GATA-3和EGFR在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性及其與分子亞型、臨床病理資料的關(guān)系

李星枝，王艦梅，肖秀麗，蘇亭，葉入裴，龍漢安

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，四川 瀘州 646000)

2018年全球癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告[1]顯示，目前乳腺癌的發(fā)病率和死亡率均居女性癌癥發(fā)病和死亡的首位，且其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。GATA-3屬于鋅指結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)錄因子GATA家族，參與人體多種組織的形態(tài)發(fā)生和分化，與膀胱癌、涎腺癌的發(fā)展相關(guān)[2]。在乳腺組織中，GATA-3不僅參與調(diào)節(jié)導(dǎo)管的發(fā)生和腺泡的分化，而且對(duì)乳腺腔上皮細(xì)胞的分化至關(guān)重要，有研究[3]表明，在正常乳腺腔上皮細(xì)胞及乳腺癌中GATA-3都表現(xiàn)出與雌激素受體(ER)高度相關(guān)。研究[4]表明，表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)在調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起著重要作用，其中包括腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及合成代謝的調(diào)節(jié)。EGFR靶向治療已被應(yīng)用在肺癌和大腸癌的治療標(biāo)準(zhǔn)中，有許多研究長(zhǎng)期致力于EGFR是否能作為乳腺癌的有效治療靶標(biāo)，但目前仍未達(dá)到理想結(jié)果。盡管有較多研究評(píng)價(jià)GATA3和EGFR在乳腺癌中的表達(dá)情況，但GATA3和EGFR在乳腺癌中的相關(guān)性尚不明確，同時(shí)兩者與乳腺癌形態(tài)特征、分子亞型的研究仍較少。本研究主要通過免疫組化檢測(cè)GATA-3和EGFR在乳腺癌中的表達(dá)情況，分析兩者在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性，并探討其與分子亞型、臨床病理資料之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科2017年1月至2018年12月浸潤性乳腺癌石蠟標(biāo)本215例，所有標(biāo)本均經(jīng)兩位高年資病理診斷醫(yī)師盲法確診。215例患者均為女性，年齡26～84歲，中位年齡為51歲。其中腫瘤直徑≤2 cm者65例，>2 cm者150例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者112例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者103例；非特殊型浸潤性癌202例，特殊型浸潤性癌13例。所有患者術(shù)前均未行放、化療、激素及中藥等治療。從病理科檔案室提取蠟塊對(duì)應(yīng)的HE染色、GATA-3、EGFR、ER、PR及HER-2、Ki-67和P53免疫組化切片。根據(jù)2019年版中國抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范[5]分子亞型標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分型，215例標(biāo)本中Luminal A型46例(21.4%)、Luminal B型103例(47.9%)、HER-2過表達(dá)型49例(22.8%)、三陰性17例(7.9%)。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化檢測(cè) 所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4 μm切片，采用EnVision兩步法對(duì)每例標(biāo)本進(jìn)行GATA-3、EGFR、ER、PR及HER-2、Ki-67和P53的免疫組化檢測(cè)。用已知陽性的乳腺癌組織切片為陽性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替第一抗為陰性對(duì)照。所用抗體GATA-3、EGFR、ER、PR、HER-2、Ki-67及P53均購自福州邁新公司。

1.2.2 結(jié)果判讀 GATA-3陽性標(biāo)準(zhǔn)為任何數(shù)量的腫瘤細(xì)胞核著色，EGFR陽性標(biāo)準(zhǔn)為任何數(shù)量的腫瘤細(xì)胞胞膜著色[6](圖1)。ER和PR陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)為陽性部位定位于核且著色細(xì)胞≥1%[7]。HER-2的免疫組化染色評(píng)價(jià)采用0～+++評(píng)分系統(tǒng)[8]，染色強(qiáng)度+++者為陽性，其中染色強(qiáng)度++者需進(jìn)一步進(jìn)行FISH檢測(cè)明確是否有HER-2基因的擴(kuò)增。Ki-67的判讀以腫瘤中≥14%的腫瘤細(xì)胞核著色為高表達(dá)水平，P53陽性標(biāo)準(zhǔn)為任何數(shù)量的腫瘤細(xì)胞核著色[9]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析與處理。GATA-3與EGFR在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析法；計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，GATA-3與EGFR在不同分子亞型及臨床病理資料間的表達(dá)差異比較采用χ2檢驗(yàn)、連續(xù)性校正χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GATA-3與EGFR在乳腺癌中的表達(dá)相關(guān)性

