SENP1、SENP5、SENP6蛋白在子宮內膜腺癌組織中的表達及意義*

靳榮, 李紅芳, 南壽山, 姜忠敏, 吳曉蕊

天津市第五中心醫院 1婦產科， 3消化科， 4病理科(天津 300450)； 2蘭州市第一人民醫院婦產科(甘肅蘭州 730050)

子宮內膜腺癌是一種原發于子宮內膜表面上皮的惡性腫瘤，圍絕經期女性好發，是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一[1]。有報道顯示，我國每年新發子宮內膜腺癌接近20萬例，且發病率呈升高趨勢[2]。目前子宮內膜腺癌的發病機制仍未完全明確。小泛素相關修飾物是一類存在于真核生物中的高度保守的蛋白，參與蛋白質泛素化相關修飾過程[3]。而小泛素相關修飾物特異性蛋白酶則是在蛋白質泛素化過程中特異性催化小泛素相關修飾物與靶蛋白分離的酶[4]。近年來研究發現，小泛素相關修飾物特異性蛋白酶(SENP)在腫瘤發生、發展中發揮重要作用[5]。SENP1、SENP5、SENP6是SENPs家族的重要成員，已有研究發現，SENP1在前列腺癌、胃癌中呈現高表達； SENP5在舌鱗狀細胞中呈現高表達；SENP6在惡性膠質瘤中呈現高表達[6-8]。但三者在子宮內膜腺癌中的表達情況尚無相關報道。本研究分析SENP1、SENP5、SENP6蛋白在子宮內膜腺癌組織中的表達及其臨床意義，旨在探討SENP1、SENP5、SENP6蛋白在子宮內膜腺癌的發生、發展中的作用，并對診斷治療提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月至2019年10月我院收治的子宮內膜腺癌病例80例，納入標準：(1)所有病例均經高年資病理醫生診斷確診為子宮內膜腺癌；(2)術前未經放化療；(3)不合并其他系統惡性腫瘤；(4)無自身免疫疾病；(5)臨床病歷資料完整。年齡40～78歲，平均(61.38±8.56)歲；國際婦產科聯盟臨床分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期29例、Ⅲ期19例、Ⅳ期12例；組織學分級：G1級27例、G2級31例、G3級22例；肌層浸潤程度：<1/2 52例、≥1/2 28例；有淋巴結轉移18例、無淋巴結轉移62例。

不典型增生62例，納入標準：(1)所有病例均經高年資病理醫生診斷確診為子宮內膜不典型增生；(2)無放化療史；(3)不合并其他系統惡性腫瘤；(4)無自身免疫疾??；(5)臨床病歷資料完整。年齡42～77歲，平均(60.15±8.21)歲。

增殖期子宮內膜58例。納入標準：(1)所有病例均經高年資病理醫生診斷確診為增殖期子宮內膜；(2)無放化療史；(3)不合并其他系統惡性腫瘤；(4)無自身免疫疾病；(5)臨床病歷資料完整。年齡40～79歲，平均(61.02±8.87)歲。

3組在年齡構成比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會同意，患者對研究知情同意。

1.2 主要試劑 兔抗人SENP1、SENP5、SENP6單克隆抗體(美國Abcam公司)；免疫組化試劑盒(福建邁新生物有限公司)；3%過氧化氫、DAB顯色劑、酶標羊抗兔聚合物(北京中杉金橋生物有限公司)。

1.3 方法 術中取病變處標本，經10%中性甲醛固定24 h后進行石蠟包埋，切成4 μm連續切片。切片經二甲苯脫蠟、梯度乙醇溶液脫水、高溫高壓抗原修復、3%過氧化氫去除內源性過氧化物酶、加入山羊血清，然后分別加入兔抗人SENP1、SENP5、SENP6單克隆抗體，4℃下過夜(反應時間≥8 h)，加入生物學二抗，加入SABC工作液后進行DAB顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水透明，封片后在顯微鏡下觀察。用PBS代替生物學一抗進行陰性對照，以說明書陽性對照樣品作為陽性對照。

1.4 結果判別[9]在顯微鏡下觀察切片，當細胞內出現黃色或棕黃色顆粒為陽性。SENP1、SENP5、SENP6蛋白陽性均主要表達與細胞質內，每個切片隨機觀察10個高倍鏡(400倍)視野，按照陽性細胞所占百分比計分：≤5% 0分，6%～25% 1分，26%～50% 2分，51%～75% 3分，>75% 4分。按照細胞染色程度計分：無著色 0分，淡黃色 1分， 棕黃色 1分，黃褐色3分。將兩項結果乘積作為總分，≥4分為陽性，<4分為陰性。

2 結果

2.1 3組組織中SENP1、SENP5、SENP6蛋白表達情況比較 子宮內膜腺癌組子宮內膜組織中SENP1、SENP5、SENP6蛋白陽性率顯著高于不典型增生組、增殖期子宮內膜組；不典型增生組子宮內膜組織中SENP1、SENP5、SENP6蛋白陽性率顯著高于增殖期子宮內膜組(P<0.05)，見表1和圖1。

表1 3組組織SENP1、SENP5、SENP6蛋白陽性表達情況比較 例(%)

注:A：SENP1在增殖期子宮內膜組中的表達; B：SENP1在不典型增生組中的表達; C：SENP1在子宮內膜腺癌組中的表達；D：SENP5在增殖期子宮內膜組中的表達;E：SENP5在不典型增生組中的表達; F：SENP5在子宮內膜腺癌組中的表達；G：SENP6在增殖期子宮內膜組中的表達; H：SENP6在不典型增生組中的表達; I：SENP6在子宮內膜腺癌組中的表達

