廣州地區女性泌尿生殖道HPV感染特征及混合感染基因型分析

龔 婭，段德令，何 雄，史秋霞，沈雪曼，余文鳳

中國人民解放軍南部戰區總醫院白云院區檢驗科，廣東廣州 510510

人乳頭瘤病毒(HPV) 屬乳頭瘤病毒科，是環狀雙鏈DNA病毒，由病毒蛋白外殼及核心DNA物質構成。HPV具有嗜黏膜和皮膚上皮性的特點，多達100多種基因型，其中40余種可感染泌尿生殖系統，約20余種與腫瘤相關[1]。HPV根據其致病性分為高危型和低危型，每一型又包含多種HPV基因型，HPV感染后多數具有自限性，能自我清除，臨床常無明顯癥狀，不易被識別，對HPV的定期篩查是預防宮頸癌發生的有效措施。本研究采用聚合酶鏈反應(PCR)體外擴增技術與DNA反向點雜交法相結合的HPV基因分型技術對3 491例女性HPV不同基因型的檢測結果進行分析研究，為本地區女性宮頸癌的早期防治提供參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年10月至2019年10月來本院婦科門診就診的女性共3 491例為研究對象，年齡16～81歲，平均37.2歲。

1.2標本采集 由臨床醫師將采樣刷插入宮頸口采集宮頸脫落細胞，以宮頸口為中心，稍用力順時針均勻旋轉4～5圈，采樣刷放在專用細胞保存液中，立即送檢。

1.3檢測方法 HPV基因型檢測采用深圳亞能生物技術有限公司檢測試劑盒及羅氏公司LC-480熒光定量PCR擴增儀，然后利用核酸分子快速膜雜交技術使目的分子與固定有DNA探針的低密度基因芯片薄膜發生快速雜交，根據芯片上23種HPV基因型分布的相應著色點判讀結果，所有操作嚴格按照試劑說明書進行。其中18種高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83基因型；5種低危型HPV包括HPV6、11、42、43、81基因型。

1.4統計學處理 采用Excel2013統計軟件建立數據庫，并進行數據處理。

2 結 果

2.1不同年齡組女性HPV各基因型感染情況 3 491例女性中，18種高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83基因型的陽性率分別為4.15%、1.23%、0.95%、1.03%、0.80%、1.49%、0.43%、2.52%、7.53%、2.58%、1.72%、3.21%、1.98%、1.06%、2.58%、0.40%、0.26%、0.26%；5種低危型HPV6、11、42、43、81基因型陽性率分別為1.23%、0.72%、1.95%、1.72%、2.81%。不同年齡組女性部分HPV基因型感染情況見表1。

表1 不同年齡組女性部分HPV基因型感染情況[n(%)]

年齡(歲)n52型53型56型58型59型68型81型<2638541(10.65)8(2.08)11(2.86)16(4.16)13(3.38)12(3.12)12(3.12)26～<361 26697(7.66)34(2.69)23(1.82)27(2.13)28(2.21)35(2.76)16(1.26)36～<461 06769(6.47)29(2.72)13(1.22)34(3.19)14(1.31)19(1.78)29(2.72)46～5565046(7.08)13(2.00)6(0.92)25(3.85)12(1.85)17(2.62)27(4.15)>5512310(8.13)6(4.88)7(5.69)10(8.13)2(1.63)7(5.69)14(11.38)合計3 491263(7.53)90(2.58)60(1.72)112(3.21)69(1.98)90(2.58)98(2.81)

2.2不同年齡組HPV單一和混合感染情況 HPV總陽性率為28.59%，單一感染、二重感染、三重感染、四重感染、五重感染、六重感染、七重感染、八重感染的陽性率分別為19.31%、6.22%、1.98%、0.74%、0.20%、0.06%、0.06%、0.03%，不同年齡組單一和混合感染情況見表2。單一感染、二重感染、三重感染、四重感染、五重感染、六重感染、七重感染、八重感染在感染者中所占構成比分別為67.54%、21.74%、6.91%、2.61%、0.70%、0.20%、0.20%、0.10%。<26歲、26～<36歲、36～<46歲、46～55歲、>55歲5個年齡組女性陽性率分別為35.84%、27.09%、26.52%、27.85%、43.09%。

2.3不同HPV基因型混合感染 在3 491例女性中，23種HPV基因型感染中混合感染占比較高的為HPV35、45、66、6、82基因型，分別為75.00%、73.33%、70.27%、67.44%、66.67%。不同HPV基因型感染時其混合其他基因型感染頻率前5位組合，見表3。

表2 不同年齡組HPV單一和混合感染情況[n(%)]

