氣相色譜-質譜法測定魚肉中 8 種環境激素的殘留量

◎ 李雪銀，黃孟麗，張 瑩

（南京市食品藥品監督檢驗院，江蘇 南京 210000）

環境激素已成為繼臭氧層、地球氣候變暖之后的第三大環境問題。環境激素通常包括類似于雌激素的外源化學物質（壬基酚、雙酚A、已烯雌酚和17α-乙 炔基雌二醇）和環境中的內源性雌激素（17α-雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇和雌酮）[1-2]。有關環境激素在河流、湖泊、污水處理排放口以及生物體內的監測報道較多，環境激素廣泛存在于水環境中，魚類是水生生態系統中重要的無脊椎動物，環境激素對其危害不容忽視[3-4]。

目前，環境激素的測定方法有液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質譜法和液相色譜-質譜法等[5-8]。本文將對辛基酚、壬基酚、雙酚A、己烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇8 種環境激素進行研究，采用乙酸乙酯提取樣品，固相萃取柱進行凈化處理，經氣相色譜柱分離后，在選擇離子監測模式下采用電子轟擊離子源，對上述8 種環境激素進行測定，建立了同時提取、同時測定的氣相色譜-質譜（GC-MS）定性、定量方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

7890B/5977A 氣相色譜-質譜儀（Agilent 公司）、 ME503T 電 子 天 平（Mettler Toledo 公 司）、A10 超純 水 機（Advantage 公 司）、X-30R 冷 凍 離 心 機（Beckman Allegra 公司）及N-EVAP 45 位水浴氮吹儀（Organomation 公司）。

辛 基 酚（CAS 號：140-66-9，100.0 μg·mL-1）、壬基酚（CAS 號：25154-52-3，100 μg·mL-1）、雙酚A（CAS 號：80-05-7，100.0 μg·mL-1）、雌酮（CAS號：53-16-7，100.0 μg·mL-1）、17α-乙炔雌二醇（CAS號：57-63-6，100.0 μg·mL-1）、17β-雌二醇（CAS 號：50-28-2，100.0 μg·mL-1）和雌三醇（CAS 號：50-27-1， 100.0 μg·mL-1），均購自Dr.Ehrenstorfer 公司。己烯雌酚（CAS 號：6898-97-1，純度96.0%），購自北京曼哈格生物科技有限公司。

環境激素混合標準儲備溶液：20.00 μg·mL-1（其中雙酚A 為10 μg·mL-1），于4 ℃保存。臨用前，用甲醇逐級稀釋配成20.00 ng·mL-1（其中雙酚A 為 10 ng·mL-1）的混合標準工作溶液。

乙酸乙酯、甲醇、丙酮為色譜純；碳酸鈉、無水硫酸鈉為分析純，在650 ℃馬弗爐中灼燒4 h，置于干燥器內備用；試驗用水為超純水；七氟丁酸酐（HFAA）純度≥98%。

1.2 儀器工作條件

色譜條件：初始柱溫120 ℃，保持2 min，以 15 ℃·min-1升至250 ℃，再以5 ℃·min-1升至300 ℃，保持5 min。進樣口溫度：250 ℃；進樣量：1.00 μL； 進樣方式：不分流；色譜柱：HP-5MS（30 m×250 μm× 0.25 μm）。

質譜條件：電離方式為電子轟擊離子源（EI）；電離能量：70 eV；接口溫度：280 ℃；離子源溫度：230 ℃；四級桿溫度：150 ℃；溶劑延遲：7 min。

選擇離子監測（SIM）：辛基酚、壬基酚、雙酚A、己烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇衍生物的監測離子見表1。

表1 8 種環境激素衍生物的監測離子表

1.3 試驗方法

稱取魚肉樣品5 g 于50 mL 離心管，加碳酸鈉溶液3 mL，乙酸乙酯20 mL，漩渦混勻，超聲提取 10 min，4 000 r·min-1離心10 min，取上清液至100 mL梨形瓶中。殘渣用乙酸乙酯10 mL 重復提取一次，合并上清液，于40 ℃旋轉蒸發至干，用50%環己烷-乙 酸乙酯溶液5 mL 溶解殘留物，備用。

固相萃取柱依次用甲醇5 mL、水5 mL 活化，取備用液過柱，控制流速不超過2 mL·min-1，用50%甲醇水溶液10 mL 淋洗，抽干，用甲醇10 mL 洗脫，控制流速不超過2 mL·min-1。收集洗脫液于10 mL 具塞玻璃離心管中，于40 ℃水浴中氮氣吹干。

于上述具塞玻璃離心管中加入七氟丁酸酐30 μL、丙酮70 μL，蓋緊蓋，漩渦混合30 s，于30 ℃恒溫箱中衍生30 min，氮氣吹干，精密加入正己烷0.5 mL，旋渦混合10 s，溶解殘余物，按儀器工作條件進行測定，總離子流色譜圖見圖1。

2 結果與分析

2.1 校正曲線與基質效應

用空白基質魚肉和溶劑甲醇將環境激素混合標準工 作溶液稀釋成系列濃度為3.125 ng·mL-1、6.250 ng·mL-1、12.500 ng·mL-1、25.000 ng·mL-1、50.000 ng·mL-1、100.000 ng·mL-1和200.000 ng·mL-1的標準物質工作溶液（其中己烯雌酚濃度為2.984 ng·mL-1、5.969 ng·mL-1、11.940 ng·mL-1、 23.880 ng·mL-1、95.500 ng·mL-1和191.000 ng·mL-1；雙酚A 濃 度 為1.562 ng·mL-1、3.125 ng·mL-1、6.250 ng·mL-1、 12.500 ng·mL-1、25.000 ng·mL-1、50.000 ng·mL-1和 100.000 ng·mL-1），同法衍生。上機測試后，以濃度為橫坐標，待測物峰面積為縱坐標繪制校正曲線，在規定的濃度范圍內，校正曲線相關系數均大于0.99，線性關系良好，線性回歸方程及相關系數見表2。

基質效應評價依據：ME（%）=|Slope 基質/Slope溶劑-1|×100（ME 絕對值＞50，強基質效應；20＜ME絕對值＜50，中等基質效應；ME 絕對值＜20，無基質效應）。由表2 可知，8 種環境激素均屬于強基質效應，基質標曲響應比溶劑標曲高，基質起增強的效應，故采用基質標定量。

圖1 8 種環境激素類化合物的總離子流色譜圖

表2 線性回歸方程、相關系數、基質效應表

2.2 方法回收率及精密度

在魚肉空白樣品中分別加入不同濃度水平的8 種環境激素混合標準溶液，按試驗方法處理后進行測定，每組平行測定6 次，結果見表3。在魚肉基質中8 種化合物的回收率為71.64%～91.08%，測定值的相對標準偏差為1.04%～3.20%，說明方法精密度良好，符合殘留分析的要求。

表3 回收試驗結果和精密度表（n=6）

續表3

2.3 樣品分析

按試驗方法測定了市場上常見的魚肉如黑魚、鯽魚、桂魚、鱸魚和鯧魚等樣品，在測定的30 多個樣品中，均未檢出8 種環境激素。

3 結論

本文采用氣相色譜-質譜法測定了魚肉中8 種環境激素殘留量，采用HP-5MS 色譜柱分離，質譜測定中采用電子轟擊離子源，選擇離子監測模式進行定性及定量分析。方法具有靈敏度高、準確度和精密度好的特點，適合于實際樣品的檢測。