長治地區人群中HLA-B*1502基因頻率分析

黎紅，王玉芬，楊陽，李小梅

(1.長治醫學院研究生學院，山西 長治 046000；2.長治醫學院附屬和平醫院，山西 長治 046000)

卡馬西平(CMZ)是一種電壓依賴性鈉通道阻滯劑，能夠使動作電位興奮期延長，因此能夠抑制丘腦腹前核至額葉神經沖動的傳導。臨床上常用于治療癲癇、三叉神經痛、躁郁癥及慢性疼痛等，藥效明顯且價格低廉，但其有效血藥濃度范圍窄，藥物不良反應發生率高，嚴重時甚至可能致死[1-2]。卡馬西平導致的皮膚不良反應是一種涉及皮膚黏膜的全身綜合征，通常起病急，臨床表現為全身皮膚黏膜的剝脫。2014年，世界變態反應組織(WAO)按皮膚剝脫面積占體表總面積的比例，將卡馬西平導致的皮膚不良反應分為以下3類：史蒂芬斯-強森綜合征(SJS)(累及皮膚面積<10%)、SJS/中毒性表皮壞死松解癥(TEN)(累及皮膚面積10%～30%)、TEN(累及皮膚面積>30%)。目前認為SJS/TEN是對藥物的遲發型超敏反應，該病臨床罕見，發病率約為5.76 例/百萬人，亞裔和非裔人群的發病率為白種人群的兩倍，無性別差異，1～10 歲兒童和80 歲以上患者發病風險最高。而在亞洲人群中，卡馬西平是最常引發SJS/TEN的藥物，占藥物引發皮膚不良反應的25%～33%[3]。2004年Chung等[4]首次報道卡馬西平致SJS/TEN與人類白細胞抗原(HLA)-B*1502基因具有關聯性。HLA基因是由一組緊密連鎖的復等位基因位點組成，具有高度多態性，主要功能是將藥物及其代謝產物包裝，呈遞給T細胞，使T胞活化，從而使自身淋巴細胞或皮膚角質形成細胞發生凋亡[5]。目前全國各地(多為南方地區)的科研人員對卡馬西平所致SJS/TEN與HLA-B*1502的相關性進行研究，證實了卡馬西平所致的皮膚不良反應與該基因有強烈相關性，同時還發現各地區該基因的頻率存在很大差異[6-14]。例如在東南亞國家，HLA-B*1502的基因頻率為1%～8%，而在亞洲東北部和歐洲地區，HLA-B*1502的基因頻率則低于0.4%[15-16]。目前我國很多地區，尤其是北方地區尚缺乏對HLA-B*1502流行性的明確研究，未有研究分析過山西地區HLA-B*1502等位基因的基因頻率。本文采用兩種方法對347 例需服用卡馬西平的患者及100名健康人進行HLA-B*1502基因篩查，旨在了解和分析長治地區人群中HLA-B*1502的基因頻率，探討在日常臨床實踐中進行HLA-B*1502篩查的必要性，為研究中國不同地區該基因頻率提供參考數據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在2018年10月—2019年3月就診的患者中篩選研究對象。若患者診斷為糖尿病周圍神經痛、癲癇、三叉神經痛或者其他疾病導致的神經痛，不考慮其是否正在服用卡馬西平，且不考慮其是否正在服用其他藥物即入選為觀察組。共347 例患者符合條件，其中糖尿病周圍神經痛197 例(男114 例，女83 例)，癲癇78 例(男49 例，女29 例)，三叉神經痛53 例(男26 例，女27 例)及其他神經痛19 例(男9 例，女10 例)。另外隨機抽取健康人100 名，設為對照組，其中男52 例，女48 例。所有研究對象均采集靜脈血作為樣本，以乙二胺四乙酸(EDTA)作為抗凝劑，提取DNA。同時記錄研究對象的臨床診斷、性別、年齡以及樣本編號。

1.2 HLA-B*1502基因型的檢測

采用熒光聚合酶鏈式反應溶解曲線法(PCR法)和核酸序列測定法(測序法)檢測每份樣本。HLA-B*1502基因檢測試劑盒(廈門致善生物科技股份有限公司提供)采用熒光PCR熔解曲線法，首先用引物擴增人HLA-B基因，然后進行熔解曲線分析，最后根據不同基因型模板與特定探針雜交體熔解過程中的DNA熔解溫度(Tm值)的差異來判斷樣本是否帶有HLA-B*1502基因。核酸序列測定是目前臨床上DNA突變檢測的參比方法，同時在HLA-B*1502基因檢測中廣泛使用，可以檢測出基因突變的具體位點和堿基變化，從而直接得到基因型，不僅分辨率高，而且可大規模進行。此外，其精確度可滿足本研究的要求。

