肺腺癌患者血清TSLP、Bcl-2及IL-1α表達水平及臨床意義

邱雪 劉宜鑫 崔魴

(重慶醫科大學附屬第一醫院醫學檢驗科，重慶 400010)

肺癌是我國發病率、死亡率最高的惡性腫瘤[1-2]。肺腺癌是肺癌的主要病理類型，占比達40.9%[3]。盡管肺腺癌在治療方面取得了許多成就，但其總生存期不到5年。肺腺癌對常規放化療和靶向治療的高耐藥性，是導致患者疾病惡化，生存率不高的原因之一。腫瘤免疫治療則是應對肺腺癌廣泛耐藥的新策略。因此，研究腫瘤微環境中與肺腺癌腫瘤免疫機制相關的細胞因子，對尋找腫瘤免疫靶點或腫瘤生物標志物是有益的。

胸腺基質淋巴細胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin，TSLP)是一種多功能細胞因子[4]。近十年來，TSLP在腫瘤中的作用逐漸為人所知，在各種實體瘤[6-8]，包括肺癌[5-9]。進行的實驗和臨床研究結果表明，TSLP和/或其受體在多種腫瘤類型中高表達，并且TSLP與腫瘤的進展、預后相關，是前景廣闊的腫瘤免疫監測點。Bcl-2和IL-1α是與肺癌進展有關的重要細胞因子，且在肺癌腫瘤組織中也存在過表達現象[10-12]。另有研究證據表明，TSLP促進腫瘤進展的機制與IL-1α和Bcl-2相關[13-14]。因此，推測TSLP調控肺癌的機制或與Bcl-2和IL-1α相關。本研究擬檢測肺腺癌患者血清TSLP蛋白表達水平，分析血清TSLP濃度在肺腺癌中的臨床意義，進一步檢測肺腺癌患者血清Bcl-2和IL-1α濃度，探討TSLP、IL-1α及Bcl-2在肺腺癌患者血清水平上的關系，初步分析TSLP對肺腺癌的腫瘤免疫機制與IL-1α、Bcl-2是否相關，為肺腺癌腫瘤免疫機制研究提供參考依據。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2019年9月～2020年6月我院呼吸內科、胸心外科的69例肺腺癌患者為研究對象，其中男性37例，女性32例，年齡32～82歲，平均(60.70±9.29)歲。按照第8版腫瘤-淋巴結-轉移(Tumor-Node-Metastasis，TNM)分期[15]，將患者分為I期32例，Ⅱ期和Ⅲ期共13例，IV期24例。納入標準：通過病理組織檢查或細胞學檢測已經確診的初診未治療肺腺癌癌患者。排除標準：6個月內使用過影響免疫功能的藥物，存在自身免疫性疾病、過敏性疾病、其他惡性腫瘤或免疫缺陷疾病。另選取我院2020年7月健康體檢中心的健康人群31名為對照組。本研究獲得醫院倫理委員會審核并批準。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 收集患者性別、年齡、病理學檢查、腫瘤大小、有無淋巴結轉移、有無遠處轉移、患者已測定的血清肺癌腫瘤標志物(CYFRA211、proGPR、SCC、CEA、NSE)濃度相關數據。

1.2.2 標本采集及檢測 所有患者采集標本前均未進行手術治療、放化療、靶向治療，無菌抽取外周靜脈血3 mL加入促凝管中, 室溫靜置20 min, 3000 r/min離心10 min, 分離血清, 置于1.5 mL EP管, 于-80℃低溫冰箱凍存, 嚴格按照試劑和說明書，使用雙抗體夾心ELISA法定量檢測血清中TSLP、IL-1α及Bcl-2濃度?；颊叻伟┠[瘤標志物采用雙試劑夾心磁性粒子化學發光法，羅氏公司自動電化學發光免疫分析儀, 由重慶醫科大學檢驗科進行檢測。

1.2.3 儀器和試劑 酶標儀(型號：Epoch)；TSLP ELISA試劑盒(武漢云客隆科技股份有限公司，批號：L200612375)；IL-1α ELISA試劑盒(武漢云客隆科技股份有限公司，批號：L20051926)；Bcl-2 ELISA試劑盒(武漢云客隆科技股份有限公司，批號：L200612399)。