在215例浸潤性乳腺癌中，GATA-3與EGFR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.215，P=0.002)。見表1。

表1 GATA-3與EGFR在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性分析[n(%)]

2.2 GATA-3、EGFR的表達(dá)與乳腺癌分子亞型之間的關(guān)系

在215例浸潤性乳腺癌組織中GATA-3的陽性率為96.2%(207/215)，EGFR的陽性率為45.6%(98/215)。不同分子亞型中GATA-3、EGFR的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且GATA-3在Luminal A型中的陽性率最高，在三陰性乳腺癌中陽性率最低(P<0.05)，EGFR在HER-2過表達(dá)型中陽性率最高，在Luminal A型中陽性率最低(P<0.05)。見表2、圖1。

表2 GATA-3、EGFR在乳腺癌的表達(dá)及與分子亞型的關(guān)系[n(%)]

2.3 GATA-3、EGFR的表達(dá)與乳腺癌臨床病理資料之間的關(guān)系

GATA-3的表達(dá)與ER、PR表達(dá)相關(guān)，ER、PR陽性者GATA-3陽性率高于ER、PR陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。EGFR的表達(dá)與ER、PR、HER-2表達(dá)相關(guān)，ER、PR陽性者EGFR陽性率低于ER、PR陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HER-2陽性者EGFR陽性率高于HER-2陰性者，且EGFR的表達(dá)與WHO分級(jí)、Ki-67表達(dá)高低相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GATA-3、EGFR的表達(dá)與乳腺癌患者年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無脈管或神經(jīng)侵犯、病理類型和P53表達(dá)無明顯相關(guān)性，GATA-3的表達(dá)與非特殊型浸潤性癌WHO分級(jí)、HER-2、Ki-67表達(dá)無明顯相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

3 討論

2015年St．Gallen國際乳腺癌會(huì)議明確提出，根據(jù)分子亞型的不同對(duì)患者進(jìn)行分類治療是目前乳腺癌的基本治療原則，根據(jù)個(gè)體化對(duì)患者行輔助化療和或內(nèi)分泌治療能夠降低腫瘤復(fù)發(fā)率、提高總生存率[5，10]。而乳腺癌是一種異質(zhì)性腫瘤，不同分子亞型之間患者的臨床表現(xiàn)、治療反應(yīng)和預(yù)后都存在著顯著差異[5，10-11]。

鋅指結(jié)構(gòu)GATA家族一共包括GATA-1至GATA-6六個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，在人體多種組織中均有表達(dá)，其中GATA-3參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞、交感神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟、乳腺等器官的發(fā)育，更有研究[12-13]表明，GATA-3的無效突變對(duì)胚胎具有致死性，因此其被認(rèn)為是胚胎發(fā)育過程中的重要影響因素。目前研究[14]表明，GATA-3的突變與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)，具有腫瘤抑制作用。大多數(shù)原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌均陽性表達(dá)GATA-3(80～90%)，但在三陰性乳腺癌中其表達(dá)率較低(67%)[15]。本研究GATA-3在乳腺癌中的陽性率為96.2%，接近Miettinenet等[16]的報(bào)道。另外，GATA-3可能是促進(jìn)ER對(duì)激素反應(yīng)的獨(dú)立轉(zhuǎn)錄因子，它與ER的表達(dá)高度相關(guān)，但并不屬于ER信號(hào)通路的一部分[2-3]。本研究結(jié)果顯示，GATA-3在乳腺癌中的表達(dá)與EGFR呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.215，P=0.002)，這與Cakir等[17]報(bào)道結(jié)果一致。本研究結(jié)果還顯示，GATA-3的表達(dá)與ER、PR表達(dá)均相關(guān)，且ER、PR陽性者GATA-3陽性率(100%、99.2%)高于ER、PR陰性者(89.6%、90.5%)，與Fang等[3]的報(bào)道結(jié)果接近，提示GATA-3與ER之間的高度相關(guān)性使其有很大可能性成為臨床對(duì)激素治療反應(yīng)的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

