腦膠質瘤術后外周血T淋巴細胞水平變化及其與顱內感染的關系

陳 洋 李琳坤 陳曉靜

腦膠質瘤是一類起于中樞神經系統的惡性腫瘤，約占顱腦腫瘤的40%，該腫瘤侵襲性極高，經手術、化療等傳統治療后，患者復發率高且中位生存期短，預后極差[1]。有研究[2-3]提出免疫治療或能為腦膠質瘤的治療提供新思路，因此，探究治療過程中腦膠質瘤患者的免疫學變化是非常必要的。細胞免疫是機體免疫調節的重要方式之一，T淋巴細胞亞群在多種腫瘤組織中異常表達已被證實[4]。本研究以T淋巴細胞亞群為切入點，探究腦膠質瘤患者手術前后細胞免疫功能改變情況及其與術后顱內感染的關系，希望為膠質瘤患者術后病情評估提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2020年8月醫院收治的92例腦膠質瘤患者，根據膠質瘤級別分為低級組(Ⅰ～Ⅱ期，n=42)、高級組(Ⅲ～Ⅳ期，n=50)。低級組，男性23例，女性19例，年齡28～66歲，平均(42.94±5.23)歲；體力狀況(ECOG)評分(1.66±0.47)分。高級組，男性26例，女性24例，年齡24～65歲，平均(43.52±5.68)歲；ECOG評(1.58±0.49)分。2組一般資料比較無差異(P>0.05)。

1.2 納入、排除標準

納入標準：①經細胞學及組織學病理確診為腦膠質瘤；②患者生存期>3個月；③患者自愿參與本研究。排除標準：①患有其他惡性腫瘤者；②合并嚴重感染及出血者；③術后復發或再次手術；④合并嚴重心肝腎功能障礙者；⑤孕婦或妊娠患者。

1.3 檢測方法

入組患者均在手術前、術后7 d采集靜脈血5 ml，取3 ml 6 h內進行染色處理，使用FACSCalibur流式細胞儀(美國BD公司生產)，FACScomp軟件檢查儀器靈敏度并設置實驗條件，利用MultiSET軟件對CD3+、CD4+、CD8+進行絕對計數分析，計算三者在T淋巴細胞中的百分比以及CD4+/CD8+值。

1.4 顱內感染評價標準

對入組患者行3個月的隨訪，通過住院、門診、電話的形式進行。參考《醫院感染診斷標準》[5]：①腦膜刺激征呈陽性，術后體溫無確切原因保持上升；②腦脊液蛋白含量>0.45 g/l、白細胞>0.01×109/l；③腦脊液細菌培養陽性；④經影像學檢查證實腦部存膿腫病灶。將同時出現①②，具備③、④中任一條即可確診為感染。

1.5 統計學處理

2 結果

2.1 高級組和低級組手術前后T淋巴細胞水平對比

手術前，高級組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著低于低級組，CD8+顯著高于低級組。術后7 d，2組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著高于術前，CD8+顯著低于術前；其中，高級組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著低于低級組，CD8+顯著高于低級組(P<0.05)，見表1。

表1 高級組和低級組手術前后T淋巴細胞水平對比

2.2 感染組和非感染組手術前后T淋巴細胞水平對比

92例行手術治療的腦膠質瘤患者術后顱內感染率為16.30%(15/92)，其中高級別膠質瘤患者11例、低級別膠質瘤患者4例。手術前，感染組和非感染組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD8+比較未見差異(P>0.05)。術后7 d，非感染組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著高于術前，CD8+顯著低于術前；感染組外周血CD4+顯著高于術前(P<0.05)，CD3+、CD4+/CD8+、CD8+較術前未見差異(P>0.05)。術后7 d，感染組外周血CD3+、CD4+均顯著低于非感染組，CD8+顯著高于非感染組(P<0.05)，見表2。

表2 感染組和非感染組手術前后T淋巴細胞水平對比

2.3 外周血T淋巴細胞水平對腦膠質瘤患者術后顱內感染的預測價值

ROC曲線分析顯示，外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+四者聯合預測腦膠質瘤患者術后顱內感染的AUC為0.892，高于單獨檢測的0.814、0.756、0.699、0.748，此時血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的截斷點分別為59.64%、33.37%、30.64%和1.08，見表3，圖1。

