QuEChERS 結合液相色譜-串聯質譜法 快速測定雞肉中磺胺類殘留

◎ 呂 警，張建平，崔銀倉

（1.烏魯木齊市農產品質量安全檢測中心，新疆 烏魯木齊 830000；2.新疆昌源水務科學研究院有限公司，新疆 烏魯木齊 830000）

磺胺類獸藥，是一類具有對氨基苯磺酰胺結構的磺胺類獸藥[1]，具有抗菌性[2]，且價格較低，應用效果理想，特別是在食源性動物細菌感染性疾病的預防與治療中，受到了行業人士的青睞。鑒于在動物身上有殘留的磺胺類獸藥，如果人體長時間攝入，就會引發過敏等現象，嚴重者還會出現剝脫性皮炎，嚴重危害到人們的生命健康[3]。隨著時代的發展，食品檢測行業人士經過多年的研究，致力于推出檢測食物殘留磺胺類獸藥的方法，就是希望能夠維護好人們的生命健康。磺胺的分析方法主要有酶聯免疫法[4]、膠體金免疫層析法、毛細管電泳法、表面等離子體共振技術、阻抑速差催化光度法、高效液相色譜法、液相色譜質譜法和高效液相色譜串聯質譜法[5]等。本研究通過開發快速、簡便的樣品前處理方法，建立了雞肉中12 種磺胺的液相色譜-串聯質譜檢測方法，能夠滿足對雞肉樣品中的磺胺類藥物進行快速篩查和定量的 要求。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲醇、乙腈為色譜純，購自上海安譜實驗科技股份有限公司；實驗用水為Milli-Q 高純水；磺胺甲基異惡唑、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺二甲異噁唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺間二甲氧嘧啶和磺胺氯噠嗪，純度均大于97%，均購自Dr.Ehrenstorfer Gmbh 公司。

Xevo TQS-micro 液相色譜質譜聯用儀（美國Waters 公 司）、Milli-Q 超 純 水 儀（美 國Millipore公司）、3-18K 冷凍離心機（德國Sigma 公司）、 KQ-700DE 超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、MS3 渦旋儀（德國IKA 公司）及R-210 旋轉蒸發儀 （瑞士Buchi 公司）。

1.2 液相色譜條件

色譜柱：沃特世ACQUITY UPLC BEH C18 柱 （50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；進樣量：10 μL；柱溫：35 ℃；流速：0.2 mL·min-1；流動相：A 為0.1%甲酸水溶液，B 為乙腈。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序表

1.3 質譜條件

ESI 離子源：正離子掃描；毛細管電壓：1.5 kV；離子源溫度：150 ℃；去溶劑氣溫度：500 ℃；去溶劑氣流量（氮氣）：800 L·h-1；氣簾氣流量：50 L·h-1；多重反應監測模式掃描（MRM）；所有物質的質譜分析參數見表2。

表2 所有待測物質的質譜分析參數表

1.4 樣品處理

稱取2 g（精確至0.01 g）樣品于50 mL 塑料離心管中，加入15 mL 乙腈溶液，再加入緩沖鹽包SBEQ- CA8802-B，渦旋混合5 min，超聲波提取10 min， 5 000 ～10 000 r·min-1離心5 min，吸取上清液加至需要的凈化管，重復提取兩次，合并兩次提取液。

上述提取液按先后順序依次加入到凈化管中，渦旋混合5 min，5 000 ～10 000 r·min-1離心5 min。取出凈化管中所有上清液，40 ℃減壓蒸發至近干。加入1 mL 乙腈-水溶液（1 ∶1）溶解，渦旋混合1 min，過0.22 μm 濾膜，供液相色譜-質譜測定。

1.5 標準曲線配制

分別稱取各磺胺類標準品適量，用甲醇溶解并定容[6]，配成1.0 μg·mL-1的混合標準工作液，逐級稀釋成濃度分別為0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、 0.10 μg·mL-1和0.20 μg·mL-1的混合標準工作液，供液相色譜-串聯質譜聯用儀測定。

1.6 精密度和回收率測定

取雞肉空白基質配制成添加水平為10 μg·kg-1的混合標準溶液，重復進樣6 次，計算回收率和標準相對偏差。

2 結果與分析

2.1 樣品提取方法的優化

相比較于甲醇和丙酮，分析樣品沉淀蛋白質結果，乙腈表現出了良好的使用效果，本次在開展試驗探究中，檢測人員所使用的提取溶劑主要是乙腈。

2.2 質譜分析條件的優化

通過實際調查發現，針對磺胺類物質，其內部含有較多的氨基基團，檢測人員確定的離子化模式主要是ESI+。檢測人員在分析一級質譜環節中，應用的是直接式進樣，面對藥物中的準分子離子峰（[M+H]+），逐一實施針對性的研究，檢測人員嚴格按照行業探究規范，確定好各項數據，保證最終試驗結果具備較高精確性以及可靠性。

通過深入調查可以看出，分析磺胺藥物，其中主要涵蓋m/z 92 和m/z 156 等多種二級質譜離子碎片。通過選取不同的碰撞能量（0 ～40 eV）和表1 梯度洗脫程序對磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶分別進行二級質譜碎片分析，研究發現，分別在30 eV、28 eV的碰撞能量下，能有效分離磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶化合物。

2.3 流動相條件

相比較于甲醇+0.1%甲酸水溶液，乙腈+0.1%甲酸水溶液有著理想的色譜行為。甲酸為磺胺化合物提供質子，能夠保證磺胺藥物離子化順利進行，與此同時，甲酸能夠確保質子化色譜柱內的硅羥基，減少磺胺藥物形成氫鍵，在極高響應效果下，更不會產生拖尾現象。鑒于此，在本次試驗研究中，確定的流動相為乙腈+0.1%甲酸水溶液。

2.4 基質效應

在當前行業人士觀點當中，在進行液相色譜串聯質譜，其中基質形成機理并沒有確定，主要就是在藥物殘留當中，不管是基質還是等待檢測的磺胺藥物，都處于離子源處競爭離子化。經過分析可知，在相同的條件下，開展液相色譜串聯質譜檢測，針對磺胺藥物響應值，與樣品基質之間有著直接的關系，隨著響應值忽強或者是忽弱等現象下，從中并不能總結出相應的規律。鑒于基質效應問題下，本實驗采用陰性樣品基質溶液配制不同濃度的標準溶液。

2.5 線性范圍與檢出限

用 陰 性 樣 品 基 質 溶 液 配 制0.01 μg·mL-1、 0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1和 0.20 μg·mL-1標準工作液，按照上述設定的條件進行分析測定，以質量濃度、峰面積分別作為橫坐標、縱坐標，繪制標準曲線，結果見表3。

表3 各種磺胺藥物的表征參數表

由表3 可知，在0.01 ～0.20 μg·kg-1濃度范圍內，各種磺胺的相關系數r 均大于0.999。檢出限按照3 倍信噪比計算。

2.6 精密度和回收率測定結果

由表4 可知，10 μg·kg-1添加范圍的平均回收率為87.6%～101.0%，相對標準偏差為3.53%～11.60%。

表4 回收率與精密度表

3 結論

本實驗建立了QuEChERS 結合液相色譜-串聯質譜法測定雞肉中12 種磺胺藥物殘留的分析方法，與標準方法相比，大大縮短了前處理周期，節約了檢測成本。本實驗方法操作簡便、快速、準確，可有效去除基質中蛋白的干擾，提高了磺胺藥物測定的靈敏度。