研究[18]表明，在很多乳腺癌亞型中發(fā)現(xiàn)有EGFR的過表達(dá)，其中三陰性乳腺癌和炎癥性乳腺癌中約半數(shù)病例都過表達(dá)EGFR。在本研究中，EGFR在乳腺癌組織中的陽性率為45.6%，且與ER、PR、HER-2表達(dá)相關(guān)，ER、PR陽性者EGFR陽性率(27.5%、31.2%)低于ER、PR陰性者(77.9%、72.9%)，HER-2陽性者EGFR陽性率(65.6%)高于HER-2陰性者(37.7%)。有基因表達(dá)譜分析和免疫組化研究[18-19]表明，在三陰性乳腺癌中EGFR的表達(dá)率為50%～70%，而且其低表達(dá)水平與轉(zhuǎn)移率低相關(guān)。近70%的浸潤性乳腺癌發(fā)生了骨轉(zhuǎn)移，而轉(zhuǎn)移的病例中大多數(shù)是ER陽性的腫瘤，這也提示EGFR和ER可能在乳腺癌骨轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了作用。在三陰性乳腺癌和炎性乳腺癌中EGFR通過與凋亡信號(hào)之間的連接能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化學(xué)藥物的敏感性，因而EGFR有很大可能性成為化學(xué)藥物的增敏劑應(yīng)用于乳腺癌中，同時(shí)對(duì)防止腫瘤的轉(zhuǎn)移可能有價(jià)值。

此外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)GATA-3和EGFR在乳腺癌四種分子亞型中的表達(dá)均有差異(P<0.001)。GATA-3在Luminal A和Luminal B型中均高表達(dá)，在三陰性乳腺癌中表達(dá)率最低；EGFR在HER-2過表達(dá)型中陽性率最高，在Luminal A型中陽性率最低。在Tang等[14]的研究中，GATA-3的表達(dá)與Luminal型乳腺癌相關(guān)，本研究結(jié)果一致。同時(shí)，GATA-3的表達(dá)與ER、PR高度相關(guān)，這也可能是GATA-3在Luminal型乳腺癌中高表達(dá)的原因。在四種分子亞型中，Luminal A型預(yù)后較其他亞型更好[20]，因此GATA-3也有望成為乳腺癌的預(yù)后指標(biāo)之一。在Cakir等[17]的研究中，GATA3陽性者約85.6%都為非特殊型浸潤性乳腺癌，其中GATA3陽性的乳腺癌通常分化較良好，較小可能性發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在本研究中，EGFR的表達(dá)與WHO分級(jí)、Ki-67表達(dá)高低相關(guān)(P<0.05)，但并未發(fā)現(xiàn)GATA-3、EGFR的表達(dá)與乳腺癌患者年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無脈管或神經(jīng)侵犯、病理類型和P53的表達(dá)具有明顯相關(guān)性(P>0.05)，這可能與本實(shí)驗(yàn)中的樣本數(shù)量較少以及地域之間的差異相關(guān)，因此仍需繼續(xù)增加樣本量、綜合多項(xiàng)因素分析以進(jìn)一步探討其差異。

綜上，GATA-3和EGFR在乳腺癌中存在負(fù)相關(guān)性，且兩者在乳腺癌不同分子亞型之間的表達(dá)存在明顯差異，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。GATA-3的表達(dá)與ER、PR表達(dá)相關(guān)，EGFR的表達(dá)與ER、PR、HER-2、WHO分級(jí)、Ki-67表達(dá)高低相關(guān)，因此在乳腺癌的病理診斷中，除了必要的ER、PR及HER-2的檢測(cè)，聯(lián)合免疫組化檢測(cè)GATA-3、EGFR也非常有意義，對(duì)于乳腺癌的分子分型和預(yù)測(cè)個(gè)體激素治療反應(yīng)有一定參考價(jià)值，亦有希望為乳腺癌患者的個(gè)體化治療和預(yù)后評(píng)估提供更多的依據(jù)，以及尋求更多的治療思路和方法。