棕色蘑菇雜交新品種的選育*

郭仲杰，蔡志欣，曾志恒，盧圓萍，陳美元，廖劍華

（福建省農業科學院食用菌研究所 特色食用菌繁育與栽培國家地方聯合工程研究中心，福建 福州 350014）

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試的棕色蘑菇ARP088、MC441和白色蘑菇As2796，均由福建省農業科學院食用菌研究所遺傳育種研究室提供。

1.2 培養基

PDA 培養基：馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1000 mL，pH自然；

發酵棉籽殼試管培養基：發酵棉籽殼65%、發酵牛糞粉20%，麩皮12%、石灰1%，石膏1%、輕鈣1%、含水量65%；

培養料：二次隧道發酵的麥秸雞糞培養料；栽培種：自制的透氣袋小米栽培種。

1.3 方法

1.3.1 雜交技術

不育單孢菌株的分離、培養、鑒定和配對雜交技術，雜交菌株的篩選、鑒定方法均參考文獻[5～7]。

1.3.2 酯酶同工酶標記測定

酯酶同工酶電泳樣品和聚丙烯酰胺凝膠制備、電泳方法和結果分析均參考文獻[8,9]。

1.3.3 生物學特性測定

⑴ 溫度試驗

采用發酵棉籽殼培養基法：將同一菌株接種于試管發酵棉籽殼培養基，分別在5、10、15、20、25、30 ℃和35 ℃條件下培養，3個重復，觀測其走菌速率。

⑵ 含水量試驗

采用發酵棉籽殼培養基法：將同一菌株分別含水量為50%、55%、60%、65%、70%接種于試管發酵棉籽殼培養基，25 ℃條件下培養，3個重復，觀測其走菌速率。

⑶ pH值試驗

采用PDA培養基法：分別配制pH值為4、5、6、7、8、9和10的PDA平板培養基，將同一菌株接種于其中，25 ℃條件下培養，3個重復，觀測其走菌速率。

1.3.4 栽培篩選

⑴ 初篩試驗

采用塑料筐栽培法，每筐栽培面積為0.17 m2，培養料填投量為100.0 kg/m2，栽培種播種量為1.0 L/m2，混播。每個菌株3個重復，床架上隨機排列。

⑵ 復篩試驗

采用床架式分區栽培法，每區栽培面積1.0 m2，培養料填投量為100.0 kg/m2，栽培種播種量為1.0 L/m2，混播。每個菌株3個重復, 床架上隨機排列。

⑶ 中試試驗

采用空調控溫菇房床架式栽培法，每個菌株栽培面積100.0 m2，培養料填投量為100.0 kg/m2，栽培種播種量為1.0 L/m2，混播，每個菌株3個重復。

在初篩、復篩和中試生產試驗過程中，播種、覆土時間同步進行，栽培管理按常規方式。分別觀察不同菌株的菌絲生長速率、農藝性狀和產質量。

2 結果與分析

2.1 雜交選育

以酯酶同工酶為標記，從棕色蘑菇ARP088分離出不育單孢菌株10株；從白色蘑菇As2796分離出不育單孢菌株29株，配對雜交，獲得雜交新菌株36株。其中M026是不育單孢菌株ARP088-S9與As2796-S1雜交獲得新雜交菌株。

2.2 生物學特性

2.2.1 溫度試驗

測定結束后，將5 ℃和35 ℃條件下的培養基轉接開PDA平板培養基上，5 ℃條件下的接種塊重新蔭發走菌；35 ℃條件下接種塊沒有蔭發。雜交新菌株M026菌絲生長的溫度試驗結果見表 1。不同溫度的菌絲生長試驗結果表明，雜交新菌株M026的菌絲生長溫度范圍為10～35 ℃，適宜生長溫度為25 ℃，休眠溫度為5 ℃，致死溫度為35 ℃。

表1 不同溫度下M026菌絲生長速率

表2 不同含水量下M026菌絲生長速率

表3 不同pH值培養基下M026菌絲生長速率

2.2.2 含水量試驗

雜交新菌株M026菌絲生長的含水量試驗結果見表2。不同含水量的培養基的菌絲生長試驗結果表明，雜交新菌株M026的菌絲生長的適合范圍為50%～70%，適宜生長的范圍為50%～65%。

2.2.3 pH 值試驗

在不同pH值的平板培養基上，雜交新菌株M026的菌絲生長試驗結果表3。

不同pH值的平板培養基菌絲生長試驗結果表明：雜交新菌株M026的菌絲在PDA平板上生長的pH值范圍為5～10，適宜生長平板pH值為7。

2.3 同工酶標記鑒定

雜交新菌株M026的酯酶同工酶標記鑒定結果見圖1。

雜交新菌株W192的酯酶同工酶表型為HG5型，呈典型的雜合態。

2.4 栽培篩選

2.4.1 初篩試驗

根據子實體的顏色，淘汰了白色或米黃色菌株；根據子實體單粒重量和菌蓋平均直徑，淘汰了3株朵形較小的菌株，同對照菌株MC441的單位平均產量相比較，淘汰了產量低的菌株，優選部分雜交棕色菌株進入復篩試驗。

圖1 雜交新菌株M026的酯酶同工酶圖譜

2.4.2 復篩試驗

部分復篩雜交菌株的出菇、產量和單粒重的結果見表5。

表5 部分復篩參試菌株的出菇、產量和單粒重表

表6 中試試驗菌株的子實體農藝性狀

表7 中試試驗菌株的出菇、產量和單粒重結果

初篩優選出的菌株經過復篩比較試驗的結果表明，雜交新菌株M026與對照MC441相比較，產量提高了14.4%，單粒重量提高8.8%。

2.4.3 中試試驗

中試菌株的子實體農藝性狀結果見表6，出菇、產量和單粒重結果見表7。

在中試試驗中，棕色蘑菇雜交新菌株M026菌蓋呈棕色、圓整厚實，采摘后沒有褐變，菌柄長度直徑適中；子實體單生，管理方便；與對照MC441相比較，產量提高12.4%，單粒重量提高13.0%。

3 討論

雙孢蘑菇新菌株的選育方法主要采用不育單孢分離雜交技術，該技術在白色雙孢蘑菇新品種選育上運用非常成熟，而國內棕色蘑菇的選育少有運用不育單孢分離雜交技術的報道。

本研究運用單孢分離雜交技術雜交出新棕色菌株，通過酯酶同工酶標記鑒定，出菇栽培篩選方法，得到了高產優質的新棕色菌株M026，為改變我國蘑菇栽培品種長期以來單一白色品種的局面和商品多元化做了前期探索。由于棕色蘑菇種質資源少，在棕色蘑菇不同菌株內進行雜交育種，雜交范圍窄，存在較難獲得優質高產的遺傳的可能性。今后運用白色雙孢蘑菇與棕色蘑菇進行雜交育種，是棕色蘑菇新品種選育新途徑。