2 結果

2.1 兩組一般資料情況 69例肺腺癌患者一般資料，見表1。對照組中，男性17例，女性14例；年齡28～79歲，平均(51.39±9.88)歲。

表1 肺腺癌患者臨床資料[n(×10-2)]

2.2 兩組血清TSLP、IL-1α、Bcl-2濃度的比較 與對照組相比，肺腺癌患者的血清TSLP濃度更高，差異有統計學意義(P<0.05)；而血清IL-1α濃度在兩組中水平相似，差異無統計學意義(P>0.05)；肺腺癌患者的血清Bcl-2濃度較對照組降低(P<0.05)，見表2。

表2 TSLP、IL-1α、Bcl-2在肺腺癌組和對照組的血清濃度

2.3 肺腺癌患者血清TSLP、IL-1α、Bcl-2濃度與臨床病理資料分析 對肺腺癌患者血清TSLP、IL-1α、Bcl-2濃度與臨床病理資料進行單因素分析發現, Ⅱ+Ⅲ期、Ⅳ期肺腺癌患者較I期肺腺癌患者血清TSLP濃度升高，有淋巴結轉移(N1-N3)的患者較無淋巴結轉移(N0)的患者血清TSLP濃度增加，而且腫瘤直徑≥3 cm的肺腺癌患者血清TSLP表達比腫瘤直徑<3 cm者增加(均P<0.05)。然而，腺癌患者的血清Bcl-2、 IL-1α與腫瘤分期、淋巴結轉移、遠處轉移、腫瘤直徑并無顯著相關性，且組間濃度沒有顯著差異(均P>0.05)，見表3。

表3 肺腺癌患者血清TSLP、IL-1α、Bcl-2水平與臨床資料分析

2.4 血清TSLP、IL-1α、Bcl-2濃度與臨床病理特征的相關性 肺腺癌患者血清TSLP濃度與腫瘤TNM分期、腫瘤大小、淋巴結轉移的相關性有統計學意義(P<0.05)，與CYFRA21-1、CEA存在顯著正相關，見表4。肺腺癌患者血清Bcl-2濃度亦與血清CEA濃度呈正相關，與腫瘤分期、肺癌標志物等均無明顯相關性，見表4。

表4 肺腺癌患者血清TSLP、Bcl-2、IL-1α濃度與臨床病理特征相關性

2.5 肺腺癌患者血清TSLP、IL-1α和Bcl-2濃度間的相關性分析 Spearman相關性分析顯示，肺腺癌患者的血清TSLP濃度與血清IL-1α及Bcl-2無相關性，見表5。

表5 肺腺癌患者血清TSLP濃度與血清IL-1α和Bcl-2濃度相關性

3 討論

TSLP參與了乳腺癌[16-18]、胰腺癌[19-20]、肺癌[9]或胃癌[21-22]等多種實體瘤腫瘤微環境中的腫瘤免疫過程，它通過Th2依賴型或非Th2依賴型機制，直接促進腫瘤生長、轉移或促腫瘤血管生成發揮促腫瘤的作用[5]?；A研究表明[9]，TSLP蛋白在肺腫瘤組織中表達增加，通過上調腫瘤微環境中CD4+CD25+FOXP3+調節性T細胞，進而抑制淋巴細胞的活性幫助腫瘤細胞逃脫宿主的免疫監視，且TSLP表達與肺癌病理類型、TNM分期、腫瘤大小和淋巴結轉移相關。趙華[8]等的臨床研究進一步證實，肺癌組織TSLP蛋白表達陽性率明顯高于肺良性病變和非瘤肺上皮，且與腫瘤大小和淋巴結轉移有關。本研究也發現，肺腺癌患者的血清TSLP濃度亦顯著高于健康人群，并且血清TSLP水平與腫瘤TNM分期、腫瘤大小、淋巴結轉移具有獨立相關關系，TSLP在中晚期(Ⅱ-Ⅳ期)或有淋巴結轉移的肺腺癌患者中血清濃度更高，提示血清TSLP水平與肺腺癌病情密切相關，可能是肺腺癌進展的促進因子。高血清TSLP濃度可能預示肺腺癌處于中晚期或存在淋巴結轉移，可能預示不良臨床結局，是評估肺腺癌疾病進展和預后的潛在生物標志物，并且血清TSLP濃度檢測是一種方便且無創的檢測手段。