1.3 數據分析

數據采用SPSS 25.0統計軟件進行統計分析，分類數據使用兩獨立樣本的卡方檢驗分析其相關性，以P<0.05為差異有統計學意義。HLA-B*1502陽性率=HLA-B*1502陽性樣本數/樣本總數×100%，HLA-B*1502基因頻率=HLA-B*1502等位基因數/(2×樣本總數)×100%。測序法是國際組織相容性工作組(IHWG)公布的基因序列分析方法，精確度高，因此作為金標準來評價PCR法的診斷性能，以靈敏度、特異性、準確性、陽性預測值、陰性預測值及Kappa值作為評價指標。

2 結 果

觀察組中HLA-B*1502陽性9 例，對照組中HLA-B*1502陽性3 例。通過計算可得出：在長治地區，需服用卡馬西平的患者中HLA-B*1502的陽性率為2.59%，基因頻率為0.013，而這兩項數據在健康人中分別為3.00%與0.015，在長治地區總研究人群中為2.68%與0.013(見表1)。入選樣本中，男性HLA-B*1502陽性率為3.20%，女性為2.03%。年齡、性別及臨床診斷等因素對HLA-B*1502陽性率的影響比較差異無統計學意義(P>0.05)(見表2)。

以測序法為金標準，通過比較PCR法檢測結果與測序法的一致性評價其檢測性能，對比結果見表3。經比較得出：PCR的臨床靈敏度(真陽性率)=12/12×100%=100%，95%置信區間為1；臨床特異性(真陰性率)=435/435×100%=100%，95%置信區間為1；總符合率=(12+435)/447×100%=100%，95%置信區間為1；對檢測結果進行Kappa一致性檢驗，計算Kappa值。與測序法結果比對：PA=(435+12)/435=1；Pe=[(435+0)(435+0)+(12+0)(12+0)]/4 472=0.95，Kappa=1，其中PA為“實際一致率”，Pe為“理論一致率”。

目前關于HLA-B*1502基因頻率的研究多為區域性調查，缺乏對該基因明確的流行性研究。現將中國報道過的地區及世界部分國家報道過的HLA-B*1502基因頻率的結果總結于表4和表5。結果發現，在不同的國家和不同地區之間HLA-B*1502基因頻率是不同的。從世界范圍來看，中國、印度、菲律賓、泰國及印度尼西亞的人群中HLA-B*1502基因頻率較高，歐美及日韓該基因頻率較低。從中國范圍來看，南方地區人群HLA-B*1502基因頻率普遍高于北方地區[17]。

3 討 論

由本文可知，在不同國家和不同地區之間HLA-B*1502基因頻率是不同的，其中中國漢族人在世界范圍內屬于基因頻率較高人群。2007年美國食品和藥物管理局(FDA)建議亞裔人群在使用卡馬西平前需篩查HLA-B*1502等位基因，之后，各國的用藥指南也紛紛給出在服用卡馬西平

表1 所有研究人群中HLA-B*1502的陽性率及基因頻率

表2 相關影響因素及其P值

表3 兩種方法的方法學比較

表4 中國部分地區人群HLA-B*1502的基因頻率

表5 部分國家人群HLA-B*1502的基因頻率[17]

前進行基因篩查的建議。研究[18]顯示中國臺灣地區的HLA-B*1502篩查已經大大降低了卡馬西平導致的SJS/TEN發病率，從0.24%(2005年—2008年)下降至0(2008年—2011年)。如今HLA-B*1502基因雖然被認為是中國漢族人群中CBZ-SJS/TEN的基因標志物，但大部分中國內陸尚未對首次服用卡馬西平的患者開展HLA-B*1502等位基因的檢測。HLA-B*1502陽性的患者服用卡馬西平發生嚴重皮膚不良反應的概率較高，且致死率也較高，應該引起臨床醫生的重視，建議患者在首次服用卡馬西平治療之前，進行HLA-B*1502等位基因的檢測，以預防嚴重皮膚不良反應的發生，促進臨床合理用藥。

本研究使用兩種方法進行HLA-B*1502的基因測定，一種是定性的PCR法，一種是測序法。結果顯示，在檢測的447 例樣本中沒有出現不一致性。PCR法與金標準測序法相比，HLA-B*1502基因臨床靈敏度為100%，特異性為100%，總符合率為100%，Kappa系數為1。說明PCR法與測序法有較高的一致性。PCR法由于取材方便、操作較簡便、檢測速度較快、成本較低，更適用于臨床大批量的快速篩查工作。