藥食兩用的中藥復合組合物對 即時解酒保肝的作用研究

◎ 夏祎稚，邵衛樑

（上海交大昂立股份有限公司，上海 200233）

世界衛生組織（WHO）指出，酒精中毒是當今世界范圍內的公害之一[1]。飲酒過度現象以及由酒精所引發的疾病和問題也日益增多，且進入體內的乙醇大部分經肝臟代謝，對肝臟具有較大的損害，例如，使肝細胞膜表面的脂質過氧化以及破壞肝細胞膜。長期飲酒還會使肝細胞內的微管和線粒體等結構受到破壞，使細胞內的代謝紊亂，產生具有細胞毒性的代謝產物，導致肝細胞腫脹、壞死等。

針對過量飲酒或酒精中毒等，目前已有相關的化學藥和中藥，但是化學藥本身也需要經肝臟代謝，代謝過程對肝臟同樣具有毒性，故西藥、化學藥只能在即時解決酒醉的不良反應，不能作為長期調理肝臟的藥品。同樣地，針對解酒的中藥，大部分是根據中藥古方文獻記載以及根據現代藥理組合形成的中藥復方，雖能暫時緩解頭暈、惡心等癥狀，但很多都含有使人興奮的活性成分，只能治標不能治本。

因此本研究注重于所述組合為國家法規規定屬無毒級別的原料，其中主要原料包括藥食兩用中藥原料（主要包括枳椇子、葛根等）、復配益生菌與維生素等。將上述所述原料組合制備成產品——“甘氧片”。通過多個途徑參與乙醇的代謝過程，降低乙醇對機體的傷害（包括降低乙醇、氧自由基和乙醛對機體的傷害）、調節乙醇代謝過程相關鍵酶活性尤其是提高乙醇脫氫酶活性加速乙醇代謝、提高乙醛脫氫酶活性、降低乙醛對機體傷害。

1 材料與方法

1.1 動物

ICR 小鼠，SPF 級，雄性，體重20 ～25 g（6 ～8 周 齡），50 只。來源：上海市計劃生育科學研究所實驗動物經營部；生產許可證：SCXK（滬）2018-0006；質量合格證編號：20180006022598。

1.2 受試樣品

“甘氧片”產品樣品：由上海交大昂立股份有限公司提供；規格：0.75 g/片；保存條件：4 ℃保存。

1.3 試劑與儀器：

ALC-210.3 電子天平（賽多利斯斯泰帝（上海）貿易有限公司）、PL601-L 電子天平（梅特勒.托勒多公司）、HITACHI 7080 生化檢測儀（日立公司）。

乙醇（批號：20190525，國藥集團化學試劑公司）、羧甲基纖維素鈉（CMCNa，批號：20190303，國藥集團化學試劑公司）、乙醇脫氫酶測試盒（批號：20201229，上海索橋生物科技有限公司）。

1.4 實驗方法

1.4.1 劑量設計

“甘氧片”的成人使用量為9 g·d-1，動物用量為人體的10 倍和20 倍，計算如下：9×10 倍÷60 kg= 1.5 g·kg-1，擬采用1.5 g·kg-1和3 g·kg-1。試驗研究過程 中，考慮樣品的有效性，選擇人體服用量10 倍和 20 倍的兩個劑量，沒有做30 倍劑量組。給藥途徑及容積：口服（PO），25 mL·kg-1[2]。

1.4.2 試劑與受試樣品的配制

試劑配制：50%乙醇；賦形劑：0.5% CMCNa。受試樣品制備：受試樣品按相應人體服用量倍數的濃度溶入賦形劑中。

1.4.3 操作步驟

適應性飼養后，小鼠被隨機分成4 組（正常組、醉酒組、醉酒+樣品10倍量組、醉酒+樣品20倍量組），每組10 個動物。試驗前一日下午小鼠禁食不禁水16 h， 試驗當日上午，各組小鼠稱重后給予賦形劑 （0.5% CMCNa）、受試物進行灌胃（體積25 mL·kg-1）， 0.5 h 后，各組小鼠給予50%乙醇20 mL·kg-1，記錄醉酒潛伏期（灌酒后至翻正反射消失）、醉酒時間（反射消失至反射恢復）。蘇醒后，摘眼球取血，分離血清，測定谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總膽紅素（T-BIL）和堿性磷酸酶（ALP）等肝功能指標；取肝右葉0.3 g 左右，精確稱定，-80 ℃保存，用于測定乙醇脫氫酶。

1.4.4 觀察指標

醉酒潛伏時間：灌酒后至翻正反射消失。醉酒恢復時間：灌酒后至翻正反射恢復。肝功能ALT、AST、T-Bil 、ALP 指標變化。微量法測定肝臟中乙醇脫氫酶活性，結果以每克肝臟組織的催化能力表示，單位為μmol/min/g。

