HPLC法測定消栓顆粒劑中黃芪甲苷的含量

王法宇 吳迪 趙鳳明 袁家欣

【摘 要】 目的：建立在消栓顆粒劑中有效成份黃芪甲苷的HPLC-ELSD含量測定方法。方法：用Nanologica SVEA C18色譜柱（250mm×4.6mm，5m）采用HPLC-ELSD法測定黃芪甲苷，蒸發光散射檢測器（SEDEX-55型），柱溫箱為25℃，流動相為乙腈∶[KG-*3/5]水（35∶[KG-*3/5]65），流速為1.0mL/min。結果：黃芪甲苷在0.2742～1.1492g內有良好的線性關系R=0.9994（n=6），平均回收率為99.16%，RSD為1.21%。結論：本方法操作簡單快捷，結果準確可靠，重復性好，可用于消栓顆粒劑的質量控制。

【關鍵詞】 黃芪甲苷;高效液相色譜法;蒸發光散射檢測器;含量測定

【中圖分類號】R284 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2021）1-0031-03

Determination of Astragaloside in Xiaoshuan Granules by HPLC

WANG Fayu1 WU Di2 ZHAO Fengming3 YUANJiaxin3

1.Beijing Pharmaceutical Group staff University， Beijing 100079，China;2.Baicheng food and Drug Inspection Institute， Baicheng 137000， China;

3.Jilin Aodong Deer Industry Co.， Ltd. Changchun 130021， China

Abstract：Objective To establish an HPLC-ELSD method for determining the effective component of astragaloside A in Xiaoshuan Granules. MethodNanologica SVEA C18 column （4.6mm×250mm， 5m） HPLC-ELSD determination of astragaloside， SEDEX-55 type evaporative light scattering detector， column temperature box is 25℃， mobile phase is acetonitrile： water （35∶[KG-*3/5]65 ）， Flow rate∶[KG-*3/5]1.0mL/ min. ResultsAstragaloside A is in the range of 0.2742～1.1492g， the linear relationship between the injection volume and the peak area integral value is good， the average recovery rate of R2 =0.9994 （n=6） is 99.16%， and the RSD is 1.21%.ConclusionThe method is simple， accurate， reliable and reproducible for the quality control of Xiaoshuan granule.

Keywords：Astragaloside A;HPLC;ELSD;Assay

消栓顆粒劑出自清朝名醫王清任的《醫林改錯》卷下癱痿論方[1]。該方特點為重用黃芪為君藥，其黃芪用量是其它活血藥總和的約3倍，方中重用的黃芪中含有多糖及黃芪甲苷[2-4]，同時黃芪還具有抗炎、增強免疫[5-6]、抗氧化[7]、保護心臟[8]、調脂[9]、降血糖[10]等作用。黃芪甲苷作為黃芪的主要有效成分，在我國藥典中有含量測定并有相關含量限度規定[11]。本研究建立消栓顆粒劑中黃芪甲苷含量測定方法，進一步細化藥品的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器 液相色譜儀（Agilent 1100） 檢測器為四元泵二極管陣列，數據轉換器為Agilent35900E蒸發散射檢測器（SEDEX-55），單元泵（DXNamax-SD-200） ，AgII空氣發生器電子天平（Mettler instrument Corp），超聲波提取器（型號GT-350W型濟寧科特超聲電子有限公司）。

1.2 藥品 消栓顆粒（ 自制的三批藥品分別為20190905 20190904 20190902）自制的黃芪陰性對照;黃芪甲苷對照品（中檢所110781201717）;乙腈（色譜純）;其它試劑（分析純）。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備 ①供試品溶液的制備：取本品7g，精密稱定，加氨試液40mL移至具塞三角瓶中搖勻，密閉，過夜。取此提取液以40mL水飽和正丁醇萃取，共萃取3次后合并正丁醇萃取液，將其水浴蒸干，殘渣以甲醇溶解后移至5mL容量瓶中，并稀釋到刻度，然后取上清液，用濾膜過濾（0.45L），即得;②對照品溶液配制：稱取黃芪甲苷對照品0.5mg加甲醇配制成每毫升含0.5mg的溶液;③陰性對照：按上述工藝配制缺黃芪的陰性對照品溶液。精密吸取上述①②③各10L測定。結果①和②在相同時間內出現相對應的色譜峰，而③則未出現。相關圖譜如圖1所示。

2.2 色譜條件 Nanologica SVEA C18色譜柱（250mm×4.6mm，5m）;以乙腈-水（35∶[KG-*3/5]65）為流動相;蒸發光散射檢測器。1.0mL/min為流速，柱溫為25℃，理論塔板數不低于4000，以黃芪甲苷峰計算。進樣量為10L。