2.2 子宮內膜腺癌組織中SENP1、SENP5、SENP6蛋白表達情況與臨床病理特征的關系 臨床分期Ⅲ+Ⅳ期、組織學分級G3級、肌層浸潤≥1/2、有淋巴結轉移者SENP1、SENP5、SENP6蛋白陽性率顯著高于臨床分期Ⅰ+Ⅱ期、組織學分級G1、G2級、肌層浸潤<1/2、無淋巴結轉移者(P<0.05)，不同年齡分組SENP1、SENP5、SENP6蛋白陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 子宮內膜腺癌組織中SENP1、SENP5、SENP6蛋白陽性表達情況與臨床病理特征的關系 例(%)

2.3 子宮內膜腺癌組織中SENP1、SENP5、SENP6蛋白表達的相關性 Spearman相關分析顯示，子宮內膜腺癌組織中SENP1蛋白表達與SENP5、SENP6蛋白表達呈正相關(r=0.708,P=0.000;r=0.773,P=0.000)，SENP5蛋白表達與SENP6蛋白表達呈正相關(r=0.632,P=0.000)，見表3～5。

表3 子宮內膜腺癌組織中SENP1、SENP5蛋白表達的相關性 例

3 討論

近年來研究發現蛋白質泛素化相關修飾是真核生物普遍存在的過程，通過蛋白修飾可以調節靶蛋白的活性、定位、數量，并與其他生物學大分子相互作用參與生命活動過程[10]。蛋白質泛素化相關修飾過程是一個動態可逆的修飾過程，主要包括活化、結合、連接和修飾幾個基本步驟，其逆向的去蛋白質泛素化相關修飾過程則由SENPs家族催化完成[11]。研究發現，SENPs家族主要由兩大類組成，其中SENP1、SENP2具有C末端異肽酶水解活性，可以對無活性的泛素化相關修飾蛋白前體進行切割，而SENP5、SENP6則主要促進泛素化相關修飾蛋白與靶蛋白的解離過程[12-13]。Wei等[14]研究發現，在前列腺癌組織中存在SENP1的高表達。Burdelski等[15]報道SENP1可以通過激活c-Jun信號通路進而增加細胞周期蛋白cyclin D1的表達，促進腫瘤的發生。目前已有研究發現在骨肉瘤和肝癌中存在SENP5的高表達，SENP5可以通過激活DNA損傷應答激酶的去泛素化相關修飾作用，促進細胞的惡性轉化[16-18]。而在白血病患者中則存在SENP5的低表達。SENP6可以促進轉錄因子叉頭盒蛋白去泛素化相關修飾，促進胃癌的發生、發展。但目前三者在子宮內膜腺癌中的表達情況尚未見相關報道[19]。

本研究應用免疫組化法檢測子宮內膜腺癌、不典型增生、增殖期子宮內膜組織中SENP1、SENP5、SENP6表達情況，結果顯示子宮內膜腺癌組子宮內膜組織中SENP1、SENP5、SENP6蛋白陽性率顯著高于不典型增生組、增殖期子宮內膜組，提示SENP1、SENP5、SENP6在子宮內膜腺癌發生中起到促進作用。結合相關文獻分析其原因可能與以下幾方面有關：(1)SENP1可能通過激活c-Jun等信號通路增加細胞周期蛋白的表達，促進子宮內膜腺癌的發生[20]；(2)SENP5、SENP6可能通過促進蛋白去泛素化相關修飾，進而促進子宮內膜癌的發生[21]；(3)SENP1可能通過調控β-鏈蛋白(β-catenin)進而調控wnt信號通路，促進腫瘤的發生和侵襲[19]；(4)SENP6通過抑制泛素連接酶導致抑癌基因失活，促進細胞惡性轉變[22]。不典型增生組子宮內膜組織中SENP1、SENP5、SENP6蛋白陽性率顯著高于增殖期子宮內膜組則提示子宮內膜腺癌的發生是一個多步驟、長時間的漸進的過程，在這一過程中多種腫瘤相關信號通路被逐漸激活，相關蛋白逐漸改變，因此也涉及到SENP1、SENP5、SENP6蛋白表達陽性率的逐漸升高。近年來盡管子宮內膜腺癌在環境因素、信號通路和癌基因水平均取得了較大進展，但對于分化程度較差、肌層浸潤和淋巴道轉移的子宮內膜腺癌治療仍不容樂觀，尋找子宮內膜腺癌生物學標志進而輔助診斷和治療成為臨床的熱點[23]。本研究對子宮內膜腺癌組織中SENP1、SENP5、SENP6蛋白表達情況與臨床病理特征的關系進行了分析，結果顯示SENP1、SENP5、SENP6蛋白的表達與患者年齡無關，而與子宮內膜腺癌的臨床分期、組織學分級、浸潤及淋巴道轉移相關。目前研究表明腫瘤的浸潤和轉移是一個主動過程，涉及腫瘤細胞從原發灶游出、腫瘤細胞突破基底膜、進入血管或淋巴管，并游走到其他組織和器官進行生長等過程[24]。本研究結果提示SENP1、SENP5、SENP6可能通過激活某些信號通路促進子宮內膜腺癌的發展、浸潤和轉移。也提示三者在子宮內膜癌輔助診斷和指導治療中具有一定價值。進一步分析發現，子宮內膜腺癌組織中SENP1蛋白表達與SENP5、SENP6蛋白表達呈正相關，提示三者可能具有協同作用，其具體機制尚需進一步研究證實。

綜上所述，子宮內內膜腺癌組織中存在SENP1、SENP5、SENP6蛋白的異常高表達，其水平與子宮內膜腺癌的臨床分期、組織學分級、浸潤及淋巴道轉移相關，且三者表達呈正相關，SENP1、SENP5、SENP6可能在子宮內膜癌輔助診斷和指導治療中具有一定價值。