1.4.5 統計分析

數據以“平均數±標準差”表示，采用非成對t-test檢驗，與模型組進行組間比較，p ＜0.05 認為差異有統計意義。

2 結果與分析

2.1 小鼠醉酒誘導時間、醒酒時間及死亡率

各組小鼠給予賦形劑或解酒樣品處理后0.5 h，灌服50%酒精，醉酒誘導時間、醒酒時間和死亡率如表1 所示。受試樣品10 倍劑量組與20 倍劑量組醉酒誘導時間均長于模型組，且與模型組差異有統計意義 （p ＜0.05，p ＜0.01）；醉酒恢復時間，受試樣品10 倍劑量組與20 倍劑量組少于模型對照組（p ＜0.05，p ＜0.05）；從醉酒存活率觀察，20 倍劑量組樣品存活率最高（90%），10 倍劑量組樣品存活率次之（80%），模型組存活率最低（60%），以上結果提示，“甘氧片”具有較好解酒作用。同時能有效提高小鼠存活率，且高劑量組存活率更高，可能與其具有保肝作用有關。

表1 小鼠醉酒存活率、誘導時間和醒酒時間表

2.2 對于醉酒小鼠肝功能指標影響[3]

各組小鼠肝功能指標谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總膽紅素（T-BIL）和堿性磷酸酶（ALP）結果如表2 所示。與正常組相比，給予醉酒誘導的模型組小鼠ALT、AST、TBIL 和ALP 明顯升高（p ＜0.05、p ＜0.001、p ＜0.000 1 和p ＜0.05），表明酒精對肝損傷模型完成建立。與模型組比較：ALT指標，樣品組10 倍劑量和20 倍劑量都顯著性降低 （p ＜0.05、p ＜0.01）；AST 指標，樣品組10 倍量無顯著性差異，20 倍量顯著低于模型組（p ＜0.05）；T-BIL 指標，樣品組10 倍和20 倍量都顯著低于模型組（p ＜0.01、p ＜0.05）；ALP 指標，樣品組10 倍量和20 倍量都顯著低于模型組（p ＜0.05，p ＜0.05）。

表2 小鼠肝功能指標測定結果表

2.3 肝臟中乙醇脫氫酶含量

各組小鼠肝臟中乙醇脫氫酶（Alcohol dehydro- genase，ADH）活性如表3 所示，模型組與正常組相比，乙醇脫氫酶活性差異無統計意義（p=0.715 8），與樣品組10 倍量相比也無顯著性差異，與20 倍量組相比具顯著性差異，樣品20 倍量組肝臟中乙醇脫氫酶活性顯著高于正常組（p ＜0.05）。

表3 小鼠肝臟中乙醇脫氫酶活性表（單位：μmoL/ml/g）

3 結論與討論

乙醇進入人體后約20%通過胃吸收，80%經十二指腸吸收，其中絕大部分（90%以上）的酒精在肝臟代謝。乙醇經乙醇脫氫酶（ADH）和肝細胞內質網的微粒體乙醇氧化酶系統（MEOS），在肝臟中氧化了大部分的乙醇，其代謝途徑的第一階段主要是乙醇在肝細胞質經過ADH 氧化為乙醛，而MEOS 也將乙醇轉變成為乙醛（對于嗜酒者，ADH 已不能全部完成乙醇的代謝，這時機體會生成混合功能氧化酶），其限速酶主要是細胞色素酶系中亞家族P4502E1。第二階段為乙醛在肝細胞線粒體中被乙醛脫氫酶（ALDH）或乙醛氧化為乙酸，后者釋放進入血液，在外周組織中被氧化為二氧化碳和水，進而完成整個代謝過程[4]。

乙醇通過誘導細胞色素氧化物（P4502E1），通過微粒體乙醇氧化途徑，產生大量乙醛和多種氧自由基，經研究證實氧自由基及乙醛是造成肝損傷的重要原因[5]。因此，乙醇在代謝過程中，除乙醇本身對人體的組織細胞的傷害，其代謝過程產生的氧自由基和乙醛對人體也具有巨大危害。許多人飲酒過度，超出人體酒精代謝的限度，要經細胞色素氧化物（P4502E1）代謝，會產生大量氧自由基，更會加深對人體組織細胞特別是肝臟的損傷，以及加快肝臟功能的衰退，對人體的健康構成了極大的威脅。

乙醛對肝臟的主要毒性作用為：降低肝臟對脂肪酸的氧化；影響肝臟微管系統，使微粒蛋白分泌減少，造成脂質和蛋白質在肝細胞中沉積；促進脂質過氧化，使還原型谷胱甘肽（GSH）減少，并增加膠原合成，乙醛又和一些脂質過氧化產物如丙二醛（MDA）等形成蛋白加合物，引起免疫反應，損害細胞骨架功能和細胞與間質的相互作用，從而抑制重要的代謝通路[6]。