2.3 標準曲線與線性范圍 黃芪甲苷對照品溶液（濃度為0.47mg/mL）精密吸取4～30L，進行測定峰的面積，縱坐標（Y）為峰面積log值，橫坐標（X）為進樣量log值，回歸處理，結果顯示黃芪甲苷在0.2742～1.1492g范圍內，峰面積的積分值與進樣量之間呈良好的線性關系，回歸方程為Y=1.4709X+2.7033，R=0.9994（n=6）。

2.4 精密度試驗 精密地吸取上述同一對照品溶液10L，在測試的條件和測試的地點相同的前提下，重復進樣6次后測定黃芪甲苷的峰面積，并計算相對標準偏差，取6次RSD的平均值以記錄。結果表明黃芪甲苷的平均峰面積為5527.88，RSD為1.45%，該方法精密度較好。

2.5 重復性試驗 同批次的樣品為供試品，按上文所述的方法配制供試品溶液，依上述方法重復進行含量平行測定。黃芪甲苷重復性試驗結果的平均值為7919.53，RSD為1.63%。由以上可知，此方法的重復性良好。

2.6 穩定性實驗 取本品供試品溶液，分別放置0～24h，每次吸取10L測定。結果平均峰面積為7519.55，RSD為1.87%。結果顯示，供試品溶液在24h內穩定。

2.7 加樣回收率 精密地稱取已知含量的同一樣品6份，其每份黃芪甲苷含量約1.25mg。精密地加入對照品溶液（含黃芪甲苷為1.2404mg）按以上樣品測定項下的方法提取，測定含量并計算回收率，平均回收率為99.16%，RSD為1.21%，結果見表1。

2.8 檢出限 取黃芪甲苷對照品配置成濃度為0.001mg/mL、0.002mg/mL、0.003mg/mL、0.004mg/mL、0.005mg/mL、0.006mg/mL、0.008mg/mL、0.01mg/mL的對照品溶液，分別注入高效液相色譜儀，進樣量為10L，計算不同進樣量的信噪比，經測定，濃度為0.005mg/mL的黃芪甲苷進樣量為10L時，其信噪比為3，因此確定黃芪甲苷的最低檢出限為0.05g。

2.9 樣品含量測定 取10批次的上述樣品，按供試品溶液的方法配制并測定其峰面積，再用外標兩點法對數方程計算樣品中黃芪甲苷的含量，測定結果見表2。考慮到每批藥材之間質量差異和生產實際，最后將黃芪甲苷的含量定為不低于0.70mg/g。

3 討論

黃芪為方中君藥，其主要成分黃芪甲苷的含量測定可以做為控制消栓顆粒劑質量的指標性成份。本試驗結果顯示，黃芪甲苷平均加樣回收率為 99.16%，RSD 為1.21%。樣品中黃芪甲苷出峰時間為15.6min，且樣品峰與其他峰的分離度很好。陰性對照試驗表明，除黃芪外的其他原輔料不干擾樣品中黃芪甲苷的含量測定。表明本結果準確，重復性良好，可用于對消栓顆粒劑的質量控制，從而保證臨床應用中制劑的療效和安全。

參考文獻

[1]馬培鋒. 《醫林改錯》的學術價值[J]. 中國中醫藥現代遠程教育，2018，16（7）：65-66，82.

[2]劉德麗，包華音，劉楊.近5年黃芪化學成分及藥理作用研究進展[J]. 食品與藥品，2014，16（1）：68-70.

[3]張秋海，丁家欣，李樹莉，等. 不同生長年限黃芪中黃芪甲苷和多糖含量比較[J]. 中國中醫藥信息雜志，2014，21（11）：79-82.

[4]張峰，高鵬，彭俊華. 黃芪多糖及黃芪甲苷對巨噬細胞吞噬結核桿菌作用的研究[J]. 西北國防醫學雜志，2005，26（6）：434-436.

[5] 王琳，閆晨. 玉屏風散中黃芪甲苷的制備及抗炎作用的研究[J]. 天津藥學，2007，19（1）：31-32，55.

[6]楊志霞，王琦.黃芪多糖免疫作用的基礎與臨床研究進展[J]. 世界中醫藥，2013，8（7）：833-836

[7]肖文珍，桂定坤，陳廷芳，等. 黃芪甲苷的抗氧化應激作用對體外高糖刺激足細胞的保護作用[J]. 中國中西醫結合腎病雜志，2013，14（5）：384-387.

[8]王煥珍，張惠鵬，趙東亮，等. 黃芪甲苷對肥大心肌細胞表面積及維生素D軸相關基因表達的影響[J]. 時珍國醫國藥，2018，29（4）：799-802.

[9]韓冬.黃芪甲苷對實驗性糖尿病大鼠降糖、調脂和抗氧化作用的研究[J]. 現代中西醫結合雜志， 2016，25（4）：360-364.

[10]尤良震，林逸軒，方朝暉，等. 黃芪甲苷治療糖尿病及其并發癥藥理作用研究進展[J]. 中國中藥雜志，2017，42（24）：4700-4706.

[11]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業出版社，2015：302.

（收稿日期：2020-07-16 編輯：陶希睿）