HPLC法測定蒙成藥優日勒-13中梔子苷的含量

李玉華　姜楠

【摘 要】 目的：建立HPLC法測定蒙成藥優日勒-13中梔子苷的含量。方法：采用Welch Ultimate Plus C18色譜柱（250mm×4.60mm，5μm），柱溫40℃，檢測波長238nm。乙腈-水（9∶91）為流動相，流速1.0mL/min。結果：梔子苷在0.0515～0.927μg范圍內呈良好的線性關系，相關系數r=0.9999，平均回收率為99.01%，RSD為0.83%。結論：該方法專屬性強，準確度高，操作簡單，可作為優日勒-13中梔子苷含量測定的方法。

【關鍵詞】 優日勒-13;HPLC法;梔子苷;含量測定

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2021）04-0049-03

Abstract：Objective To establish the high performance liquid chromatography （HPLC） method for the determination of Geniposide in Mongolian Yourile-13.Methods The HPLC was carried out with Welch Ultimate Plus C18 using acetonitrile-water （9∶91） as a mobile phase at a flow rate of 1.0mL/min.The detection wavelength was 238 nm and the column temperature was 40℃. Rseults The linear of Geniposide was in the range of 20.26-67.52μg/mL（r=0.9999）.The average recovery was 99.01%（RSD=0.83%）.Conclusion This method is simple， high accuracy and specificity. It can be used for the determination of Geniposide content.

Keywords：Yourile-13; HPLC ; Geniposide; Content determination

優日勒-13由梔子、木香等13味藥組成，用于“寶日”病，胃腸痧癥，嘔吐，腹瀉，消化不良，蟲疾等[1]。梔子（Gardenia jasminoides Ellis）是蒙成藥常用藥材，具有解熱鎮痛、抗炎[2]、鎮靜催眠、保肝利膽、防止動脈粥樣硬化 [3]，以及抗氧化[4] 和保護神經系統[5]等多種藥理作用。作為臨床常用的蒙藥醫院制劑，優日勒-13療效確切，未見任何不良反應發生。但目前為止，該成藥質量控制的標準還停留在1988年版的《內蒙古蒙成藥標準》補充本階段，只有簡單的外觀性狀和檢查項目[6]。建立優日勒-13中主要藥效成份梔子苷含量測定的方法，能有效控制該成藥的內在質量，為該成藥質量標準的提升提供參考[7]。

1 儀器及材料

1.1 儀器 島津LC-2030C液相色譜儀，島津LC-16A液相色譜儀，LabSolution工作，92SM-202A型電子天平，XS3DU電子天平，KQ5200DE超聲波清洗機。

1.2 材料 水為高純水，乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純。梔子苷對照品購于中國食品藥品檢定研究院，批號為110749—201718，含量97.6%;優日勒-13樣品來源如下：樣品1由內蒙古民族大學附屬醫院蒙藥制劑室提供，批號為20191028，樣品2、3由庫侖蒙醫醫院制劑室提供，批號分別為20170507和20171102。

2 方法學考察

2.1 色譜條件[8] Welch Ultimate Plus C18色譜柱（250mm×4.60mm，5μm），Sepax Bio C18色譜柱（250mm×4.60mm，5μm），柱溫40℃，檢測波長238nm。乙腈-水（9∶91）為流動相，流速1.0mL/min，進樣量10μL。

2.2 對照品溶液與供試品溶液配制[9-10] 精密稱取梔子苷對照品6.252mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得梔子苷對照品溶液（62.52μg/mL）。

取樣品粉末（過四號篩）約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50Hz）30min，放冷，再次稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.3 專屬性試驗 取按處方比例制備的不含梔子藥材的陰性對照供試品，按2.2項下供試品溶液制備法制得陰性對照溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果陰性對照色譜圖中在與梔子苷對照品以及供試品色譜圖相對應的保留時間處無色譜峰出現，表明該方法專屬性強，其他組分對梔子苷的測定無干擾。色譜圖見圖1。

2.4 線性關系 考察精密稱取梔子苷對照品10.30mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得梔子苷對照品貯備液（0.1030mg/mL）。精密吸取該貯備液50、100、300、500、600、900μL，分別置于10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述各梯度濃度的對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品峰面積Y為縱坐標，相應的對照的量X為橫坐標，進行線性回歸。得到梔子苷回歸方程為：Y=14121X，r=0.9999。結果表明梔子苷在0.0515～0.927μg范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 按2.2項下供試品溶液配制方法，精密稱取庫侖蒙醫醫院制劑室提供，批號為20171102的樣品1.0218g，配制成精密度試驗溶液，精密吸取該溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積。重復進樣6次，測得峰面積的RSD值為1.13%，表明該方法精密度良好。