血清腫瘤標志物在肺癌腫瘤的早期篩查、病理分型及預后判斷等方面具有重要價值[23]，研究進一步分析了肺腺癌患者血清TSLP濃度與肺癌腫瘤標志物之間的關系。結果顯示, 血清TSLP濃度與腫瘤標志物CEA、CYFRA21-1具有良好相關性。CEA和CYFRA21-1是診斷非小細胞肺癌的重要生物標志物[24]，血清CYFRA21-1水平還與腫瘤分期、病程及預后有關[25-26]，CEA在肺腺癌中陽性率有明顯升高[27]。肺腺癌患者血清TSLP濃度與血清CEA、CYFRA21-1的相關性表明，血清TSLP濃度有作為肺癌病理分型預測的生物標志物的潛力。

TSLP可由肺上皮細胞組成性表達[4]，但肺癌組織中TSLP表達上調的機制及促腫瘤生長機制尚不完全清楚。TSLP表達可由促炎性刺激物誘導，如IL-1[28-29]。IL-1α是IL-1的一種亞型[30]，Kuan等[13]研究報道腫瘤細胞來源的IL-1α誘導腫瘤微環境中TSLP表達[13-14]，而TSLP進一步誘導腫瘤細胞高表達Bcl-2來支持腫瘤細胞生存及轉移[13]。Brunetto等[14]也指出拮抗IL-1α可以下調TSLP水平并改善胰腺癌總體存活率。這些研究證據提示，在肺癌腫瘤環境中IL-1α可能會誘導TSLP表達上調，并可能通過Bcl-2蛋白發揮促腫瘤活性。因此，研究初步檢測了肺腺癌患者血清中IL-1α濃度，結果表明，血清IL-1α水平在肺腺癌患者及健康人群中無顯著差異。血清TSLP濃度與IL-1α的相關性分析結果提示，TSLP與IL-1α無相關關系。Behrens等[30]的研究結果表明，在肺腺癌組織中的IL-1α以胞質型為主，而胞質型IL-1α需要在細胞壞死性凋亡后大量分泌，所以在體液中通常難以檢測到[31]，這可能是影響肺腺癌患者血清IL-1α水平的原因，進而影響了血清TSLP濃度與血清IL-1α水平相關性的分析。本研究也測定了肺腺癌患者血清Bcl-2水平，結果表明，血清Bcl-2濃度在肺腺癌患者中有顯著降低，亦與血清TSLP濃度不存在相關性。這一結果提示，在腫瘤微環境中TSLP可能并不通過調節Bcl-2蛋白表達發揮促腫瘤作用。本研究的細胞因子檢測局限在血清水平，無法肯定腫瘤微環境中TSLP與IL-1α及Bcl-2的關系，要明確肺腺癌腫瘤微環境中TSLP與IL-1α及Bcl-2的確切機制還有待后續體外實驗進一步論證。

4 結論與啟示

血清TSLP濃度與肺腺癌疾病進展密切相關，可作為肺腺癌病情的評估指標，是潛在的腫瘤預后預測和標志。血清TSLP濃度與血清肺癌腫瘤標志物CYFRA21-1和CEA有明顯正相關性，提示TSLP在肺腺癌診斷方面具有潛在價值。本研究通過檢測血清TSLP與 IL-1α和Bcl-2水平，初步驗證了TSLP在血清水平上與IL-1α和Bcl-2不相關，但肺癌的發生發展和腫瘤免疫涉及多種因素和細胞因子， TSLP與 IL-1α和Bcl-2在腫瘤微環境中的來源及作用機制尚不肯定，有待進一步實驗驗證。研究細胞因子在肺癌中的生物學效應，還應考慮在病理組織亞型中的差異，這有助于未來制定更有針對性的治療策略。