3、90天血細胞及淋巴細胞亞群比較

2.2.1血細胞比較:與軍事演習結束后第3天比較，軍事演習結束后第90天2組白細胞、淋巴細胞百分比及絕對值、LGL百分比及絕對值差異均無統計學意義(P>0.05)。與對照組比較，軍事演習結束后第3、90天，觀察組LGL百分比和絕對值均高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.01)；但2組間白細胞、淋巴細胞百分比及絕對值比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 2組納入者軍事演習結束后第3、90天血細胞數值比較

2.2.2淋巴細胞亞群比較:與軍事演習結束后第3天比較，軍事演習結束后第90天對照組淋巴細胞亞群各指標差異無統計學意義(P>0.05)；觀察組總T細胞、CD8+T細胞減低，CD4+/CD8+比值及B細胞增高，差異有統計學意義(P<0.01)。與對照組比較，觀察組軍事演習結束后第3、90天總T細胞、CD8+T細胞升高，CD4+T細胞、CD4+/CD8+比值及B細胞均降低(P<0.01)，但2組NK細胞比較差異統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 2組納入者軍事演習結束后第3、90天淋巴細胞亞群比較

3 討論

電磁輻射對生物體有致熱效應和非致熱效應，致熱效應可使生物組織升溫，生物分子發生取向作用,熱作用到一定程度可引起嚴重損傷、變性。非致熱效應可影響細胞膜的活動能力,從而影響細胞功能。電磁輻射對機體免疫功能的各個方面都可以造成影響，并且表現出明顯的雙向效應，適宜、短期輻射可對免疫功能起到正向的調節作用；而短期內過量的輻射或一定劑量的長期電磁輻射可抑制機體的免疫功能[7]。

電子對抗部隊作業官兵在日常訓練和軍事演習時均存在電磁輻射暴露可能；軍事演習接近于實戰環境，多種軍事裝備同時工作且防護條件及設施不如營區日常訓練時完備，導致在軍事演習中強電磁輻射暴露機會高于日常訓練時。本研究對剛剛完成為期1個月軍事演習任務的電子對抗部隊作業人員，演習結束后第3、90天進行血常規及淋巴細胞檢測，分別代表強了電磁輻射對電子對抗部隊官兵機體的短期和長期影響[8]。本研究結果顯示，與軍事演習結束后第3天比較，軍事演習結束后第90天，2組白細胞、淋巴細胞百分比及絕對值、LGL百分比及絕對值組間比較差異均無統計學意義。說明電磁輻射對電子對抗部隊官兵白細胞及淋巴細胞數量無顯著影響，與吳瓊等[8]、馬菲等[9]的研究結果一致。本研究結果顯示，軍事演習結束后第3、90天觀察組LGL百分比及絕對值顯著高于對照組。提示電磁輻射是導致LGL增高的主要因素，且外周血LGL增高不是一過性的，是持續存在的。

LGL是細胞形態學上的一種分類，操作人員的主觀判斷對結果影響較大，為做好LGL計數的質量控制，本研究所有的LGL計數均由同一名資深細胞形態學專業技師完成，從始至終保持同一標準，保證了LGL檢驗結果的可靠性。本研究將胞質中含有嗜天青顆粒但胞質量少的直徑<10 μm小淋巴細胞排除在LGL之外[10]；結果顯示對照組演習結束后第3天的LGL百分比為(8.34±5.11)%，略低于張蒼新等[11]、鄒紅霞和王金環[12]分別報道的18～20歲男性人群(9.4±4.2)%及(11.41±5.63)%。可能與所選擇人群的地域、個體差異及操作人員把握標準的尺度差異有關。

LGL特征是胞質中出現多少不等的嗜天青顆粒，顆粒最主要的成分包括穿孔素和顆粒酶B，而穿孔素和顆粒酶B主要存在于細胞毒性T淋巴細胞和NK細胞中，是殺傷靶細胞的主要效應分子[13-14]。文獻報道，LGL包括80%的CD3-的NK細胞和20%CD3+的T細胞[15]；除具體NK細胞效應外，還可分泌多種細胞因子參與調節T、B淋巴細胞，故一般認為LGL計數可反映機體自然免疫力的狀況。文獻報道，LGL數量減少可反映機體非特異免疫力降低；LGL升高意義不明，但可見于細菌或病毒感染、腫瘤、自身免疫性疾病、妊娠高血壓病、大顆粒淋巴細胞白血病等[16-19]。文獻報道，LGL長期升高即LGL計數>0.5×109/L且維持時間超過6個月并伴有貧血、反復感染等臨床癥狀需考慮LGLL[20]，其診斷需結合臨床表現及LGL免疫表型分析和TCR基因重排檢測等指標綜合確定。

淋巴細胞來源于骨髓干細胞，在不同部位分化成熟，包括多種形態相似而功能不同的細胞。機體的細胞免疫主要由T淋巴細胞介導，而體液免疫由B淋巴細胞介導，NK細胞是非特異性免疫的效應細胞。CD3+T細胞數量及比值變化可直接反映機體免疫功能狀態[21]。CD4+T細胞能促進B細胞、T細胞和其他免疫細胞的增殖和分化，促進細胞免疫功能。CD8+T細胞包括抑制性T細胞(Ts)和細胞毒性T細胞(Tc)，Ts細胞在細胞免疫過程中主要發揮負向調節作用。當T細胞亞群數量和功能出現異常時，就會導致免疫紊亂并進一步使機體產生病理變化[22-23]。CD3+、CD4+T細胞及CD4+/CD8+比值降低被認為與機體免疫系統功能減弱有關，CD8+細胞升高可能抑制機體細胞免疫和體液免疫功能。本研究結果顯示，與軍事演習結束后第3天比較，觀察組軍事演習結束后第90天，總T細胞、CD8+T細胞減低，CD4+/CD8+比值及B細胞值增高。表明強電磁輻射能夠改變電子對抗部隊作業人員外周血淋巴細胞亞群的構成比例，導致機體免疫力下降；脫離強電磁輻射環境后，機體免疫力得到了部分恢復。CD4+/CD8+比值及B細胞增高，說明機體在一定范圍內具備自我調節能力。

綜上所述，對于強電磁輻射作業人員，在短期內當外周血淋巴細胞數量尚未發生改變時，LGL數值及比例顯著增高；同時淋巴細胞亞群發生變化，導致機體免疫力下降；脫離強電磁輻射環境一段時間后機體免疫力可得到部分恢復。因此LGL和淋巴細胞亞群分析具備相對更高的靈敏度，可作為電磁輻射對特種作業人員影響的動態觀測指標。關于強電磁輻射作業人員的LGL與淋巴細胞亞群之間的對應關系及意義，尚需進一步研究。