SLC6A4基因多態性位點rs2020936與中國西北部人群原發性失眠關系的研究

陳文娟 謝宇平 周麗雅 王旭斌 王靜 馬薇 惠培林 王金鳳 蘇曉艷 郭斌 陳雪萍 范杰 趙媛 楊軍 張尚麗 劉瑜

(1 甘肅中醫藥大學，蘭州，730000； 2 甘肅省人民醫院睡眠醫學中心，蘭州，730000； 3 蘭州大學基礎醫學學院醫學遺傳研究所，蘭州，730000)

原發性失眠(Primary Insomnia，PI)是指以睡眠障礙(難以入睡和/或維持睡眠困難或睡眠后精力未恢復)為幾乎唯一的癥狀，每周至少出現3晚睡眠困難，時間在3個月以上，并具有臨床意義的苦惱及社交、職業或其他功能的損害；排除由其他睡眠與精神/心理障礙以及軀體的疾病、乙醇或藥物等導致的失眠[1]。研究證明長期失眠可引起焦慮、抑郁、記憶力下降[2]、免疫力低下，罹患心血管疾病、腦血管疾病、高血壓、糖尿病、癡呆、精神疾病和骨骼肌疾病的風險增加[3]，并增加心臟病死亡率[4]。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月至2019年12月甘肅省人民醫院睡眠醫學中心收治的原發性失眠患者78例作為觀察組，另選取同期的體檢中心的健康人群82例作為對照組，對受試者進行多導睡眠監測及量表評估，采用飛行質譜法對SNP位點進行基因分型，SPSS 22.0統計軟件進行分析。

1.2 納入標準 所有病例按照《美國精神障礙診斷與統計手冊》第5版(DSM-5)的PI診斷標準納入。

1.3 排除標準 1)受試者伴有嚴重軀體疾病患者，如高血壓、心臟病、甲狀腺功能異常、糖尿病等；2)有其他明確的失眠原因，如近期有重大心理應激而致失眠者；3)PSG監測結果為主觀性失眠患者；4)PSG監測結果AHI>15以及不適合量表評估的低齡和高齡人群均被排除。本研究經過我院倫理委員會批準并經患者及其家屬知情同意。

1.4 研究方法

1.4.1 SNP位點選擇 DNA提取、SNP分型、引物合成從HapMap計劃以及美國國立生物技術信息中心(NCBI)單核苷酸多態性數據庫選擇5-HTT基因功能性SNP：1)在非翻譯區，我國人群中MAF>5%；2)在5′啟動子2 kb以內，我國人群中MAF>5%。依此標準選擇SLC6A4基因位點rs2020936，該位點位于5′端非翻譯區。采用TIANamp Blood DNA Kit血液基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)提取DNA。應用TYPER4.0軟件獲取原始數據及基因分型圖，然后進行生物信息分析得到最終SNP基因分型檢測數據,飛行質譜技術進行基因測序。基因分析設計軟件(Assay Designer3.1)，進行引物設計合成。引物序列為F:5′-ACGTTGGATGTAAATGGTGAGCAGGGTGAG-3′；R:5′-ACGTTGGATGGGCTCAAGAATGCAAACACC-3′(北京博淼生物科技公司)。

1.4.2 量表檢測、PSG監測 所有受試者都在專業醫生的指導下進行了以下測試以評估其心理狀態。失眠嚴重程度指數(Insomnia Severity Index，ISI)、匹茲堡睡眠質量指數表(Pittsburgh Sleep Quality Index，PSQI)：通過上述2個問卷量表，篩選PI組入組人群。狀態-特質焦慮問卷(STAI)、Beck抑郁自評量表排除焦慮相關失眠及抑郁相關失眠，并且評估PI患者因失眠導致的焦慮及抑郁狀態，記錄兩周睡眠日記。對所有病例進行整夜睡眠監測。記錄的時間不少于7 h。

1.5 統計學方法 采用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析，采用兩獨立樣本t檢驗，方差分析，卡方檢驗，logistic回歸對數據進行統計分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Rs2020936基因型頻率、等位基因頻率分布 2組患者Rs2020936基因型頻率、等位基因頻率分布比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；對其進行性別分組后比較，差異無統計學意義(P>0.05)。原發性失眠患者多導睡眠監測結果與rs2020936同基因型間進行統計分析發現，不同的基因型間REM(%)睡眠(P=0.006)期及睡眠效率(%)(P=0.001%)之間比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。logistic回歸分析結果顯示，SNP位點rs2020936不是中國西北部人群原發性失眠的危險因素(P=0.735)。見表2。

表1 多態性位點rs2020936基因型與相關量表和多導睡眠監測結果分布

表2 可能與原發性失眠相關因素的logistic回歸分析

3 討論

PI目前缺少診斷特異性指標，屬排除性疾病，因而造成了診斷和治療上的不確定性。

由于無創傷行中樞神經組織學及分子水平研究目前尚無有效方法，通過臨床表型結合血液客觀檢測基因多態性的方法在提供分子機制線索中就顯得尤為重要。Su S等[5]在研究SLC6A4基因如何影響抑郁癥狀與IL-6之間的關系時發現rs2020936與Beck抑郁量表顯著相關。Ishii T等[6]發現其與COPD發病率顯著相關。但本研究沒有發現SLC6A4基因多態性rs2020936與原發性失眠癥之間的相關性。值得注意的是，該突變與原發性失眠癥患者的睡眠效率有關。因此，我們推測突變導致5-HTT蛋白異常表達，基因個體突觸間隙5-HT再攝取能力降低，繼而導致患者睡眠質量不佳。本研究旨在為原發性失眠的研究提供更多思路，為今后其基因診斷和藥物的個體化治療提供更多參考。