乙醛同時也使細胞色素氧化物（P4502E1）高度誘導并激活巨噬細胞，產生大量的·OH，·O2-，和H2O2等自由基。這些氧自由基可使DNA、蛋白質和脂質過氧化，產生線粒體損害（能量產生減少），使肝細胞損傷，發生肝細胞的凋亡和壞死。肝內的枯否細胞和來自血循環的單核細胞在肝損傷后被激活，同時由于酒精使腸道通透性升高，致使循環中腸道來源的內毒素增高，內毒素血癥可能通過枯否細胞、P4502E1 釋放氧自由基、和其他細胞因子包括腫瘤壞死因子（TNF-α）等，不但對肝細胞有損害，而且對肝竇內皮細胞有害，肝竇內皮細胞受損后，可使黏附分子表達增加并釋放許多損害肝細胞的細胞因子，引起循環損傷[6]。

針對乙醇在代謝過程及其產物對人體的傷害，本研究依據中醫藥文獻記載解酒保肝護肝經典藥味及復方、根據乙醇代謝過程對機體的傷害途徑從分子藥理學原理阻止或減少對機體的傷害（包括降低乙醇、氧自由基、乙醛對機體的傷害）、調節過程相關酶活性及通過針對性的提高乙醇脫氫酶活性加速乙醇代謝，提高乙醛脫氫酶活性，降低乙醛對機體傷害。此外組合中增加強抗氧化活性成分，減少因乙醇代謝過程產生的自由基對機體的傷害。以期通過多途徑達到即時解酒，長期調理保肝護肝的目的。

在本研究樣品“甘氧片”中含有藥食兩用中藥成分，其中藥水提物有超強的抗自由基活性，可顯著提高超氧化物歧化酶（SOD）活性，能顯著降低丙二醛（MDA）含量，能提高神經生長因子（nerve growth factor，NGF）、腦源性神經生長因子（brain nerve growth factor，BDNF）表達，改善血液流變學，改善慢性腦缺血大鼠的認知能力，對醒酒具有顯著性效果，其提高NGF 和BDNF 表達機理尚待進一步研究。

樣品中還添加了其他有助于解酒保肝的食品原料，如B 族維生素、維生素C、?；撬岬取＂貰 族維生素可作為機體反應酶的合成原料，可改善脂肪蛋白質的代謝，助消化，并參與體內各種蛋白酶的作用和體內多種新陳代謝反應。充足的B 族維生素，能避免肝脂肪變性，提高肝臟對乙醇的耐受力，消除乙醇和煙焦油等內毒素，保護肝臟，從而具有養肝功效[7]。②維生素C 是一種強還原劑，保護其他抗氧化劑，防治自由基對人體的傷害，保護細胞、解毒、保護肝臟。它還能促進許多體內抗氧化酶的氧化型轉為還原型，從而持續發揮抗氧化作用[8]。③?；撬崾莿游锛毎麅群孔钬S富的含磺酸基的β-氨基酸，可以維持組織滲透壓穩定細胞膜、抗氧化應激、調節免疫力、維持細胞鈣離子水平、保護線粒體、抑制肝細胞活性氧產生以及明顯提高肝臟中ADH 和ALDH 的活性，減少過氧化物酶的釋放，可有效保護肝細胞。同時牛磺酸還可以抑制脂質過氧化，減少MDA 并保護胰島B 細胞功能等廣泛生物學效應；還具有加速乙醇的代謝、抗炎等多種生理功能。

實驗研究結果表明，樣品“甘氧片”在醉酒誘導時間與醒酒時間的行為觀察中，10 倍和20 倍劑量組與模型對照組比較都具顯著性差異，表明具有顯著的解酒作用。肝功能指標（ALT、AST、T-BIL 和ALP）與模型對照組比較，樣品組人體10 倍和20 倍劑量組都各具有改善肝功能指標的顯著性差異。由于本產品具有保護肝臟的作用，可使小鼠在試驗酒精的濃度下，致死率從40%（考慮后續實驗進行，沒有設計高致死率模型）顯著降低至10%。試驗結果中可見，對健康小鼠而言，由于乙醇有對乙醇脫氫酶（ADH）的代償性作用，其代償機理如前所述，乙醇通過誘導限速酶P4502E1，加快乙醇代謝，因此在酒后短期內（2 h），ADH 活性會降低，數小時后，ADH 活性會恢復。本實驗也證明了所述理論。模型組與正常組對照，10 h以后，肝臟乙醇脫氫酶活性無顯著性差異。但“甘氧片”樣品實驗組與正常組比較，20 倍劑量的ADH 指標具有活性提高的顯著性差異，表明實驗樣品對乙醇傷害具有長期的保護肝臟功能作用。

綜上所述，產品“甘氧片”運用各原料的合理配伍，通過多個途徑參與乙醇的代謝過程，降低乙醇及其代謝過程的代謝物對機體的傷害，因此既能即時解酒，又能長期服用以保肝護肝。