2.6 穩定性試驗 取庫侖蒙醫醫院制劑室提供，批號為20171102的3號樣品1.0183g，按2.2項下供試品溶液制備方法配制穩定性試驗溶液，室溫放置，分別在0，1，3，6，12，24hr進樣，記錄譜圖，測得峰面積。結果24h內峰面積的RSD值為0.93%，表明該方法提取的樣品溶液在24h內基本穩定。

2.7 重復性試驗 取庫侖蒙醫醫院制劑室提供，批號為20171102的3號樣品6份，每份約1.0g，精密稱定，按2.2項下供試品溶液制備方法配制重復性試驗溶液，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算含量，結果6份平行樣的含量RSD值為1.03%。表明該方法重復性良好。

2.8 準確度及范圍[8] 取已知含量的樣品（庫侖蒙醫醫院制劑室提供，批號：20171102，含量為1.4847mg/g）9份，每份約0.05g，精密稱定，置25mL棕色量瓶中，精密加入梔子苷對照品貯備液（0.1030mg/mL）4.5、9、12mL，按2.2項下供試品溶液配制方法，配制成高、中、低三個濃度的加標回收溶液，精密量取各加標回收溶液10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算回收率，結果見表1。三個濃度加標回收率平均值為99.01%，RSD值為0.83%。表明梔子苷含量在0.75～1.90mg范圍內測得結果準確可靠。

2.9 色譜柱、儀器設備的耐用性試驗 換不同廠家、不同型號的色譜柱及不同的液相色譜儀，取庫侖蒙醫醫院制劑室提供，批號為20171102的3號樣品，精密稱定，按2.2項下配制樣品溶液，精密吸取該樣品溶液和2.2項下的對照品溶液各10μL注入液相色譜儀，測定峰面積，計算樣品中梔子苷含量。結果見表2。

從表中數據可以看出，梔子苷的含量變化不大（RSD值0.96%），表明該方法對不同色譜柱和儀器設備耐用性良好。

3 樣品含量測定[11]

分別取3個廠家提供的優日勒-13樣品粉末約1.0g，精密稱定，按2.2項下供試品溶液制備方法提取制備樣品溶液，精密吸取10L，注入液相色譜儀，記錄峰面積，測定結果見表3。

4 討論

參照《中國藥典》2015[6]年版一部“梔子”含量測定項下梔子苷的測定方法，以乙腈-水（15∶85）為流動相，結果目標峰梔子苷與其它干擾組分峰分不開。調整流動相乙腈和水的比例，至乙腈-水（9∶91），此時目標峰梔子苷與其它干擾組分分離較好，保留時間適宜，理論塔板數較高。故作為檢測流動相。

成藥粉末以甲醇作為提取溶劑進行超聲提取（功率120W，頻率40kHz），為保證梔子苷成分提取完全，實驗中考察了超聲提取15min、30min和60min，結果梔子苷的含量基本一致（RSD 0.51%），故提取時間定為30min。

通過專屬性，精密度，穩定性、重復性試驗，色譜柱及不同儀器設備的耐用性考察，結果表明該方法準確可靠，可作為優日勒-13中梔子苷含量測定的方法。

參考文獻

[1]內蒙古醫學院中醫系.蒙醫藥選編[M].呼和浩特：內蒙古人民出版， 1974.

[2]游偉良，平其能，孫敏捷，等 . 梔子苷的藥理學研究新進展[J]. 藥學進展，2012，36（4）：158-161.

[3]李兆星，申潔，畢武，等.中國梔子屬植物資源及利用研究進展[J]. 中藥材，2017，40（2）：498-503.

[4]陳麗萍，王先敏，李茂星，等.梔子中抗氧化的活性成分研究[J].華西藥學雜志，2018，3（2）：179-182.

[5]向紹通，徐書雯，肖豪，等.梔子苷通過ERK1/2-Nrf2 通路發揮對Aβ25-35誘導的阿爾茲海默病大鼠模型的神經保護作用[J].華中科技大學學報：醫學版，2018，47（1）：7-32，37.

[6]內蒙古衛生廳.內蒙古蒙成藥標準1988年補充本[M].呼和浩特：內蒙古人民出版社，1988.

[7]畢力夫，蒙藥質量標準化研究[M].呼和浩特：內蒙古人民出版社，2007.

[8]國家藥典委員會，中國藥典（一部、四部）[M].2015年版.，北京：中國醫藥科技出版社，2015.

[9]張文文，石翠，馬桂芝.古日古木-13丸劑定性鑒別及梔子苷含量測定研究[J].新疆醫科大學學報， 2019，42（12）：1619-1622.

[10]李蒙華，古麗巴哈爾·艾力，等.蒙藥拉哈如各貢斯勒散的定性鑒別及含量測定[J]西北藥學雜志，2019（6）：715-718.

[11]張小琴，湯晟凌，呂偉旗.10 種含梔子中藥制劑中梔子苷與西紅花苷-Ⅰ的同時測定[J].中成藥，2016，38（3）：569-574.

（收稿日期：2020-08-23 編輯：劉斌）