表3 不同HPV基因型混合感染情況

3 討 論

人類是HPV唯一宿主，人體感染HPV后，經過潛伏期后可出現HPV大量繁殖，導致皮膚黏膜鱗狀上皮增殖，幾乎所有宮頸癌患者的病理標本中均可找到HPV高危型病毒[2]。有研究顯示，超過75%的女性會在不同階段感染HPV，HPV陽性率與年齡及性行為習慣密切相關，年輕且多性伴侶的女性陽性率較高，高峰年齡多在18～28歲，且多為一過性感染[3]。本研究結果顯示，HPV總陽性率為28.59%，高于包細儉等[4]報道的陽性率(24.00%)，各地報道的HPV陽性率不盡相同，不同地區的陽性率差異可能與HPV檢驗方法的多樣性有關，也可能因為不同地區感染高危因素不同所致。<26歲、26～<36歲、36～<46歲、46～55歲、>55歲這5個年齡組陽性率分別為35.84%、27.09%、26.52%、27.85%、43.09%，各年齡組HPV感染陽性率呈“U”型結構，年輕女性和絕經期女性陽性率明顯升高，年輕女性性活躍程度是影響HPV感染的危險因素，而絕經期女性的HPV感染與此年齡段卵巢功能減退，激素水平下降，陰道微生物改變導致感染機會增加密切相關[5]。在<26歲年齡組中，HPV51型陽性率明顯高于其他年齡組，>55歲女性HPV 52、58、81型陽性率明顯高于其他年齡組，各年齡組中不同的基因型陽性率不盡相同，但年輕女性免疫力較強，HPV感染往往為一過性，持續感染是宮頸癌發生的重要條件，因此，定期進行HPV基因分型檢測，以便發現持續感染患者，是臨床篩查和預防宮頸癌的有效手段，對預防宮頸癌的發生有重要價值。

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，該疾病發生率呈上升趨勢，主要為HPV持續感染引起，尤其是高危型HPV感染患者宮頸癌發生率更高[6]。HPV的基因型較多，根據病毒的感染狀態不同可分為單一感染和混合感染[7]；不同基因型的HPV其編碼外殼蛋白的基因存在較大變異，不同基因型的HPV相互間不產生交叉保護抗體，因此，常出現不同型別HPV的混合感染或交叉感染情況[8-9]。本研究結果顯示，在998例HPV感染患者中，單一感染占67.54%，混合感染占32.46%，其中二重感染、三重感染、四重感染、五重感染、六重感染、七重感染、八重感染在感染者中所占構成比分別為21.74%、6.91%、2.61%、0.70%、0.20%、0.20%、0.10%。常見HPV感染基因型為HPV52、16、58型，與黃春優等[10]報道的常見基因型為HPV16型有所不同。HPV52型陽性占感染患者的1/4以上，尤其在混合感染患者中，多數基因型最常混合HPV52型感染，無論是單一感染還是混合感染，HPV52型在本地區均最為常見。近年來有相關研究顯示，HPV52型在我國許多地區已上升為常見的感染型別[11-12]。然而，各基因型間的致病性不盡相同，原因可能為各基因型的感染形式不同。有報道指出，單一HPV持續感染可使宮頸癌的患病風險增加19.9倍，多重HPV持續性感染可使宮頸癌的患病風險增加31.8倍[13-14]。由此可見，單一持續感染和混合感染情況是宮頸癌發生的主要危險因素，是否說明HPV52型會引起宮頸癌發生率的上升還有待進一步研究。本研究結果還顯示，23種基因型多重感染情況不盡相同，易發生混合感染的主要為HPV35、45、66型，分別有75.00%、73.33%、70.27%以混合感染形式存在，這些結果提示，在女性宮頸癌防治過程中，除HPV16、18型外，HPV52、35型等感染也應該得到足夠關注，臨床在治療過程中可根據檢驗結果進行評估，及時采取必要的干預措施。

宮頸癌及其癌前病變受多因素影響，生物學因素在宮頸癌發病中的作用在近年來的研究中備受重視。HPV感染被公認為宮頸癌發病的確切病因，目前HPV的治療并無特異性藥物，通常以預防和改善自身免疫力為主，開展HPV檢測和疫苗接種是預防宮頸癌最有效的措施。本研究結果顯示，23種HPV基因型中混合感染占比較高的為HPV35、45、66、6、82型，分別為75.00%、73.33%、70.27%、67.44%、66.67%。在混合感染中，不同基因型混合感染的型別各有不同，其中與HPV16型混合感染常見的基因型依次為HPV52、58、56、51、31型，與HPV18型混合感染常見的基因型依次為HPV52、53、16、68、51型，與HPV52型混合感染常見的基因型依次為HPV58、68、51、53、81型，與HPV58型混合感染常見的基因型依次為HPV52、81、16、59、56型。表3結果顯示，除HPV52基因型外的其他22種基因型，有18種HPV基因型與其混合感染頻率最高，多重感染時多數基因型常混合HPV52型感染，各基因型混合感染組合模式各異。目前，已經上市的HPV疫苗有2價(HPV16、18型)、4價(HPV6、11、16、18型)、9價(HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58型)HPV疫苗。僅9價HPV疫苗有較廣泛的預防作用，但其價格較昂貴，普通家庭較難承受，因此，盡快研制適合不同地區不同人群的多價HPV疫苗對降低HPV陽性率和宮頸癌的發病率具有重要意義。也有報道指出，HPV可能存在交叉免疫，在接種2價HPV疫苗的人群中，疫苗除對HPV16、18型感染有保護作用外，還對HPV35、52、58、68型有交叉保護作用[15]。

綜上所述，廣州地區女性泌尿生殖道HPV感染以HPV52、16、58型較為常見，混合感染時多數基因型最常混合HPV52型，各基因型混合感染組合模式各異，分析HPV感染特征對宮頸癌防治和疫苗研發、接種有重要價值。本研究對多重感染組合模式的統計分析對本地區的HPV疫苗接種人群提供了一定的參考價值，期待隨著HPV疫苗研究的進一步深入，會有更多適合不同區域流行病學特點的普價HPV疫苗上市。