表3 外周血T淋巴細胞水平對腦膠質瘤患者術后顱內感染的預測價值

圖1 外周血T淋巴細胞水平評估腦膠質瘤患者術后顱內感染的ROC曲線

3 討論

傳統觀點[6-7]認為中樞神經系統中的腦血屏障可隔絕免疫細胞進入，屬于免疫豁免區域，但隨著研究深入，中樞神經實質可檢測到T淋巴細胞，同時也發現了腦膜淋巴系統的存在，提示中樞神經系統并非完全免疫豁免區，但腦血屏障的確會導致中樞神經系統免疫功能被抑制、應答能力低下[8-9]。除此之外，膠質瘤細胞還能進行多種方式的免疫逃逸，因此機體免疫功能是否正常，將影響膠質瘤的發生發展過程[10-12]。

細胞免疫主要由T淋巴細胞參與，其中CD4+T淋巴細胞可誘導和輔助細胞毒性T淋巴細胞發展成熟，同時增強B淋巴細胞的抗體；CD8+通過自身及抑制因子的作用，抑制抗體的形成，可負向調節免疫反應，二者比值可以反應免疫功能敏感度。本研究中，手術前高級別膠質瘤患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著低于低級組，CD8+顯著高于低級組，以上結果提示，膠質瘤患者免疫抑制情況與腫瘤侵襲能力相關，高級別膠質瘤患者體內免疫抑制情況更嚴重，為腫瘤的增殖轉移提供機會，與既往研究結論一致[13]，考慮原因：中樞神經系統免疫應答能力低下，膠質瘤細胞可在免疫系統未覺察的情況下增殖、轉移，高級別膠質瘤患者外周血中CD4+等T淋巴細胞下調、CD8+上調，機體免疫功能抑制情況更嚴重[14-15]。經手術治療后，腦膠質瘤患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著高于術前，CD8+顯著低于術前，其中高級組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均顯著低于低級組，CD8+顯著高于低級組。以上結果提示，手術治療可以減輕膠質瘤患者免疫抑制情況，可能原因有2種：①腫瘤移除；②手術應激或其它相關因素影響，但具體原因有待實驗探究。

徐春華等[16]的研究認為低級膠質瘤患者的中位生存期顯著高于高級別患者，這是因為腫瘤惡性程度越高、機體免疫抑制情況越嚴重，機體缺少對腫瘤的抑制作用，將直接導致生存期縮短，除此之外，術后生活質量評分、是否開放腦室、是否合并術后感染等都是影響其預后的因素。本研究對入組患者進行隨訪，發現術后顱內感染率為16.30%(15/92)，其中高級別膠質瘤患者感染率22.00%(11/50)略高于低級別感染率9.52%(4/42)，考慮是因為細胞免疫在術后抗感染過程中發揮作用，而高級組患者機體免疫功能抑制嚴重，術后發生顱內感染的風險更高。本研究中，術后7 d感染組外周血CD3+、CD4+/CD8+、CD8+比較未見差異(P>0.05)，提示術后發生顱內感染的患者機體免疫抑制情況無顯著改善；此外，術后7 d感染組外周血CD3+、CD4+均顯著低于非感染組，CD8+顯著高于非感染組(P<0.05)，以上結果提示，與非感染組相比，腦膠質瘤圍術期發生顱內感染的患者機體免疫抑制情況更加嚴重，與既往研究一致[17]。經ROC曲線分析，腦膠質瘤患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+四者聯合預測術后顱內感染的AUC為0.892高于單獨檢測，提示腦膠質瘤患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平對術后發生顱內感染有一定預測價值。

綜上所述，腦膠質瘤患者經手術治療可顯著改善外周血T淋巴細胞水平，高級別膠質瘤患者術后出現顱內感染的比例高于低級別組，圍術期監測患者外周血T淋巴細胞水平有助于評估術后顱內感染情況。